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CK20单克隆抗体研制及鉴定
目的:研制CK20单克隆抗体.方法:采用CK20抗原免疫小鼠,用免疫的脾细胞和SP2/0骨髓瘤细胞通过PEG4000融合,以HT培养基选择培养,间接ELISA法筛选阳性孔和有限稀释法克隆细胞后,接种小鼠腹腔制备腹水抗体,抗体纯化采用以SPA-Sepharose CL-4B为固定相的亲和层析法,后用双向琼脂扩散法、Western blot和间接ELISA法鉴定抗体的特异性、Ig亚型和效价.结果:获得一株稳定分泌抗CK20单克隆抗体的杂交瘤细胞,染色体众数为101(99～103),其腹水抗体和纯化的抗体效价均为1:106,属IgG1亚型.结论:成功获得了CK20单克隆抗体,命名为L20031030,其特异性强,效价高.
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CK20单克隆抗体的制备及鉴定
0 引言研究CK20表达用于诊断和评估膀胱肿瘤,已成为国内外研究热点之一. 但目前国内的抗CK20 mAb一直依赖进口,价格昂贵且不便运输,严重影响其推广应用和研究. 我们于2002年成功地从膀胱癌T24细胞系中提取CK20抗原[1],我们采用CK20抗原通过杂交瘤技术制备抗CK20 mAb,为进一步研制CK20 mAb胶体金试剂盒筛查膀胱癌奠定基础.
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细胞角蛋白20单克隆抗体纯化方法的探讨
[目的] 探讨细胞角蛋白20(CK20)单克隆抗体纯化的方法.[方法] 采用SPA-Sepharose CL-4B为固定相的亲和层析法,将含有CK20单抗的小鼠腹水过柱后,用pH 6.0、4.0和3.0 3个范围 0.1 mol/L 枸橼酸分步洗脱,并以双向琼脂扩散法和Western-blotting对获得的单抗加以鉴定.[结果] 以枸橼酸3个pH范围洗柱时分别收集 5 ml、4 ml 和 20 ml 洗脱液,双向琼脂扩散法鉴定结果是:pH 6.0时洗脱液中单抗亚型是IgG1、pH 4.0时为IgG2a、pH 3.0时为IgG2b,Western-blotting结果表明所获抗体具有较高免疫活性.[结论] 该方法简便、特异,并可直接获得不同亚型单抗,适合腹水中CK20单克隆抗体纯化.
