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靶向c-FLIP在癌症治疗中的分子调节机制
凋亡对于维持组织的自稳态和正常发育非常重要.与凋亡相关的信号通路主要有两个:一个是配体结合诱导的外部凋亡通路,另一个是线粒体依赖的内部凋亡通路.c-FLIP是外部凋亡通路中的一个重要负调控因子,它的13个剪切突变体基因已经被鉴定,但是只有三个能翻译成蛋白质(c-FLIPL、c-FLIPS和c-FLIPR).c-FLIPL是一个55 kD的蛋白质,结构类似于Caspase-8前体,氨基端有两个DED结构域,羧基端有一个Caspase结构域.
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人源性羧肽酶A突变体基因的构建及表达
[董轲,郝晓柯,刘新平,张盈华,季少平. 细胞与分子免疫学杂志,2001;17(2):106-04] 目的从人正常肺组织中提取羧肽酶A基因并进行定点突变. 方法从人正常肺组织中提取RNA,并进行逆转录得到人羧肽酶A(hCPA). 以计算机模拟hCPA的结构,寻找合适的突变位点. 用PCR重叠延伸法,对羧肽酶A进行定点突变,并在大肠杆菌中表达. 结果序列分析表明,所获hCPA的核苷酸序列为1251 bp,编码417个氨基酸. hCPA突变体(mhCPA)基因的1126位核苷酸由G变为A,其余核苷酸序列均未发生变化,相应的此突变体蛋白质的376位核苷酸残基由丙氨酸突变为苏氨酸. 将mhCPA基因在E.coli中诱导表达3 h后,表达量高达30%左右. 结论成功地构建并表达了mhCPA基因,为hCPA在肿瘤的“抗体导向酶-前药疗法”(ADEPT)中的应用奠定了基础.
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人源性羧肽酶A突变体基因的构建及表达
目的 从人正常肺组织中提取羧肽酶A基因并进行定点突变. 方法 从人正常肺组织中提取RNA,并进行逆转录得到人羧肽酶A (hCPA). 以计算机模拟hCPA的结构,寻找合适的突变位点. 用PCR重叠延伸法,对羧肽酶A进行定点突变,并在大肠杆菌中表达. 结果 序列分析表明,所获hCPA的核苷酸序列为1251 bp,编码417个氨基酸. hCPA突变体(mhCPA)基因的1126位核苷酸由G变为A,其余核苷酸序列均未发生变化,相应的此突变体蛋白质的376位核苷酸残基由丙氨酸突变为苏氨酸. 将mhCPA基因在E.coli中诱导表达3 h后,表达量高达30%左右. 结论 成功地构建并表达了mhCPA基因,为hCPA在肿瘤的“ 抗体导向酶-前药疗法 ” (ADEPT)中的应用奠定了基础 .(潘伯荣)