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ASC在ONO-AE-248诱导的中性粒细胞非凋亡、非坏死性死亡中的表达
目的:探讨凋亡相关斑点样蛋白(Apoptosis-associated speck-like protein,ASC)在ONO-AE-248所诱发的中性粒细胞非凋亡、非坏死性死亡中的作用及意义.方法:TUNEL法标记凋亡细胞,结合激光共聚焦扫描显微镜观察细胞核形态以及DNA片段化发生的情况;Western blot法检测不同药物刺激组(LPS延迟凋亡组、TNF-α促进凋亡组、ONO-AE-248刺激组以及自发性凋亡组)的ASC蛋白的表达差异性.结果:TUNEL法检测ONO-AE-248培养12小时后的中性粒细胞,未见TUNEL阳性细胞.Western blot结果显示ONO-AE-248刺激后中性粒细胞ASC蛋白的表达一直处于下调状态.结论:ONO-AE-248诱导人中性粒细胞死亡过程中细胞核DNA断裂方式明显不同于自发性凋亡组,核内染色体可能只发生DNA较大片段的断裂,而没有发生小片段化.ONO-AE-248引起的ASC表达的下调可能是这种新型细胞死亡方式区别于自发性凋亡的重要差异点.
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ONO-AE-248诱导中性粒细胞非凋亡性程序化死亡线粒体形态结构的变化
目的:探讨线粒体形态结构的变化在ONO-AE-248诱导的中性粒细胞非凋亡性程序化死亡中的作用及意义.方法:Ficoll法分离健康志愿者外周静脉血中性粒细胞,与ONO-AE-248共同培养,透射电子显微镜观察线粒体形态结构的改变;流式细胞术检测线粒体膜势能的变化.结果:ONO-AE-248刺激6小时,中性粒细胞线粒体显著肿胀,嵴断裂,数目增多;ONO-AE-248早期迅速导致中性粒细胞线粒体膜势能的溃散.结论:线粒体变化是ONO-AE-248诱导中性粒细胞非凋亡性程序化死亡区别于凋亡的早期形态学特征事件之一.线粒体可能在ONO-AE-248诱导的中性粒细胞非凋亡性程序化细胞死亡中扮演更为关键性的角色.
关键词： 线粒体 中性粒细胞 ONO-AE-248 凋亡 非凋亡性程序化细胞死亡 -
ASC在ONO-AE-248诱发的中性粒细胞非凋亡性程序化死亡中的作用
目的:探讨接受ONO-AE-248刺激后重要的差异表达蛋白--凋亡相关斑点样蛋白(Apoptosis-associated speck-like protein containing CARD,ASC)的表达及意义.方法:Ficoll法新鲜分离健康志愿者外周静脉血中性粒细胞(Polymorpho-nuclear neutrophils,PMN),与 ONO-AE-248 共同培养,2小时提取总RNA,并行反转录-PCR检测ASC mRNA的表达;12 小时提取总蛋白,双向电泳分离后,采用PDQest 2-DE软件分析找出差异表达的蛋白质斑点,并用基质辅助激光解吸电离飞行时间串联质谱(MALDI-TOF-MS)进行鉴定.结果:ONO-AE-248刺激2小时中性粒细胞ASC mRNA的表达明显下调(P＜0.01);12小时通过双向电泳和蛋白质质谱分析发现ASC为重要的差异表达蛋白且ONO-AE-248 刺激后的表达量明显低于自发性凋亡组.结论:ONO-AE-248引起的ASC表达的下调可能是中性粒细胞凋亡和ONO-AE-248诱导的中性粒细胞非凋亡性程序化细胞死亡的关键性差异点.ONO-AE-248 显著下调 ASC 的表达,可能是ONO-AE-248诱使中性粒细胞发生非凋亡性程序化死亡的根本原因之一.
