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可乐定对严重烫伤大鼠心肌Gsα mRNA表达的影响
目的研究可乐定对严重烫伤大鼠心肌Gsα mRNA表达的影响.方法将大鼠置于95℃水浴中烫10 s,造成背部皮肤30%体表面积III度烫伤.分别用dot blotting杂交,原位杂交、放射免疫分析及间接方法测定心肌Gsα mRNA表达水平、cAMP生成量与adenyl cyclase (AC)活性.结果烫伤后3 h心肌Gsα mRNA表达水平明显减少,0.3,1.0,3.0 mg·kg-1可乐定(ip)可增加烫伤后心肌Gsα mRNA表达,表达相对量与可乐定剂量呈正相关.I1-咪唑啉受体拮抗剂efaroxan可部分逆转可乐定增加烫伤后心肌Gsα mRNA表达的作用,减少量与efaroxan剂量呈显著正相关.AC和cAMP的变化与Gsα mRNA类似.结论可乐定可增加烫伤后早期大鼠心肌Gsα mRNA表达、AC活性和cAMP产生.
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化学趋化因子mRNA在卵巢良恶性肿瘤中表达及其意义
目的 研究卵巢腺癌、黏液性和浆液性囊腺瘤及正常组织中IL-8mRNA,MCP-1mRNA和MIP-1amRNA表达水平及其临床病理意义.方法 43例卵巢腺癌、15例黏液性囊腺瘤、15例浆液性囊腺瘤和10例正常卵巢组织标本常规制作石蜡包埋切片,IL-8mRNA,MCP-1mRNA和MIP-1amRNA染色方法均为原位杂交染色法.结果 卵巢腺癌IL-8mRNA,MCP-1mRNA和MIP-1amRNA表达阳性率明显高于黏液性或浆液性囊腺瘤及正常组织(P＜0.05或P＜0.01);组织学分级G1、临床分期I+Ⅱ、无淋巴结转移及未侵犯周围组织器官的卵巢腺癌病例IL-8mRNA,MCP-1mRNA和MIP-1amRNA表达阳性率明显低于组织学分级G,、临床分期Ⅲ+Ⅳ、淋巴结转移及侵犯周围组织器官病例(P＜0.05或P＜0.01);卵巢腺癌中IL-8mRNA,MCP-1mRNA和MIP-1amRNAM之间呈高度一致性(P＜0.01).结论 IL-8mRNA,MCP-1mRNA和M1P-1amRNA表达可能是反映卵巢腺癌发生、进展、生物学行为及其预后的重要化学趋化因子.
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mRNA3′末端非编码区及其多态性在炎症与免疫中的调控作用
信使RNA 3′末端非编码区(3′UTR)含有多种顺式反应元件,该顺式元件参与基因表达的转录后调节.其中,存在于3′UTR的A/U富集元件(ARE)具有调控基因表达作用.ARE介导的基因表达的转录后调控广泛存在.人类细胞内ARE-containing 基因主要编码一些短暂生物学过程,如免疫、炎症及凋亡等的蛋白质.另外,人类基因中广泛存在多个可选择性多聚腺苷酸化位点,产生不同3′UTR长度或不同蛋白质产物的转录本,而且人体很多3′UTR改变的事件涉及机体免疫及炎性反应.
