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幽门螺杆菌尿素酶A、过氧化氢酶的表达及纯化
目的：探讨重组尿素酶A亚单位（UreA）、过氧化氢酶（KatA）疫苗在防治幽门螺杆菌（HP）感染中的作用。方法：构建表达UreA、KatA的重组质粒，用IPTG诱导表达融合蛋白，并进行SDS-PAGE凝胶电泳及Western blot分析，Bulk GST Purification Module试剂盒纯化UreA和KatA。结果：构建的重组质粒能表达GST-UreA和GST-KatA融合蛋白，表达量占细菌总蛋白量的35%和19%，并能与抗GST抗体发生特异性反应。纯化的UreA、KatA的纯度达95%以上。结论：该工作为进一步的动物免疫实验奠定了基础，该重组疫苗有望在HP感染及其相关疾病的防治中发挥积极作用。
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幽门螺杆菌尿素酶A基因的克隆、表达及其抗原性的鉴定
目的构建幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)标准株NCTC11639尿素酶A(UreaseA,UreA)编码基因的重组质粒,测定、分析其核酸序列,并在E.coli中表达,研究其抗原性.方法应用PCR技术从Hp DNA染色体中扩增UreA编码基因片段,将其克隆至pMD18-T载体上进行序列测定,并与GenBank上公布的其它Hp菌株基因序列进行比较,再将目的基因克隆至表达载体pGEX-4T-1上进行表达和纯化,用Western-blot检测产物的抗原性并用于对24株抗Hp全菌小鼠单克隆抗体的鉴定.结果扩增的UreA基因全长675 bp(登录号为DQ141577),与GenBank上公布的其它Hp菌株的UreA核酸序列的同源性为95%～98%,表达的UreA融合蛋白分子量为52 000,表达产物可被病人血清和全菌免疫的小鼠血清识别,29株抗Hp小鼠单克隆抗体中有4株是针对UreA抗原的.结论重组UreA具有较好的抗原性,为Hp检测试剂和疫苗的研究奠定基础.
