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补阳还五汤含药血清对体外缺氧损伤神经干细胞增殖及Notch信号通路相关因子mRNA表达的影响
目的:探讨补阳还五汤含药血清对体外缺氧损伤神经干细胞(NSCs)增殖及Notch信号通路相关因子mRNA表达的影响.方法:体外分离培养小鼠胚胎NSCs,取第3代悬浮生长的NSCs随机分组,空白组予以无血清条件培养基常氧培养,其余3组分别给予缺氧4h、缺氧4h加10％正常血清和缺氧4h加10％补阳还五汤含药血清干预;培养第5天观察细胞增殖情况,同时提取细胞总RNA,Real-time PCR检测Notch通路4个关键节点因子Notch-1、Hes-1、Neurogenin-1(Ngn-1)和Delta-like-1(Dll-1) mRNA相对表达水平.结果:正常生长的NSCs Notch-1、Hes-1 mRNA高表达,Ngn-1、Dll-1 mRNA低表达;缺氧4h后NSCs克隆球数减少(P＜0.05),Notch-1、Hes-1 mRNA下调(P.＜0.05),Ngn-1、Dll-1 mRNA上调(P＜0.05);l0％补阳还五汤含药血清能显著上调缺氧NSCs Notch-1,Hes-1、Ngn-1 mRNA以及下调Dll-1 mRNA的表达水平,增加缺氧NSCs克隆球数,与10％正常血清相比差异显著(P＜0.05).结论:调节NSCs Notch信号通路相关因子Notch-1、Hes-1、Ngn-1、Dll-1 mRNA的表达水平可能是补阳还五汤促进缺氧损伤后NSCs增殖的机制.
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白地祛脂合剂对人皮脂腺细胞雄激素受体表达的影响
目的:研究白地祛脂合剂对人皮脂腺细胞雄激素受体信使RNA(mRNA)和胞质蛋白表达的影响,探讨中药治疗痤疮的作用机制.方法:采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术分别检测正常组,低、中、高剂量白地祛脂合剂组作用皮脂腺细胞24h后雄激素受体mRNA的表达情况;采用免疫印迹法(Western Blot)方法检测人皮脂腺细胞胞质蛋白中雄激素受体的表达情况.结果:PCR显示:低、中、高剂量白地祛脂合剂组均使皮脂腺细胞雄激素受体(AR)mRNA表达降低,分别为正常组人皮脂腺细胞的0.592、0.438、0.223倍(P＜0.05),呈现一定的量效关系,而高剂量白地祛脂合剂组皮脂腺细胞AR mRNA表达降低为明显;Western Blot显示:低、中、高剂量白地祛脂合剂组均使皮脂腺细胞雄激素受体胞质蛋白表达降低,分别为正常组人皮脂腺细胞的0.805、0.652、0.550倍(P＜0.05),呈现一定的量效关系,而高剂量白地祛脂合剂组皮脂腺细胞AR蛋白降低为明显.结论:白地祛脂合剂可能通过抑制人皮脂腺细胞AR的表达而具有拮抗雄激素受体对皮脂腺细胞的活性作用,这将为中医药治疗痤疮提供新的治疗途径,有助于从分子层次了解其作用机制.
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血府逐瘀胶囊对AMI大鼠血清ICAM-1及肾脏组织ICAM-1 mRNA表达的影响
目的:观察血府逐瘀胶囊对大鼠心肌缺血后血清细胞间黏附分子-1(ICAM-1)含量及肾脏组织ICAM-1mRNA表达的影响.方法:将42只SD大鼠分为空白组8只、7d模型组8只、7d治疗组9只、14d模型组8只及14d治疗组9只,检测各组大鼠血清ICAM-1含量及肾脏组织ICAM-1 mRNA表达情况.结果:与空白组相比较,7及14d模型组大鼠血清ICAM-1含量及肾脏组织ICAM-1 mRNA表达均显著升高(P＜0.01);经血府逐瘀胶囊治疗后,血清ICAM-1含量及肾脏组织ICAM-1 mRNA表达明显下降(P＜0.05,P＜0.01).结论:大鼠急性心肌梗死后血清炎症因子ICAM-1和肾组织中炎性因子ICAM-1 mRNA表达升高,血府逐瘀胶囊治疗可抑制循环及肾脏局部组织炎性因子表达.