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ONO-AE-248诱导的中性粒细胞非凋亡、非坏死性死亡中未出现DNA小片断化的分子机制初探
细胞经
关键词： ONO-AE-248 中性粒细胞 非凋亡 DNA片段化 DNA断裂因子 -
ONO-AE-248对诱发中性粒细胞非凋亡性程序化死亡中A1表达的研究
为探讨接受ONO-AE-248刺激后重要的表达蛋白-A1在中性粒细胞(polymorphonuelear neutrophils,PMN)非凋亡程序化细胞死亡中的的表达及意义,以进一步确定这种新型细胞死亡模式提供线索.采用Ficoll法新鲜分离健康志愿者外周静脉血PMN,与ONO-AE-248共同培养2 h后提取总RNA,并行反转录-PCR检测A1 mRNA的表达;Western blot检测A1蛋白的表达;透射电镜观察线粒体形态结果的变化.结果发现,ONO-AE-248刺激2 h时PMN A1 mRNA的表达明显上调(P<0.01);蛋白印迹法显示A1蛋白的表达增高;透射电镜观察ONO-AE-248刺激下的早期PMN线粒体超微形态结构发生了剧烈改变.提示ONO-AE-248引起A1表达的上调可能是ONO-AE-248诱使中性粒细胞发生非凋亡性程序化死亡的根本因为之一.
关键词： 中性粒细胞 ONO-AE-248 非凋亡性程序化细胞死亡 凋亡 A1 -
ONO-AE-248对诱发中性粒细胞非凋亡性程序化死亡中Bax-α表达的研究
目的:为探讨接受ONO-AE-248 刺激后重要的表达蛋白-Bax-α在中性粒细胞(Polymorphonuelear neutrophils,PMN)非凋亡程序化细胞死亡中的表达及意义,以进一步确定这种新型细胞死亡模式提供线索.方法:采用Ficoll法新鲜分离健康志愿者外周静脉血PMN与 ONO-AE-248 共同培养12 h后,流式观察ONO-AE-248对细胞活性的影响并提取总RNA,并行反转录-PCR检测Bax-α mRNA的表达;Western- blot检测Bax-α蛋白的表达.结果:ONO-AE-248 刺激 12 h时PMN Bax-α mRNA的表达与空白组比较无明显变化(P>0.05);蛋白印迹法显示,Bax-α蛋白的表达无差异;流式结果显示,ONO-AE-248刺激的中性粒细胞发生快速死亡.结论:Bax-α在ONO-AE-248诱导的非凋亡性程序化死亡中可能发挥着部分相同或相关的作用.
关键词： 中性粒细胞 ONO-AE-248 非凋亡性程序化细胞死亡 Bax-α 凋亡 -
NF-κB不参与ONO-AE-248诱发的中性粒细胞非凋亡、非坏死性死亡
目的 研究核转录因子NF-κB(Nuclear factor kappa B)在ONO-AE-248诱发中性粒细胞非凋亡、非坏死性死亡中的作用,探讨这种细胞死亡的分子机制.方法 Ficoll法分离健康志愿者外周静脉血中性粒细胞,与ONO-AE-248共同培养,通过Western blotting检测IκBα的蛋白表达水平,反映NF-κB的活化状态,并应用RT-PCR检测NF-κB调节的基因XIAP、DAD1和FLIP的mRNA表达水平.结果 ONO-AE-248不能促进中性粒细胞内IκBα蛋白降解,显示它并不诱导NF-κB活化.而且,ONO-AE-248对NF-κB调节的基因XIAP、DAD1、FLIP的mRNA表达也无明显影响(P>0.05).结论 ONO-AE-248诱发的中性粒细胞非凋亡、非坏死性死亡不依赖NF-κB信号转导通路,其介导中性粒细胞死亡的信号转导可能是不同于凋亡的独特转导途径.