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微RNA表达谱联合基因表达谱在肺癌检测中的应用
微RNAs（ miRNAs）在转录后水平对基因表达的精细调控是目前非编码 RNA研究的热点。miRNAs通过与靶基因信使RNA 3′端非翻译区序列互补性结合，引起靶基因信使RNA的降解或翻译抑制，从而实现在转录后水平对基因表达的负调控。 miRNAs在肺癌等多种人类疾病的发展中扮演着重要的角色。迄今为止，功能已明确的miRNA 及其靶基因数目不多，因此 miRNA－信使 RNA的数据挖掘成为重要的研究手段。
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鼻咽癌肿瘤干细胞miRNAs和 lncRNAs及mRNAs表达谱分析
目的：明确鼻咽癌肿瘤干细胞基因表达图谱，为进一步探索鼻咽癌肿瘤干细胞的生物学特性打下基础。方法采用芯片技术检测鼻咽癌肿瘤干细胞CNE-2S的微小RNA(miRNAs)、长链非编码RNA(lncRNAs)和信使RNA(mRNAs)表达，与其母细胞CNE-2相比较，寻找其差异。结果与CNE-2相比， CNE-2S中表达miRNAs上升2倍43个，下降54个；lncRNAs上升757个，下降3034个；mRNAs上升1088个，下降2265个。结论鼻咽癌肿瘤干细胞CNE-2S与其母细胞CNE-2相比， miRNAs、 lncRNAs和mRNAs表达差异较为显著，提示其具体不同的生物学活性。
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子痫前期与GNA12启动子甲基化的相关性分析
目的 探讨鸟嘌呤核苷酸结合蛋白(GNA12)启动子甲基化程度与子痫前期(pre-eclampsia,PE)的关系.方法 选取2016年8月至2017年7月宝鸡市妇幼保健院收治的PE患者共50例作为研究组,另取同期行正常孕检的孕妇50例作为对照组,通过MassarRay核酸质谱分析系统分析两组胎盘外周血DNA样本中GNA12启动子8个CpG位点的甲基化水平及mRNA表达情况.结果 研究组胎盘DNA样品中,73位点、109位点、185位点及204位点的GNA12甲基化程度显著小于对照组(P<0.05),外周血样品中73位点和185位点的GNA12甲基化程度显著小于对照组(P<0.05).研究组GNA12基因的mRNA表达水平显著高于对照组(P<0.05).结论 PE与GNA12启动子的甲基化水平降低相关,可对胎盘和外周血进行基因检测,且外周血检测更加便捷,对PE的早期诊断有一定的临床意义.
关键词： 子痫前期 鸟嘌呤核苷酸结合蛋白 DNA甲基化 信使RNA -
温针治疗对链脲佐菌素诱导的糖尿病大鼠非酶糖基化产物受体mRNA表达的影响
目的 探讨温针对糖尿病大鼠糖化终产物(AGEs)受体(RAGE)mRNA表达的影响,旨在探求温针促进神经损伤后修复的机理.方法 选用wistar雄性大鼠,腹腔注射链脲佐菌素造成糖尿病大鼠模型,随机分为模型组、弥可保组和温针组;另设立正常组.治疗8周后利用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测大鼠坐骨神经中RAGE mRNA表达水平.结果 温针组.及弥可保组大鼠坐骨神经RAGE mRNA表达水平低于模型组(p<0.05),而温针组与弥可保组相比效果更好(p<0.05).结论 温针能抑制糖尿病大鼠坐骨神经RAGE mRNA的异常表达,减轻AGEs对坐骨神经的损伤.
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用原位杂交方法检测虹膜睫状体EP1和FP受体mRNA的表达
目的检测人眼虹膜-睫状体组织内EP1和FP受体mRNA的表达情况.方法以地高辛标记EP1和FP受体探针,用原位杂交方法检测人眼石蜡切片虹膜-睫状体相应受体mRNA的信号表达.结果虹膜的血管、肌肉和内皮层见大量EP1和FP受体mRNA表达.EP1受体mRNA信号见于睫状体所有的肌肉纤维;FP受体杂交信号主要见于睫状体环形肌肉和结缔组织,纵行肌和放射状肌肉的信号未能检测到.结论人眼组织EP1和FP受体mRNA广泛表达于相应有关受体激动剂作用的功能部位.EP1和FP受体mRNA选择性的表达于睫状体环形肌和结缔组织,提示二种受体在增加巩膜脉络膜房水引流过程中起着重要作用.
