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哈蟆油与类似品和伪品的质量评价
目的 建立哈蟆油及其类似品黑龙江林蛙油、桓仁林蛙油与伪品蟾蜍油、牛蛙油和青蛙油的定性和定量方法.方法 系统地研究不同产地哈蟆油及其类似品与伪品的膨胀度、薄层色谱法等定性鉴别方法,并采用高效液相色谱法、凯氏定氮法、氯胺T比色法和茚三酮柱后衍生化-氨基酸分析法等,分别测定哈蟆油及其类似品与伪品中1-甲基海因、激素、总蛋白质、胶原蛋白和氨基酸的含量.结果 哈蟆油、黑龙江林蛙油及桓仁林蛙油膨胀度均大于75.0,青蛙油膨胀度范围为52.5～95.4,而蟾蜍油和牛蛙油膨胀度均低于40.0.蟾蜍油和牛蛙油薄层色谱图中有2个特征性斑点,与哈蟆油、黑龙江林蛙油、桓仁林蛙油及青蛙油的色谱图有明显区别.哈蟆油及其类似品与伪品中均检测出1-甲基海因,其含量质量分数为1.51×10-4％ ～3.72×10-2％.哈蟆油及其类似品与伪品中雌二醇、雌酮、睾酮和孕酮等4种激素含量为微量.哈蟆油及其类似品总蛋白质含量、氨基酸含量明显高于蟾蜍油、牛蛙油和青蛙油等伪品,但胶原蛋白含量明显低于3种伪品.结论 系统地研究了不同产地哈蟆油及其类似品与伪品的定性和定量分析方法,为哈蟆油质量综合评价和控制提供了详实的实验数据,对今后药典哈蟆油质量标准的修订具有重要的参考价值.
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基于气相色谱-质谱法的动物类中药材中1-甲基海因分布研究
目的 气相色谱-质谱法联合测定8种动物类中药材1-甲基海因的分布情况.方法 采用HP-5ms毛细管柱(30m×0.25mm,0.25 μm).程序升温,初始柱温为60 cC,保持1 min,以20℃/min升温至260℃.进样口温度为265℃,离子源温度为230℃.对蛤蚧各个解割部位进行测定,并同时测定蛤蟆油、乌蛇、海蛇、地龙、全蝎、阿胶和紫河车中1-甲基海因含量.结果 1-甲基海因在0.1～100.0 μg/mL浓度范围内线性关系良好(r=0.999 2),平均加样回收率为96.82％,相对标准差(RSD)为0.9％.蛤蚧头、脊椎、骨骼肌、四肢、皮肤和尾部含量分别为0.74、1.21、4.04、1.28、0.84、40.28 μg/g;乌蛇和海蛇含量分别为2.84、10.43 μg/ g;蛤蟆油中含量为4.45 μg/g.结论 气相色谱-质谱法能够准确测定动物类中药材中1-甲基海因含量;1-甲基海因为多种中药材共有成分,可能是蛤蚧、乌蛇、海蛇和蛤蟆油的共同药理活性基础物质之一.
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1-甲基海因对哮喘大鼠模型的平喘作用及其机制
目的：探讨1-甲基海因（1-MH）对哮喘及咳嗽动物模型的干预作用，初步阐明其作用机制。方法：选取50只 Wistar大鼠，采用卵清蛋白诱发大鼠哮喘后随机分为模型对照组1-MH 20、40、80 mg·kg-1剂量组和阳性对照组（氨茶碱60 mg·kg-1），另取10只 Wistar大鼠作为空白对照组。收集各组大鼠支气管肺泡灌洗液（BALF），测定白细胞介素5（IL-5）、嗜酸粒细胞趋化因子（Eotaxin）水平及嗜酸性粒细胞（EOS）计数；选取40只引喘合格豚鼠随机分为模型对照组，1-MH 15、30和60 mg·kg-1剂量组及阳性对照组（氨茶碱50 mg·kg-1），记录各组豚鼠哮喘发生潜伏期；选取豚鼠10只，取支气管放于 Krebs 液中，记录并计算0.25、0.50和1.00 g·L-11-MH 对抗磷酸组胺的解痉百分率；选取引咳合格小鼠50只，随机分成1-MH 25、50和100 mg·kg-1剂量组及阳性对照组（可待因50 mg·kg-1），记录各组小鼠咳嗽潜伏期及3 min内的咳嗽次数；选取引咳合格豚鼠40只，随机分成1-MH 15、30和60 mg·kg-1剂量组及阳性对照组（可待因20 mg·kg-1），记录各组豚鼠咳嗽潜伏期及5 min内的咳嗽次数。结果：与致敏模型对照组比较，1-MH 40和80 mg·kg-1剂量组大鼠BALF中 IL-5、Eotaxin水平及 EOS计数明显降低（P＜0.05或P＜0.01）；与乙酰胆碱诱导哮喘模型对照组比较，1-MH 30和60 mg·kg-1剂量组豚鼠哮喘发生潜伏期明显延长（P＜0.05或P＜0.01）；与空白对照组比较，1-MH 0.50和1.00 g·L-1剂量组豚鼠离体气管平滑肌的解痉百分率明显升高（P＜0.01）；与小鼠咳嗽模型对照组比较，1-MH 50和100 mg·kg-1剂量组小鼠咳嗽潜伏期延长，咳嗽次数减少（P＜0.05或P＜0.01）；与豚鼠咳嗽模型对照组比较，1-MH 30和60 mg·kg-1剂量组豚鼠咳嗽潜伏期延长，咳嗽次数减少（P＜0.05或P＜0.01）。结论：1-MH具有良好的平喘及镇咳作用，平喘作用可能与其抑制气道炎症和直接舒张支气管平滑肌有关。