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糖心平对糖尿病大鼠心肌组织糖化终产物受体mRNA表达的调节
研究表明,AGEs的蓄积直接参与糖尿病各种并发症的发生和发展,而AGEs与多种类型细胞表面存在的特异性受体(receptor of advanced glycation end productions,RAGE)的相互作用则是致病的关键途径[1、2].糖心平为治疗糖尿病心脏病变的中药复方制剂.本文采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测链脲佐菌素诱发糖尿病大鼠心肌组织中RAGE基因表达,同时探讨糖心平治疗对其影响.
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小鼠Cpne5基因mRNA水平的表达分布及其在胚胎的表达定位
目的 明确小鼠Cpne5.基因在mRNA水平的组织表达分布及其在胚胎的表达定位.方法 提取新生、成年小鼠主要脏器的总RNA,利用RT-PCR法检测Cpne5 mRNA的表达量；合成针对Cpne5 mRNA的杂交探针,取不同胎龄胎鼠进行整体原位杂交.结果 Cpne5 mRNA在成年小鼠10种脏器组织均有不同程度的表达,以大脑,小脑,睾丸和肺脏表达量较高；而肝脏和肌肉未表达.新生小鼠9种脏器中,Cpne5表达量高的是脑组织,眼和肾次之,肺和肝脏表达量很少.制备并评估Cpne5原杂探针的产量,SP6转录的反义探针浓度为100ng,/μL,T7转录的正义探针浓度为10ng/μL,原位杂交结果显示Cpne5 mRNA主要表达于胎鼠的端脑、间脑、中脑及菱脑原节.结论 在新生和成年小鼠的脑组织中Cpne5基因mRNA高水平表达,并在胎鼠发育过程中定位于胎脑.
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实时荧光定量PCR在细胞因子mRNA检测研究中的应用
RR-FQ-PCR技术是一种新PCR技术,具有特异性强、灵敏度高、重复性好、定量准确、速度快、全封闭反应等优点.本文就RT-FQ-PCR概念、原理、方法、研究进展及其在细胞因子mRNA检测中的应用等作一综述.
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mRNA电转抗CD3抗体刺激的PBMC方法的建立
目的 建立信使RNA(mRNA)电转抗CD3抗体刺激的外周血单个核细胞(PBMC)的方法,为制备基因修饰CDR3δ移植型yδ T淋巴细胞,为肿瘤细胞过继治疗提供新的技术方法.方法 以SpeⅠ内切酶消化重组pGEM4Z/EGFP/A64质粒,回收纯化线性化的重组质粒pGEM4Z/EGFP/A64,体外转录成mRNA;在电转参数为500 V500 μs 、400 V 500 μs或300 V 500μs等不同条件下,转染抗CD3抗体刺激的人PBMC;用倒置荧光显微镜观察和流式细胞仪观察和分析绿色荧光蛋白的表达;台盼蓝染色计算不同电转条件下细胞的存活率,以确定mRNA电转佳条件.结果 pGEM4Z/EGFP/A64质粒经过SpeⅠ内切酶酶切,获得了线性化的质粒;体外转录得到了增强型绿色荧光蛋白(EGFP) mRNA;与其他转染条件相比,在500 V 500 μs电转参数下转染EGFP mRNA的PBMC细胞,电转后48 h绿色荧光蛋白表达量较高;与其他转染条件相比,在500 V 500μs电转参数下转染EGFP mRNA的PBMC细胞,电转48 h后绿色荧光蛋白表达的阳性细胞高达77％;台盼蓝染色分析不同电转条件下细胞的存活率,在细胞电转48 h后,500 V 500 μs参数电转条件下细胞存活率可以达到85％以上.结论 电转参数为500 v 500μs的条件可用于电转mRNA于抗CD3抗体扩增的人PBMC,以制备基因修饰T淋巴细胞.
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系统性红斑狼疮病人环孢素A受体mRNA的表达
目的探讨静止期、活动期系统性红斑狼疮病人(SLE)外周血单个核细胞(PBMC)环孢素A受体(CyP) mRNA表达及糖皮质激素对其表达的影响,为临床应用环孢素A辅助治疗该病提供理论依据.方法采用逆转录PCR方法,经凝胶图像半定量分析,检测患者外周血单个核细胞CyP mRNA的表达.结果 SLE病人外周血单个核细胞存在有CyP mRNA的表达,静止期较正常人差异无显著性(p>0.05)意义,但在活动期CyP mRNA的表达较正常人和静止期病人明显降低(p<0.01),地塞米松处理后,活动期病人CyP mRNA的表达水平显著上升(p<0.01).结论 SLE病人有CyP mRNA的表达,但活动期明显下降,糖皮质激素可改善CyP mRNA的表达.