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三七总皂苷对烫伤大鼠心肌Gsα mRNA表达的影响
目的研究三七总皂苷(panax notoginseng saponins,PNS)对烫伤早期大鼠心肌Gsα mRNA表达的影响.方法通过30%体表面积皮肤Ⅲ度烫伤大鼠模型,应用dot blotting杂交、心肌组织原位杂交、放射免疫分析等技术观察三七总皂苷对严重体表烫伤大鼠心肌Gsα mRNA表达水平、cAMP产生量、腺苷酸环化酶(adenylylcyclase,AC)活性的影响.结果大鼠心肌组织中Gsα mRNA表达量、cAMP含量、AC活性在烫伤后3 h均明显降低.100,200 mg/kg PNS明显增加烫伤大鼠心肌组织Gsα mRNA的表达,增加量与PNS剂量呈显著正相关(r=0.95,P＜0.05).100,200 mg/kg使烫伤大鼠心肌组织cAMP含量分别增加21%,36%,AC活性分别增强40%,63%(P＜0.01).结论 PNS可增加烫伤大鼠心肌GsαmRNA表达,增强AC活性,增加cAMP生成.
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荧光标记mRNA差异显示技术
目的:应用荧光标记的mBNA差异显示技术.方法:提取未经过/经过IFN、LPS处理的三组人单核细胞系U937的总RNA并以此为模板,采用荧光标记的锚定引物,通过逆转录、差异显示PCR反应,经5.6%变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离差异条带,回收后将其再扩增.结果:三组样本的 DD-PCR产物电泳显示长30 0 bp～2.0 kb不等的扩增片段,条带清晰、明亮,背景低,各样本相互间的差异不仅呈有无的变化,亦表现出很多强弱改变;再扩增条带锐利、单一.结论:在本试验室成功应用了荧光标记差异显示技术,可快速、敏感、经济有效地筛选各种未知的表达基因.
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alpha-晶体蛋白在氧诱导小鼠视网膜病变中的表达
目的:建立氧诱导视网膜病变小鼠动物模型,研究alphaA-和alphaB-晶体蛋白在其视网膜组织中的mRNA定量表达及定位分布特点.方法:选取34只C57/BL小鼠于出生后7 d(P7)置于(75±5)％高氧状态下饲养5d,后回到正常环境中;另选取34只同日龄幼鼠作为正常对照组.采用荧光素血管灌注及视网膜铺片法观察视网膜血管形态;并行Real time RT-PCR检测alphaA-和alphaB-晶体蛋白mRNA在氧诱导模型鼠和正常视网膜组织中表达水平,免疫荧光方法检测这两种晶体蛋白在视网膜组织中的定位分布情况.结果:实验组鼠的视网膜血管形态特征为相对低氧状态下5d后(P17)在其视网膜中周部有血管区和无血管区交界处大量新生血管形成,出现周边渗漏.实验组alphaA-晶体蛋白mRNA在视网膜组织中的表达为先降低后升高的趋势,差异具有统计学意义(F=220.378,P＜0.01);实验组alphaB-晶体蛋白的表达呈现逐渐升高的趋势,但差异无统计学意义(F=0.895,P＞0.05).两种alpha-晶体蛋白阳性细胞均表达在神经节细胞、内核及外核细胞层.结论:在氧诱导视网膜病变小鼠视网膜组织中,alphaA-和ahphaB-晶体蛋白在视网膜组织中表达具有时空依赖性.
关键词： alpha-晶体蛋白 氧诱导视网膜病变 信使RNA 免疫荧光 小鼠 -
生存素mRNA检测对恶性胸腔积液诊断价值的Meta分析
目的 系统评价检测生存素mRNA对恶性胸腔积液的临床诊断价值.方法 计算机检索Pubmed、Embase、万方数据、中国期刊全文数据库、维普网等数据库,筛选利用检测生存素mRNA诊断恶性胸腔积液的研究.所纳入文献的质量利用诊断性试验准确性质量评价工具评价,利用Meta-Disc 1.4软件计算纳入研究的合并敏感度、特异度、阳性似然比、阴性似然比与诊断比值比,绘制汇总受试者工作特征曲线,计算曲线下面积.结果 根据设定纳入标准,共有7篇文献纳入本次Meta分析,Meta分析显示生存素mRNA对恶性胸腔积液的合并诊断价值分别为:敏感度为0.81[95％ CI(0.77,0.85)],特异度为0.84[95％CI(0.79,0.88)],阳性似然比8.24[95％ CI(2.44,27.89)],阴性似然比0.22[95％CI(0.13,0.36)],诊断比值比为41.55[95％CI(13.85,124.63)].汇总受试者工作特征曲线下面积为0.92.结论 生存素mRNA检测对恶性胸腔积液具有一定的诊断价值,可作为诊断恶性胸腔积液的辅助检测指标.