关键词： NF-κB 中性粒细胞 ONO-AE-248 非凋亡非坏死性细胞死亡 信号转导 -
ONO-AE-248诱发线粒体膜势能降低导致中性粒细胞非凋亡性程序化细胞死亡
目的 研究线粒体在ONO-AE-248诱导中性粒细胞非凋亡性程序化细胞死亡中形态结构及功能的变化情况,为进一步确立这一新的死亡形式和找寻其独特的死亡信号转导途径提供实验依据.方法 体外新鲜分离人外周血中性粒细胞与ONO-AE-248共同培养,流式细胞术检测其线粒体膜势能的变化;激光共聚焦扫描显微镜观察线粒体形态结构和分布情况.结果 ONO-AE-248迅速导致中性粒细胞线粒体膜势能的溃散;ONO-AE-248刺激后中性粒细胞在线粒体形态、结构、分布和胞浆内染色特性等方面均与阴性对照有明显差异.结论 线粒体变化是ONO-AE-248诱导中性粒细胞非凋亡性程序化细胞死亡早期形态学上区别于凋亡的显著变化之一.线粒体膜通透性转变以及线粒体膜势能下降可能是ONO-AE-248诱导的非凋亡性程序化细胞死亡的主要原因.
关键词： 线粒体 中性粒细胞 ONO-AE-248 非凋亡性程序化细胞死亡 凋亡 -
凋亡相关基因在ONO-AE-248诱发的中性粒细胞非凋亡性程序化死亡中的表达
近年来许多学者研究发现凋亡并非是程序化细胞死亡的唯一形式,机体还可能存在不同于典型凋亡的其它主动性细胞死亡形式.由ONO-AE-248诱发的中性粒细胞快速死亡可能属于非凋亡性程序化细胞死亡[1,2].
关键词： ONO-AE-248 中性细胞 凋亡 -
ONO-AE-248诱导的中性粒细胞非凋亡性程序化细胞死亡的形态学变化
目的:研究前列腺素E受体亚型3(EP3)激动剂ONO-AE-248诱导的中性粒细胞(PMN)非凋亡性程序化细胞死亡的形态学变化,探讨PMN死亡形式的多样性和复杂性.方法:运用透射电镜、荧光显微镜及激光共聚焦扫描显微镜观察PMN在自发性凋亡与ONO-AE-248刺激下亚细胞微结构的变化.结果:以5 mmol/L的ONO-AE-248刺激PMN 12 h后,电镜观察绝大多数PMN的多叶核融合为单叶核,核质疏松,核膜分层、起泡甚至破裂,核质溢出,但细胞膜较完整,细胞器无明显改变.以荧光染料DAPI标染活细胞核,ONO-AE-248刺激后,PMN表现为多叶核融合成大而模糊的球形,核染色密度较低;ONO-AE-248刺激的PMN死亡仍有细胞膜磷脂酰丝氨酸(PS)的外翻.ONO-AE-248刺激组与自发性凋亡组PMN在线粒体的形态结构、分布和细胞质内的染色性均有明显差异.结论:ONO-AE-248在体外能刺激人PMN发生非凋亡性程序化细胞死亡,这一刺激过程不影响自发性凋亡的PMN细胞膜PS的外翻,并且细胞核和线粒体的改变是其早期为显著的形态学改变,提示二者可能是ONO-AE-248刺激的靶标和早期的药物反应中心.
关键词： ONO-AE-248 中性粒细胞 线粒体 凋亡 非凋亡性程序化细胞死亡 -
ONO-AE-248诱发的中性粒细胞非凋亡、非坏死性死亡
目的: 观察前列腺素E2受体亚型3 (EP3)激动剂ONO-AE-248对中性粒细胞的影响.方法:运用电子显微镜、MTS法、RT-PCR和流式细胞术等技术,对中性粒细胞的形态变化、生物学活性及凋亡进行观察和评估,并对EP3受体进行分析.结果:中性粒细胞存在EP3受体基因的表达,以5 mmol/L 的ONO-AE-248作用12 h后,其多叶核融合为单叶核,核膜起泡、破裂,核质溢出,细胞死亡; 但其快速死亡不具有细胞凋亡和坏死的形态特征且需要能量(ATP)供应.结论:ONO-AE-248所致这种新型细胞主动死亡的形式,可能为"非凋亡性程序化细胞死亡"的一种,这对于重新认识和定位中性粒细胞在非特异性免疫中的作用和地位提出了新的思路.
关键词： ONO-AE-248 非凋亡性程序化细胞死亡 中性粒细胞 凋亡 坏死