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1-甲基海因对抑郁大鼠行为学的影响及机制初探
目的 研究1-甲基海因的抗抑郁作用,并分析其可能的作用机制.方法采用慢性冰水游泳应激(chronic forced swim stress)方法建立大鼠抑郁模型.氟西汀(10 mg·kg-1)和1-甲基海因 (20,40和80 mg·kg-1)在造模完成后灌胃给药,每天1次,连续14 d.观察大鼠体重变化,并用旷场实验和蔗糖偏好实验检测大鼠行为学变化;用酶联免疫吸附法(ELISA) 测定大鼠血清皮质酮的含量;用蛋白免疫印迹法(Western blot)分析大鼠海马中脑源性神经营养因子(BDNF)蛋白的表达水平.结果 与正常组比较,慢性应激大鼠的体重减少(P<0.01),在旷场实验中的运动距离减少(P<0.01),血清中皮质酮含量升高(P<0.01),海马中BDNF的蛋白表达降低(P<0.01).与模型组比较,1-甲基海因40 mg· kg-1能改善抑郁大鼠体重的下降(P<0.05),增加旷场实验中的运动距离(P<0.01),降低大鼠血清皮质酮的水平(P<0.05),增加大鼠海马中BDNF的蛋白表达(P<0.01).结论 1-甲基海因具有明显的抗抑郁作用,其机制可能与调节下丘脑-垂体-肾上腺(HPA)轴功能和提高BDNF的表达有关.
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青环海蛇中有效物质1-甲基海因的含量测定
目的 建立HPLC法测定青环海蛇中有效物质1-甲基海因的含量.方法 Dikma inertsil SIL-100A(4.6 mm×250 mm,5 μm)色谱柱,流动相为正己烷-乙醇(82:18,V/V),检测波长为218 nm,流速为1.0 ml·min~(-1),柱温为25℃.结果 1-甲基海因质量在0.448～1.568 μg之间线性良好,r＝0.999 5;平均加样回收率为99.34%,RSD为2.12%.结论 该测定方法简便快捷、准确性好、精密度高,可用于青环海蛇中有效物质1-甲基海因的含量测定,为海蛇质量标准的建立提供依据.
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HPLC法测定哈蟆油及其含药大鼠血清的抗衰老成分
目的 定性分析哈蟆油在大鼠血清当中的有效成分.方法 大鼠经灌胃给予哈蟆油后,腹主动脉采集血并分离血清,采用HPLC法检测哈蟆油含药血清中的亚油酸、1-甲基海因、维生素E、雌二醇.结果 通过参比对照品的保留时间以及与文献资料对比分析,在大鼠含药血清中鉴别出亚油酸、1-甲基海因、维生素E.结论 建立的哈蟆油含药血清的HPLC分析方法有助于阐明哈蟆油的药效物质基础.
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GC-MS法测定血中1-甲基海因含量及其法医学应用
目的 建立全血中1-甲基海因的气相色谱-质谱(GC-MS)分析方法,为1-甲基海因相关法医学鉴定案件提供技术支持.方法 取0.5 mL血样,加入500 ng内标盐酸双苯戊二氨酯(SKF525A)、0.01 mol/L稀盐酸溶液2 mL,加入碳酸铵0.5 g调节pH值为9,加入乙酸乙酯2 mL,然后离心,取有机溶剂层,吹干后进行GC-MS分析.结果 血液中1-甲基海因在0.5～50 ng/mL范围内线性关系良好,线性回归方程为y=0.01551 x+0.00726(R2=0.9997),低检出限为0.1 ng/mL,回收率为93.02％～108.12％,日内、日间精密度分别小于6.07％和13.37％.结论 本方法测定所得结果准确,重现性好,可用于血样中1-甲基海因含量的测定.