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温筋通对链脲佐菌素糖尿病大鼠坐骨神经糖化终产物受体mRNA表达的调节
目的探讨中药复方温筋通对糖尿病大鼠坐骨神经糖化终产物(AGEs)受体(RAGE)mRNA表达的影响. 方法 40只大鼠采用链脲佐菌素制备糖尿病大鼠模型.制模后将大鼠随机分为模型组、氨基胍组、预防组和治疗组.预防组与治疗组分别在制模后不同时间给予温筋通灌胃.另选10只体重、鼠龄相匹配的大鼠作为正常对照组.采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测病程12周各组大鼠坐骨神经RAGE mRNA表达水平. 结果糖尿病大鼠坐骨神经RAGE mRNA表达较正常对照组增强(P<0.01),温筋通预防组、治疗组及氨基胍预防组大鼠坐骨神经RAGE mRNA表达较糖尿病未治疗组降低(P<0.05～0.01). 结论温筋通可能通过调节糖尿病大鼠坐骨神经RAGE mRNA 的异常表达,减轻AGEs对坐骨神经的损伤.
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糖尿病分子生物学研究的新领域:微RNAs(miRNAs)与β细胞生物学、胰岛素抵抗、糖尿病及其并发症
微RNAs是由19～23个核苷酸组成的RNA分子.它们能够中止mRNAs的翻译或降解mRNA,从而成为蛋白质表达的调控者.微RNAs能有力推进细胞的分化和发育.这种调节的异常相关β细胞生物学、胰岛素抵抗和糖尿病及其并发症.微RNA-375直接参与胰岛素分泌的调控.本研究证明,微RNAs密切相关于疾病的表现.近年新鉴定出一大批与疾病致病有关的微RNAs.本文所提供31种微RNAs的应用,仅作为研究案例如糖尿病肾病发病的趣谈,旨在引起《中国糖尿病杂志》读者和作者研究微RNAs的浓厚兴趣.
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心房颤动患者长链非编码 RNA 表达谱的初步研究
目的：利用基因芯片筛选心房颤动（ AF）患者心房组织中差异表达的长链非编码RNA （ lncRNAs）和信使RNA（ mRNAs），并对其进行初步阐述。方法2014年1月至2014年6月应用芯片技术检测南通大学附属泰州市人民医院3例AF患者心房组织和3例正常对照心房组织的lncRNAs和mRNAs表达，筛选出差异表达的基因，对其进行基因本体论（ Gene Ontology ， GO ）、生物学途径分析（ pathway analysis ）。结果差异表达的 lncRNAs 219条，上调的156条，下调的63条。差异表达的mRNAs 197条，上调的120条，下调的77条。 GO分析提示差异表达的mRNAs主要富集于酪氨酸蛋白激酶活性、钙离子结合、DNA结合等生物学途径。差异表达的mRNA在细胞黏附分子、细胞核因子-κB信号通路、Ras信号通路等方面有着显著变化。结论房颤患者大量差异表达的lncRNAs和mRNAs，提示差异表达的lncRNAs与AF的发病机制可能相关。
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胰腺良恶性疾病组织中Smad4mRNA,PTENmRNA,P73mRNA表达及意义
目的研究胰腺癌、癌旁上皮和慢性胰腺炎组织中Smad4mRNA,PTENmRNA,P73mRNA表达特征及临床病理意义.方法石蜡包块切片组织原位杂交染色法.结果20例慢性胰腺炎导管上皮和腺泡上皮Smad4mRNA,PTENmRNA均为阳性表达,但P73mRNA均为阴性表达;25例胰癌旁上皮仅1例重度不典型增生者呈Smad4mRNA,PTENmRNA阴性表达和P73mRNA阳性表达(均为同一病例);53例胰腺癌Smad4mRNA,PTENmRNA,P73mRNA阳性病例分别为34例(64%)、31例(58%)和27例(51%);胰腺癌Smad4mRNA,PTENmRNA阳性率明显低于慢性胰腺炎(X2=9.6,P＜0.005;X2=11.8,P＜0.005)和癌旁上皮(X2=9.0,P＜0.005;X2=11.4,P＜0.005);而P73mRNA阳性率明显高于慢性胰腺炎(X2=15.2,P＜0.005)和癌旁上皮(X2=16.2,P＜0.005).高分化腺癌和未转移病例Smad4mRNA,PTENmRNA阳性率明显高于低分化腺癌(X2=4.4,P＜0.05;X2=4.7,P＜0.05)和转移癌(X2=4.2,P＜0.05;X2=3.9,P＜0.05);而P73mRNA阳性率明显低于低分化腺癌(X2=6.4,P＜0.025)和转移癌(X2=4.7,P＜ 0.05).Smad4mRNA与PTEmRNA在胰腺癌中表达呈正相关(X2=5.6,P＜0.025),P73mRNA与Smad4mRNA,PTENmRNA表达呈密切负相关(X2=5.2,P＜0.025;X2=7.1,P＜0.01).结论Smad4mRNA,PTENmRNA和P73mRNA表达共同影响胰腺癌发生发展、生物学行为和预后,均为重要生物学标记物.
