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HPLC法测定L-肌肽中的游离氨基酸的含量
目的 采用柱前衍生高效液相色谱法对L-肌肽原料药中的游离氨基酸进行测定.方法 采用异硫氰酸苯酯(phenyl isotlliocyanate,PITC)柱前衍生高效液相色谱法,使L-肌肽中游离的β-丙氨酸和L-组氨酸衍生物达到完全分离,并测定其含量.色谱柱为Diamonsil~(TM)C_(18)(200 mm×4.6 mm,5μm),流动相为甲醇-0.05 mol·L~(-1)醋酸钠溶液(体积比为13:87),流速为1.0mL·min~(-1),检测波长为254 nm,柱温为35℃.结果 HPC法测定β-丙氨酸和L-组氨酸的线性范围分别为2.01～20.10 mg·L~(-1)(r=0.999 7)和2.00～20.00 mg·L~(-1)(r=0.999 3);平均回收率分别为110.6%和98.2%.结论 HPLC法无需专业的氨基酸分析仪,可用于L-肌肽中游离氨基酸的检查.
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高效液相色谱法测定肌肽滴眼液中L-肌肽的含量及有关物质
目的:建立肌肤滴眼液中L-肌肤的含量测定的HPLC方法.方法:采用Kromasil NH2色谱柱(200 mm × 4.6mm,5 μm),流动相为乙腈-40 mmol·L-1磷酸氢二钾溶液(44:56,磷酸调pH 6.3).流速1.0 mL·min-1,检测波长为210 ml,柱温为35℃.结果:肌肤在9.93～99.3μg·mL-1范围内线性关系良好(r=0.999 8),平均回收率为99.8%(RSD=1.0%,n=9),滴眼液中含L-肌肽的标示百分含量为97.0%～102.0%.结论:该方法操作简便、重复性好、专属性强,可用作肌肤滴眼液中L-肌肽的质量控制.
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L-肌肽对鱼藤素诱导SH-SY5 Y细胞神经毒性的保护作用
目的 研究L-肌肽是否能通过抗氧化活性降低鱼藤素导致的神经毒性.方法 SH-SY5Y细胞在L-肌肽(1、10、20、40、60、80、100 mmol·L-1)中培养24 h,CCK-8法测定细胞存活率.30 mmol·L-1 L-肌肽、20μmol·L-1鱼藤素、20μmol·L-1鱼藤素与30 mmol·L-1 L-肌肽作用于SH-SY5Y细胞24 h,AO/EB法检测细胞形态和凋亡情况.8μmol·L-1鱼藤素、8μmol·L-1鱼藤素与3 mmol·L-1 L-肌肽、8μmol·L-1鱼藤素与30 mmol·L-1 L-肌肽、20μmol·L-1鱼藤素、20μmol·L-1鱼藤素与3 mmol·L-1 L-肌肽、20μmol·L-1鱼藤素与30 mmol·L-1 L-肌肽、50μmol·L-1鱼藤素、50μmol·L-1鱼藤素与3 mmol·L-1 L-肌肽、50μmol·L-1鱼藤素与30 mmol·L-1 L-肌肽作用于SH-SY5Y细胞24 h,CCK-8法检测细胞的增殖情况;双染流式细胞术检测细胞凋亡率;DCFH-DA流式细胞术检测细胞活性氧(ROS)水平.结果 20μmol·L-1鱼藤素与30 mmol·L-1 L-肌肽共作用于细胞后,细胞抑制率降低9.07％,早期凋亡的细胞数减少,早期凋亡率降低9.35％,总凋亡率降低10.7％,ROS水平低于20μmol·L-1鱼藤素组,结果差异具有统计学意义(P<0.05).结论 L-肌肽能有效降低鱼藤素诱导SH-SY5Y细胞的神经毒性,保护细胞,其机制可能与降低氧化应激水平相关.