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急性心肌缺血大鼠肺组织肿瘤坏死因子-α及mRNA表达的研究
目的 观察急性心肌缺血大鼠肺组织中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及TNF-αmRNA的表达,探讨TNF-α及TNF-α mRNA在急性心肌缺血诱发肺损伤中的作用.方法 健康成年雄性SD大鼠36只,体质量(250±20)g,随机分为两组:手术对照组(S组)和结扎冠状动脉缺血组(CAO组).S组动物仅开胸但不结扎冠状动脉左前降支;CAO组动物开胸后结扎冠状动脉左前降支.S组、CAO组又各分为1、3、6 h三个不同的时点组.各组在开胸或扎闭冠状动脉左前降支后分别计时1 h,3 h,6 h取出右肺下叶.采用免疫组织化学、原位杂交两种方法观察TNF-α及TNF-α mRNA在各组动物肺组织中的表达情况.结果 CAO组各时间点大鼠的支气管上皮细胞、肺泡Ⅱ型细胞和血管内皮细胞均可见到TNF-α及TNF-α mRNA的均呈强阳性表达(P<0.01),在3 h达高峰.结论 ,TNF-α及TNF-α mRNA参与了急性心肌缺血诱发肺损伤的发生和发展.
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移植修复脑功能损害种子细胞源研究:τ蛋白mRNA在脐血单个核细胞中的表达
背景:脐血单个核细胞可作为种子细胞源以移植修复不同原因所致脑功能损害,但能否表达神经元另一重要特有分子τ蛋白?目的:探讨脐血单个核细胞在培养前后及细胞因子诱导作用下,τ蛋白mRNA的表达.设计:随机对照研究.地点和对象:实验地点:华中科技大学同济医学院.采集健康新生儿脐血8份,每份80mL.干预:在细胞培养过程中,使用细胞因子:表皮生长因子(epidermal growthfactor,EGF)和碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF).主要观察指标:①细胞形态.②τ蛋白mRNA在脐血单个核细胞中的表达.结果:培养前,脐血单个核细胞胞体小呈圆形,培养后EGF+bFGF组细胞胞体较大,有粗长突起形成,未加细胞因子所培养细胞胞体较小,突?换起较短、较细,形似星形细胞.反转录聚合酶链式反应(reverse-transcriptpolymerase chain reaction,RT-PCR)检测未培养的脐血单个核细胞τ蛋白mRNA呈阴性而MAP2mRNA表达阳性,培养后二者均表达阳性,在EGF+bFGF作用下,阳性表达更明显.结论:脐血单个核细胞表达MAP2 mRNA,经培养后同时表达T蛋白mRNA,细胞因子能增强这种作用.