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AFP-mRNA作为血中肝癌细胞的标志缺乏特异性
目的评价甲胎蛋白信使RNA(AFP-mRNA)作为外周血中肝癌细胞的标志是否具有特异性.方法抽取64份分别来自肝癌、肝炎肝硬化、健康人的外周血标本,提取血中有核细胞成分的总RNA,以AFP特异性引物进行巢式逆转录-多聚酶链式反应(nested RT-PCR)扩增,检测血中有核细胞中AFP-mRNA的表达情况.结果肝癌、肝炎肝硬化、健康人3组外周血中AFP-mRNA表达率分别为60%(18/30)、50%(10/20)、50%(7/14).表达率3组间无显著差异.结论AFP-mR-NA不是血液中肝癌细胞的特异性标志.
关键词： 癌 肝细胞 甲胎蛋白 逆转录多聚酶链式反应 信使RNA -
胃癌多药耐药相关蛋白mRNA表达及临床意义
目的研究胃癌组织中MRP1 mRNA、MRP2 mRNA表达水平及其临床意义.方法常规石蜡包埋切片原位杂交染色法.结果50例胃癌MRP1 mRNA和MRP2 mRNA表达阳性率分别为64%和68%,其评分分别为(3.4±1.6)和(3.5±1.4).高分化腺癌和区域淋巴结未转移癌MRP1 mRNA、MRP2mRNA表达阳性率及其评分均明显高于未分化癌和伴淋巴结转移癌,差异均有显著性或高度显著性(P＜0.05或P＜0.01).结论MRP1 mRNA和MRP2 mRNA表达水平对了解胃癌发生发展、生物学行为和预后,以及指导化疗均有重要意义.
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口腔鳞癌组织中HSP70基因 mRNA的表达及其意义
目的 检测HSP70基因的信使RNA在不同分化口腔鳞癌中的表达,以探讨其在口腔鳞状细胞癌组织中表达的意义.方法 用半定量RT-PCR方法检测30例口腔鳞状细胞癌和20例正常口腔黏膜中HSP70基因mRNA的表达,并分析HSP70基因mRNA表达量与临床病理特征的关系.结果 HSP70基因mRNA在高、中、低分化口腔鳞状细胞癌及正常组织中的灰度平均值为1.07±0.04,1.21±0.05,1.36±0.03;正常口腔黏膜上皮HSP70 mRNA的灰度平均值为0.95±0.15,表达低于口腔鳞状细胞癌组织,两者之间的差异具有显著性,高中低分化的口腔鳞状细胞癌两两比较,均有统计学差异.结论 HSP70基因表达与口腔鳞状细胞癌发生发展呈正相关关系,这对诊断口腔鳞状细胞癌有重要意义.但是HSP70的mRNA低表达则不能完全当作是口腔鳞状细胞癌中的早期事件.
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肺癌穿刺标本p16基因mRNA表达的研究
p16基因作为调控细胞周期的抑癌基因[1],在肺癌发生发展中起重要作用,其与Rb基因有可能共同构成肺癌基因分型诊断的基础[2].肺癌早期病理诊断一直是国内外医学界的难题,采用肺癌早期诊断立体定位仪[3],能为1 cm左右肺小病灶快速准确三维立体定位穿刺进行细胞病理诊断.我们采用RT-PCR方法,研究肺癌微小量穿刺标本中p16基因的mRNA表达情况,并与我们前期研究的肺癌标本p16基因表达异常情况进行对比,探索RT-PCR在肺微小量穿刺标本p16基因mRNA表达检测中的作用,以及肺癌穿刺标本p16基因mRNA表达在肺癌早期基因分型诊断中的意义.