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HPLC测定L-肌肽中L-组氨酸及其中间体的含量
目的 建立高效液相色谱法(HPLC)测定L-肌肽中L-组氨酸及其中间体含量的方法.方法 采用Atlantis HILIC Silica(150 mm×4.6 mm,5 μm)色谱柱,柱温35 ℃,流动相为0.01 mol/L醋酸铵溶液(加冰醋酸调pH4.0)-乙腈(28:72),流速1.0 ml/min,检测波长220 nm.结果 L-组氨酸在0.5093～10.1856 μg/ml范围内与峰面积有良好线性关系(r=0.9995),平均回收率为99.30 ％(RSD=0.99 ％);中间体在0.4810～9.6206 μg/ml范围内与峰面积有良好线性关系(r=0.9991),平均回收率为98.99 ％(RSD=1.85 ％).结论 方法专属性强、重现性好、灵敏度高,可用于L-肌肽中L-组氨酸及中间体含量的测定.
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L-肌肽对高热惊厥幼鼠神经细胞的保护作用
目的 探讨L-肌肽对幼年大鼠实验性高热惊厥(FS)后神经细胞的保护作用.方法 70只15日龄SD大鼠,采用随机数字表法分组为干预组3组(A组、B组、C组)、惊厥对照组3组(a组、b组、c组)和空白组共7组,每组各10只;采用热水浴诱导干预组和惊厥对照组大鼠实验性FS发作10次;A组、B组、c组分别在后一次惊厥发作30、60、120 min给予L-肌肽250 mg/kg腹腔注射;a组、b组、c组分别在后一次惊厥发作30、60、120 min给予等量9 g/L盐水腹腔注射;空白组不诱发惊厥,也不予干预.处死受试大鼠后进行其大脑氧化磷酸化水平、酪氨酸羟化酶(TH)活力和肌酸激酶(CK)活力测定.结果多次FS后,惊厥对照组各组和干预组各组与空白组比较,大鼠大脑氧化磷酸化水平明显降低(F=162.30,89.59 Pa＜0.01),TH活力明显升高(F=115.49,78.63 Pa＜0.01),CK活力明显升高(F=98.75,80.17 Pa＜0.01).给予L-肌肽注射液腹腔注射后,A组大鼠大脑氧化磷酸化水平明显高于a组(t=15.80 P＜0.01),而TH活力和CK活力升高程度明显低于a组(t=15.05,8.29 Pa＜0.01);B组大鼠大脑氧化磷酸化水平也明显高于b组(t=11.34 P＜0.01),而TH活力和CK活力升高程度明显低于b组(t=11.38,11.34 Pa＜0.01);但在c组大鼠大脑氧化磷酸化水平并不明显高于c组(t=2.15 P＞0.05),TH活力和CK活力升高程度也不明显低于c组(t=0.77,1.88 Pa＞0.05).结论早期给予L-肌肽具有改善FS幼鼠大脑氧化磷酸化,减轻反复FS引发的神经细胞损伤,可能具有一定的保护神经细胞作用.
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L-肌肽对高热惊厥幼鼠神经细胞凋亡的影响
目的 探讨L-肌肽对幼年大鼠实验性高热惊厥后神经细胞凋亡的影响.方法 40只15日龄SD大鼠采用随机数字表法分为L-肌肽干预组(n=30)和惊厥对照组(n=10).采用热水浴法诱导干预组和惊厥对照组大鼠实验性FS发作10次;干预组又随机分为E、G、H组,分别在每次惊厥发作后30、60、120min腹腔注射L-肌肽250mg/kg;惊厥对照组仅诱发癫癎,不给予干预,末次惊厥后12 h处死大鼠,并采用原位末端脱氧核苷酸生物素标记法分别测定幼鼠海码结构及大脑皮层神经元凋亡情况,透射电镜观察其凋亡细胞超微形态学改变.结果 惊厥对照组神经细胞凋亡计数为25.37±1.95,E组为l2.364±1.13,G组为17.854±2.04,H组为22.69±2.69.惊厥对照组神经细胞凋亡明显高于干预组(F=10.75 P＜0.01);给予L-肌肽腹腔注射后E组和G组神经细胞凋亡明显低于惊厥对照组(t=18.26,8.45 Pa＜0.01);但H组神经细胞凋亡与惊厥对照组无明显差异(t=2.55 P＞0.05).透射电镜观察可见,惊厥对照组和H组大鼠海马CA1区、齿状回神经元损伤明显高于E组.结论 早期给予L-肌肽具有减轻反复FS引发的幼鼠神经细胞凋亡,具有一定的保护神经细胞作用.