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烟碱上调大鼠脑纹状体多巴胺D1受体mRNA表达诱导其行为改变
背景:研究提示,烟碱对帕金森病小鼠具有神经保护效应,临床试验也观察到,帕金森病患者在吸烟过程中其震颤、僵直、运动减少等症状减轻,但其作用机制目前尚不明了.目的:观察烟碱对大鼠脑纹状体多巴胺D1,D2受体mRNA表达的影响,分析烟碱对帕金森病神经保护效应的作用机制.设计:完全随机分组设计,对照试验.单位:中南大学湘雅医院神经病学研究所.材料:选用健康雄性清洁级SD大鼠24只,10周龄,体质量180～200 g.主要试剂及仪器:烟碱(美国Sigma公司)、反转录试剂盒(美国MBI公司)、聚合酶链反应热循环仪(美国Beckman)、全自动紫外分光光度计(美国Beckman Du-70)、图像分析处理系统(美国Stratagene Eagle Eye Ⅱ型).方法:实验于2001-07/2002-07在中南大学湘雅医院神经病学研究所实验室完成.①按随机抽签法将大鼠随机分为2组:对照组、烟碱组,每组12只.分别皮下注射生理盐水、烟碱溶液4 mg/(kg·d),2次/d,共14 d.注射药物后0.5 h观察大鼠行为活动,包括定型活动、走动活动、攀爬行为、旋转行为、理毛行为、张口行为、呕吐行为等,观察时间为0.5 h.②于末次注射药物后0.5 h处死动物,快速分离纹状体,提取总RNA,采用美国MBI反转录试剂盒反转录cDNA,在特定条件下进行聚合酶链反应扩增,将电泳凝胶在Eagle EyeⅡ图像处理系统上分析计算出多巴胺D1,D2受体及内对照β-actin吸光度(A值),检测大鼠脑纹状体多巴胺Di,D2受体mRNA的表达.③两样本均数比较采用t检验.主要观察指标:①大鼠行为学改变.②大鼠脑纹状体多巴胺Di,D2受体mRNA的表达.结果:大鼠24只均进入结果分析.①烟碱组大鼠于用药第3天,出现走动增多,易激惹,定型活动明显,并于第7～14天达到高峰;对照组则无明显变化.②大鼠脑纹状体所有标本总RNA A260/280均＞1.8,经12g/L琼脂糖浆电泳显示无明显降解;通过反转录聚合酶链反应和设定的引物,得到多巴胺Di,D2受体及actin的扩增产物分别为350 bp,399 bp,218 bp,与预计值一致.③在大鼠纹状体内,烟碱组多巴胺D1受体mRNA表达比对照组上升23%(分别为98.63±1.13,65.29±1.45,P＜0.01),两组多巴胺D2受体mRNA的表达差异无显著性意义(P＞0.01).结论:烟碱可能通过上调大鼠纹状体多巴胺D1受体mRNA的表达而诱导大鼠行为改变.
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正畸力引起的牙周组织内白细胞介素-1 mRNA含量变化的研究
目的 研究在正畸牙移动中牙周组织炎症反应的情况和白细胞介素-1(interleukin-1,IL-1) mRNA表达水平是否发生一定的变化.方法 选取中国医科大学实验动物部Wistar大鼠36只,分别采用石蜡切片HE染色和实时定量 RT-PCR 的方法检测施加正畸力后1、3、7和14 d牙周组织内炎症反应和IL-1α及IL-1β mRNA的含量变化.结果 机械力使牙周组织内炎症反应明显,同时IL-1α和IL-1β mRNA的含量增加,对于IL-1α,其mRNA含量在3 d后明显增加,7 d后达到高峰,之后下降;而IL-1β mRNA的含量在加力1 d后即开始增加,3 d后达到峰值,随后下降.结论 在正畸牙移动中,牙周组织内炎症反应明显;IL-1α和IL-1β mRNA的含量增加,并有一定的时相特异性.
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SIRS大鼠心肌刺激性G蛋白的变化及地塞米松对其影响的实验观察
目的:探讨全身炎性反应综合征(SIRS)大鼠心肌刺激性G蛋白(Gs)含量、Gs mRNA表达的变化及地塞米松对Gs变化的影响.方法:实验组大鼠给予大肠杆菌脂多糖(LPS)20 mg/kg腹腔注射,制造SIRS大鼠模型.地塞米松(DXM)组在同样给予LPS后10 min给地塞米松20mg/kg腹腔注射.免疫印迹法测定心肌Gs含量,RT-PCR半定量法检测Gs mRNA的表达.结果:与对照组相比,LPS 3 h组、LPS 6 h组大鼠心肌Gs的相对含量下降,尤以6 h组下降明显(P＜0.01).DXM组与LPS 3 h组比较,Gs的相对含量略有回升,但无统计学意义.与对照组相比,LPS 3 h组、LPS 6 h组Gs mRNA的表达值均有显著性差异(P均＜0.01),尤以6 h组下降明显.DXM组与LPS 3 h组相比,较前者略有好转,但无统计学意义(P＞0.05).结论:SIRS大鼠心肌细胞信号转导系统中的Gs发生异常,此种异常改变是在基因水平上发生的,并且参与了心功能障碍的发生、发展.20 mg/kg剂量的地塞米松对Gs的变化没有明显的影响.