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四氢原小檗碱对吗啡依赖大鼠脑内相关核团多巴胺D1、D2受体基因表达的影响
目的研究吗啡依赖对大鼠中脑边缘多巴胺(DA)系统内相关核团DA受体的影响及四氢原小檗碱(THPB)对其的效应.方法将30只SD大鼠随机分为5组,每组6只.正常对照组始终给予等量生理盐水腹腔注射,4组建立吗啡依赖模型.以5 mg/kg开始腹腔注射,2次/d,每次递增5 mg,一直增至第10天每次50 mg/kg;第11天起对其中的两组分别注射生理盐水12 d(Mor+NS12组)和30 d(Mor+NS30组),另两组分别注射30 mg/kg THPB 12 d(Mor+THPB 12组)和30 d(Mor+THPB 30组).分别测定中脑腹侧被盖区(VTA)等脑结构酪氨酸单氧化酶(TM)免疫阳性神经元的平均吸光度(A)值、D1R mRNA和D2R mRNA水平.结果与正常对照组相比,Mor+NS组大鼠VTA的TM表达持续增高(P<0.01).治疗12 d时,Mor+NS12组D1R mRNA在伏隔核、杏仁核、尾壳核、前额叶皮质的含量和D2R mRNA在VTA、尾壳核、伏隔核的含量均低于正常对照组(P<0.01),而Mor+THPB12组在伏隔核、杏仁核、尾壳核的D1R mRNA含量和VTA、尾壳核的D2R mRNA的含量与正常对照组的差异无显著性.治疗30 d时,Mor+NS30组D1R mRNA(除杏仁核外)和D2R mRNA在各脑区的含量仍低于正常对照组(P<0.01);而Mor+THPB30组D1R mRNA除前额叶皮质外的含量和D2R mRNA的含量已至正常水平.结论 THPB能抑制阿片依赖状态下VTA的TM免疫阳性神经元的过度反应,增强脑内D1R mRNA、D2R mRNA基因的表达,加速戒断后脑内DA神经系统功能恢复的过程.
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浆膜蛋白RTN1和RTN4基因在小鼠内耳的表达
目的探讨浆膜蛋白RTN1和RTN4基因在小鼠内耳的表达.方法采用5只成年小鼠内耳组织提取总RNA,逆转录后获得小鼠内耳细胞cDNA,根据RTN1和RTN4基因编码区序列设计的引物进行PCR扩增,通过PCR产物分析和DNA测序确定RTN1和RTN4是否在小鼠内耳细胞表达.结果采用小鼠内耳组织总RNA,RT-PCR扩增出RTN1和RTN4基因部分编码区,扩增产物测序证实小鼠内耳中有RTN1和RTN4基因的表达.结论RTN1和RTN4基因在内耳有表达,为RTN1和RTN4与连接蛋白26(connexin 26)蛋白的互作关系提供了进一步的证据.浆膜蛋白RTN1和RTN4可能与连接蛋白26在听觉生理中起作用.
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不同偶联模式的兴奋性氨基酸受体所介导非洲爪蟾卵母细胞跨膜电流的相互影响
目的 研究不同偶联模式的兴奋性氨基酸受体所介导非洲爪蟾卵母细胞跨膜电流的相互影响.方法 用异硫氰酸胍-酚-氯仿法从成年大鼠脑中提取总RNA,以寡聚脱氧胸苷酸纤维素亲和层析法分离出mRNA并注射入非洲爪蟾卵母细胞使表达,通过全细胞双电极电压钳位法,分别以M-胆碱受体Carb,谷氨酸离子型受体激动剂kainate(KA),代谢Ⅰ型受体激动剂quisqualate(QA)及代谢Ⅲ型受体激动剂L-phosphoserine(L-SOP)两两同时灌流有受体表达的非洲爪蟾卵母细胞.结果 3种偶联模式的受体激动后产生的膜电流具有交叉脱敏现象.结论 在多种受体共存的细胞中,受体之间可能存在着广泛的相互作用.
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细菌感染大鼠血中血小板型磷脂酶A2 mRNA水平的变化及其cDNA克隆
目的观察感染大鼠血中血小板型PLA2 mRNA水平的变化,研究其基因和氨基酸顺序结构的特征.为开发新的抗菌药物提供依据.方法用半定量RT-PCR方法检测感染大鼠血中PLA2 mRNA,并对PLA2 cDNA进行克隆和序列分析.结果大鼠感染细菌后,血中血小板型PLA2 mRNA水平迅速明显增加,其DNA和氨基酸结构与其他组织来源的PLA2有高度的同源性.结论细菌感染可引起大鼠血中PLA2在基因水平上的迅速反应,这可使血小板型PLA2的生成增加并控制感染.血中克隆出来的PLA2 cDNA与大鼠其他组织来源的PLA2虽略有不同,但其酶的催化中心及基本结构完全一致.
