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pS2融合蛋白的原核表达及其性质鉴定
目的:获得pS2融合蛋白.方法:RT-PCR法从乳腺癌组织中扩增pS2片段,定向克隆到PMS-31b载体上,重组质粒PMS-pS2转化温度敏感型细菌POP2136,使之高效表达融合蛋白MS2-pS2.结果:免疫组织化学试验(IHC)结果表明:纯化的融合蛋白MS2-pS2能与抗pS2进口单抗特异反应.酶联免疫吸附试验(ELISA)及Western blotting试验表明:MS2 -p S2能与pS2 C端31个氨基酸合成肽抗血清特异反应.以此融合蛋白为免疫原得到的抗血清可用于免疫组织化学分析.结论:pS2融合蛋白表达是正确的,亦为进一步研究pS2生物学功能及制备抗pS2单抗奠定了基础.
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葛根素在环氧乙烷-环氧丙烷共聚物/磷酸氢二钾体系中的分配行为研究
目的:研究葛根素在环氧乙烷-环氧丙烷共聚物(EOPO)/磷酸氢二钾(K2HPO4)体系中的分配行为.方法:利用温度诱导相分离,结合双水相萃取技术,确定EOPO型号、诱导温度及时间.结果:当EOPO型号为EOPO SDP30,诱导温度为70℃,诱导时间为60min,EOPO质量分数为28%,K2HPO4质量分数为24%时,葛根素大总收率可达42.26%.结论:该方法解决了传统双水相萃取技术中聚合物回收的难题,可以使EOPO循环使用,且方法设备投资少、操作简单,为工业化提取葛根黄酮提供了一条新途径.
关键词： 双水相萃取技术 葛根素 温度诱导 环氧乙烷-环氧丙烷共聚物 磷酸氢二钾 -
重组融合蛋白GX1-rmhTNFα的克隆、表达及鉴定
目的:构建胃癌新生血管导向性肽GX1与新型人肿瘤坏死因子(GX1-rmhTNF)基因的原核表达载体,表达GX1-rmhTNF蛋白.方法:利用基因工程方法将胃癌血管特异性结合肽融合在新型人肿瘤坏死因子α的氨基末端,构建GX1-rmhTNF原核表达载体,在大肠杆菌进行表达.对表达产物进行SDS-PAGE电泳分析和Western blot检测分析.结果:成功构建了GX1-rmhTNF重组融合表达质粒,表达的蛋白经SDS-PAGE电泳分析,在相对分子质量(Mr)约18 000处出现了1条新生的蛋白条带,该表达蛋白具有与TNFα单克隆抗体特异性的结合能力.结论:成功构建了GX1-rmhT-NF基因的原核表达载体并在原核细胞中表达了该产物,为下一步GX1-rmhTNF的纯化奠定了基础.
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幽门螺杆菌毒素相关基因的克隆、测序及表达
目的分段扩增、克隆幽门螺杆菌毒素相关基因cagA中间区cag1,cag2,并利用大肠杆菌系统表达. 方法 PCR法扩增cagA基因,双脱氧中止法测序正确后,克隆入大肠杆菌表达载体pBV220, 受控于PRPL启动子, 转化大肠杆菌DH5α,42℃进行温度诱导. 结果 PCR分段扩增出cagA中间区基因cag1, cag2, 分别为975,755 bp, 克隆入pUC19质粒,测序正确;在pBV中构建cag1, cag2的重组表达载体pBVcagA1, pBVcagA2, 工程菌诱导后SDS-PAGE显示新生表达蛋白带, Mr: Cag1 36×103, Cag2 27.9×103,均与预期的cagA蛋白Mr一致,约占菌体总蛋白的36%和24%. 结论成功克隆分段扩增的cagA中间区基因,并可在大肠杆菌DH5α中高效表达.