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荧光定量PCR检测外周血中JAR细胞的探讨
目的建立灵敏可靠的外周血中检出滋养细胞肿瘤细胞的方法,为早期诊断滋养细胞肿瘤的转移奠定实验基础.方法在已知数量的JAR细胞掺入10ml外周血中建立肿瘤细胞血行转移实验模型,荧光定量逆转录-聚合酶链反应(FQ-RT-PCR)定量检测JAR细胞的β-hCG-mRNA.结果FQ-RT-PCR可检测到相当于1个JAR细胞表达的β-hCG-mRNA量,但当JAR细胞被掺入10ml外周血中时,细胞数＞102个方可经富集后可检测到.结论FQ-RT-PGR是一种敏感的检测手段,有希望成为检测外周血中滋养细胞肿瘤细胞的敏感方法,将有助于滋养细胞肿瘤转移病例的早期诊断与治疗.
关键词： 逆转录-聚合酶链反应 β-HCG 信使RNA 滋养细胞肿瘤 -
石蜡包埋组织在分子生物学实验中的研究进展
甲醛固定石蜡包埋是临床病理组织常规的储存方式,临床石蜡标本包含有丰富的临床信息和病理资料,是进行人类疾病研究非常宝贵的资源. 但是由于组织在甲醛固定和石蜡包埋加工过程中引起RNA和蛋白交联及共价修饰等作用,以至提取的RNA质量较差,使得石蜡组织并未在实验研究中得到广泛的应用.而microRNAs(miRNAs)是一种分子链较短且具有调控作用的小分子RNA,可抵抗组织固定和包埋过程对分子结构造成的影响,在加工处理过程中其分子结构和化学性质仍可保持稳定,且目前已经证实 miRNAs在多种疾病包括肿瘤的发生发展中起着非常重要的作用. 因此通过对石蜡组织中 miRNAs 表达的分析研究,可充分发挥石蜡包埋组织在分子生物学实验研究中的作用,尤其对人类疾病的回顾性研究和一些罕见疾病研究做出更多贡献.
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温针灸对糖尿病大鼠坐骨神经AGEsmRNA、RAGEmRNA表达的影响
目的:探讨温针灸法对糖尿病周围神经病变(DPN)模型大鼠氧化应激水平的影响.方法:本课题采用体重在200 g左右的雄性Wistar大鼠40只,选其中30只以(STZ)左下腹单次注射诱导形成糖尿病模型,造模后选血糖≥16.7 mmol/l的Wistar大鼠喂养8周形成DPN模型.随机分为模型对照组、弥可保组、温针组,其余10只为正常对照组,每组10例.温针组选用脾俞、肾俞、足三里、环跳等穴位进行针刺,得气后,在针尾上搓捏艾绒点燃施灸.每穴施灸20 min,隔日1次,共治疗8周.弥可保组肌注弥可保50 μg/kg.通过对大鼠一般情况、血糖监测,结合神经电生理方法检测坐骨神经传导速度,评价温针对DPN的治疗效应.以免疫组织化学法检测坐骨神经AGEs,用RT-PCR检测坐骨神经RAGEmRNA的表达.结果:治疗8周后,温针治疗提高了DPN大鼠坐骨神经传导速度,抑制坐骨神经中AGEs及RAGEmRNA的表达,其结果与弥可保组比较有显著性差异(P<0.05).结论:本课题证实了温针疗法可以提高DPN模型大鼠的坐骨神经传导速度,能抑制坐骨神经AGEs及RAGEmRNA的表达,减少AGEs与RAGE结合产生的生物学效应,从而保护神经细胞免受氧化应激损伤,减轻了对神经和血管的损害,进而改善了周围神经的结构和功能,这可能是其治疗DPN的作用机制之一.
