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欧蓍草文献资料
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欧蓍草花粉主要过敏原Par j1的重组表达及鉴定
目的:克隆、表达和纯化欧蓍草花粉主要过敏原Par j 1.方法:根据Par j 1.0102在GenBank中的序列号获得其核苷酸和氨基酸序列,确定开放阅读框,采用DNAstar软件优化密码子,合成全基因,并克隆到表达载体pET-44a中,转化表达宿主大肠杆菌Rosetta,优化蛋白表达条件并进行亲和层析纯化和Western blot鉴定.结果:PCR扩增及重组质粒测序结果表明成功地构建了pET-44a+/Par j 1.0102原核表达质粒.对表达菌表达条件进行优化,终确定在30℃,IPTG浓度为1.0 mmol/L,诱导4小时时蛋白表达量高,重组蛋白经亲和层析纯化,SDS-PAGE分析纯化产物在23 kD处有明显的条带.Western blot表明重组蛋白具有与StrepII标签抗体结合活性.结论:国内首次获得融合StrepII标签的Par j 1.0102重组蛋白,为欧蓍草花粉过敏诊断及特异性免疫治疗奠定基础.