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L-肌肽预处理对小鼠缺血再灌注心肌的保护作用
目的 探讨L-肌肽防治心肌缺血再灌注损伤(MIRI)的作用机制,为缺血性心脏病的防治提供实验依据.方法 健康昆明种小鼠24只,随机分成3组,每组8只;对照组腹腔注射生理盐水0.1 mL·10 g-1,每隔30 min注射1次,共3次;心肌缺血再灌注(MIR)组腹腔注射生理盐水0.1 mL·10 g-1,30 min后腹腔注射垂体后叶素(Pit)0.1 mL·10 g-1,间隔30 min后腹腔注射硝酸甘油(Nit)0.1 mL·10 g-1;L-肌肽预处理组腹腔注射L-肌肽0.1 mL·10 g-1,30 min后腹腔注射Pit 0.1 mL·10 g-1,间隔30 min后腹腔注射Nit 0.1 mL·10 g-1.观察3组小鼠心率变化,检测血清中乳酸脱氢酶(LDH)、心肌组织中丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性.结果 3组小鼠注射Pit前心率比较差别无统计学意义(P>0.05);注射Pit后各时点MIR组心率明显低于对照组(P<0.01),L-肌肽预处理组各时点心率明显高于MIR组(P<0.01);与对照组相比,MIR组小鼠血清LDH含量明显升高(P<0.01),心肌组织中SOD活性降低(P<0.01),而MDA水平升高(P<0.01);与MIR组比较,L-肌肽预处理组小鼠血清中LDH的含量心肌组织中的MDA水平显著降低(P<0.01),心肌组织中的SOD活性明显升高(P<0.01).结论 L-肌肽对缺血再灌注心肌具有保护作用,其作用机制可能与抑制脂质过氧化反应,增强其抗氧化能力有关.
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高效液相色谱法同时测定大鼠肠灌流液中L-肌肽和酚红的浓度
目的 建立HPLC方法同时测定大鼠肠灌流液中L-肌肽和酚红的质量浓度.方法 采用Kromasil NH2色谱柱(200 mm × 4.6 mm,5 μm),流动相为乙腈-磷酸盐缓冲液(1 mmol·L-1磷酸二氢钾,0.2 mmol·L-1 磷酸氢二钾) (体积比50∶50),流速1.0 mL·min-1,柱温35 ℃,检测波长210 nm,进样量20 μL.结果 L-肌肽和酚红分别在质量浓度22.6～158 mg·L-1(r=0.999 8)、14.2～99.4 mg·L-1(r=0.999 1)与峰面积线性关系良好,2种成分回收率分别为99.1%、98.8%,RSD均<3%.结论 所用方法准确、简便、专属性好,可准确快速测定大鼠肠灌流液中L-肌肽和酚红的含量;L-肌肽的摄取过程依赖于H+电位梯度.
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新药L-肌肽的波谱学数据与结构确证
目的 通过波谱学对新药L-肌肽的结构进行确证.方法 测定了L-肌肽的飞行时间质谱(TOF)、磁共振波谱(NMR)、二级质谱(MS/MS)、紫外(UV)、红外(IR)吸收光谱等,并且对样品进行热差和热重分析.结果 对该化合物所有的1H-NMR和13C-NMR谱信号进行了归属;讨论了红外特征吸收峰所对应的官能团的振动形式;该样品为单一晶型,不含结晶水.结论 确证了L-肌肽的结构,对其质量控制具有重要的参考价值.
