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脱氧雪腐镰刀菌烯醇对小鼠成骨细胞Pax1表达的影响
目的 探讨脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)对小鼠成骨细胞骨骼发育相关基因Pax1表达的影响.方法 麻醉后取胎鼠的顶骨,采用改良的组织块培养法体外培养小鼠成骨细胞,碱性磷酸酶法鉴定成骨细胞,将浓度为100、200、500、1000和1500mg/L的DON分别作用于对数生长期的成骨细胞,噻唑蓝(MTT)比色法检测DON对成骨细胞增殖的作用.半定量RT-PCR和Western blotting检测不同剂量DON对体外培养小鼠成骨细胞Pax1 mRNA和蛋白质表达的影响.结果 培养的细胞鉴定为成骨细胞,不同浓度DON能降低小鼠成骨细胞的增殖速度,并可增加小鼠成骨细胞Pax1 mRNA和蛋白质表达,随着DON浓度增加,小鼠成骨细胞Pax1基因表达增多越显著.结论 DON促进小鼠成骨细胞Pax1基因的表达,进而影响骨骼的发育.
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PAX1基因甲基化定量检测在宫颈癌癌前病变诊断中的应用价值
目的：探讨PAX1基因甲基化定量检测在宫颈癌癌前病变诊断中的应用价值。方法选取2013年1月至2015年10月就诊于上海交通大学附属第六人民医院的121例高危亚型人乳头状瘤病毒（human papilloma virus，HPV）感染患者为研究对象。根据病理学结果将其分为正常宫颈组（28例）、低级别病变组[宫颈上皮内瘤变（cervical intraepi-thelial neoplasia，CIN）Ⅰ，32例]、高级别病变组（CINⅡ～Ⅲ，34例）及癌变组[浸润性宫颈癌（invasive cervical cancers，ICC），27例]。收集各组患者的宫颈组织标本及宫颈刮片，采用反转录聚合酶链反应和焦磷酸测序技术定量分析PAX1基因9个位点的甲基化水平，并通过接受者操作特征曲线（ROC曲线）计算PAX1甲基化与各级别宫颈病变的关联性。结果癌变组、高级别病变组、低级别病变组、正常宫颈组PAX1基因9个位点的甲基化平均水平分别为4.66%、3.55%、2.10%、1.90%，组间比较差异均具有显著性（P＜0.05）。各组患者宫颈刮片和宫颈组织PAX1甲基化水平比较差异均具有显著性（P＜0.01），其中，癌变组PAX1甲基化发生率及水平均显著高于其他三组（P＜0.05）。通过PAX1基因甲基化水平鉴别诊断宫颈癌和CIN，结果显示其ROC曲线下面积为0.88（P＜0.001），具有较高的诊断能力。结论定量检测宫颈组织中PAX1基因的甲基化水平能够有效诊断高级别宫颈癌前病变，且其表达与疾病分期有关。
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人宫颈癌组织CDH1和PAX1基因甲基化研究
目的:检测上皮型钙黏附素(E-cadherin,CDH1)基因和配对盒基因家族PAX1基因在宫颈癌组织及人乳头瘤病毒(human papillomavirus, HPV)感染的正常宫颈组织、宫颈炎组织、宫颈上皮内瘤样病变(cervical intraepithelial neoplasia, CIN)Ⅰ组织、CIN Ⅱ～Ⅲ组织和宫颈癌组织中的甲基化情况,评估是否可将其作为临床诊断的分子标志物.方法:应用甲基化特异性聚合酶链反应法(methylation specific PCR, MSP)对HPV感染的正常宫颈组织、宫颈炎组织、CINⅠ组织、CIN Ⅱ～Ⅲ组织以及宫颈癌组织中的CDH1和PAX1基因进行甲基化检测.结果:HPV感染的正常宫颈组织、宫颈炎组织和CINⅠ组织中未检出CDH1基因甲基化;CINⅡ～Ⅲ组织中检出CDH1基因甲基化2例(13.3%),宫颈癌组织中检出CDH1基因甲基化9例(22.5%),与HPV感染的正常宫颈组织比较差异均有统计学意义(P＜0.05).HPV感染的正常宫颈组织和宫颈炎组织中未检出PAX1基因甲基化,CINⅠ、CINⅡ～Ⅲ和宫颈癌组织的PAX1基因甲基化阳性率分别为13.3%、46.7%和87.5%,CINⅡ～Ⅲ组织与CINⅠ和宫颈癌组织比较差异均有统计学意义(P＜0.05).CINⅠ组织、CINⅡ～Ⅲ组织和宫颈癌组织的CDH1和PAX1基因甲基化总阳性率分别为13.3%、60.0%和97.5%.结论:CDH1和PAX1基因甲基化,尤其是PAX1基因甲基化对于宫颈癌临床诊断具有潜在价值.
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PAX1基因启动子甲基化检测对宫颈癌及 宫颈癌前病变筛查的价值研究
目的 探讨配对盒基因家族PAX1基因启动子异常甲基化在宫颈癌和癌前病变早期诊断中的价值.方法 应用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)、高分辨率溶解(HRM)技术,对人乳头瘤病毒(HPV)感染的正常宫颈脱落细胞、宫颈炎脱落细胞、CIN Ⅰ脱落细胞、CINⅡ～Ⅲ脱落细胞及宫颈癌脱落细胞中的PAX1基因启动子进行甲基化检测,比较两种方法对不同级别宫颈病变的敏感度和特异度.结果 两种方法宫颈癌脱落细胞组与正常+宫颈炎脱落细胞组以及CINI,CINII～III宫颈脱落细胞组相比,差异均有统计学意义(P＜0.05).MSP法和HRM法检测PAX1基因启动子甲基化筛查宫颈癌的敏感度、特异度、阳性预测值和阴性预测值分别为54.55％,89.66％,66.67％,83.87％和72.73％,87.93％,69.57％,89.47％.结论 PAX1基因启动子甲基化对于宫颈癌临床诊断具有重要价值,HRM技术应用前景广阔.
关键词： 宫颈肿瘤 DNA甲基化 人乳头瘤病毒 Pax1 甲基化特异性聚合酶链反应 -
PAX1基因及其甲基化在宫颈癌作用的分子机制研究进展
PAX1隶属于配对盒基因家族,是一种重要的转录调控因子,PAX1通过调控细胞增殖,诱导细胞定向迁移等参与胚胎发育过程中重要器官的形成.新近研究表明,PAX1在宫颈癌组织中的甲基化频率非常高,且随病情的演变呈现明显的上升趋势.PAX1甲基化检测与HPV检测相比具有更高的敏感性和特异性.开展PAX1基因的甲基化检测有助于提高宫颈癌的检出率.目前,PAX1与其他一些甲基化基因联合应用检测宫颈癌的方法成为研究热点.但是,PAX1甲基化在宫颈癌中作用的分子机制研究还尚处于初步阶段.
