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基因工程鼠Muc1-MBP融合蛋白的制备及其免疫活性测定
目的:制备鼠Muc1-MBP融合蛋白,探讨其免疫活性.方法:将pMAL-Muc1转化大肠杆菌,通过IFTG诱导、SDS-PAGE和Western blot鉴定Mucl的表达,Amylose resin亲和层析纯化Muc1-MBP.将Muc1-MBP融合蛋白免疫小鼠,采用ELISA方法检测小鼠血清Muc1特异性抗体的水平;MTT法测定小鼠抗Muc1特异的CTL活性;ELISPOT法测定脾脏淋巴细胞IFN-γ的分泌.结果:获得稳定表达Muc1的菌株,制备了分子量67 kD较纯的Muc1-MBP融合蛋白.Muc1-MBP融合蛋白免疫小鼠产生高效价Muc1特异抗体,效价在8 000~16 000之间,Muc1-MBP融合蛋白可诱导CTL杀伤活性,对人乳腺癌MCF-7和小鼠Lewis肺癌LLC1靶细胞的杀伤率分别为(74.5±5.9)%和(60.5±10.4)%,与对照组比P<0.05,差异显著;Mucl.MBP融合蛋白免疫可诱导脾脏淋巴细胞分泌IFN-γ,特异性活化Th1细胞.结论:成功制备莺组鼠Muc1-MBP融合蛋白,其不仅能诱导特异体液免疫应答,而且可诱导细胞免疫应答,尤其能诱导对人类MCF-7细胞较小鼠lewis肺癌LLC1细胞更加强烈的CTL杀伤活性,提示异种同源蛋白疫苗具有比同源蛋白疫苗更好的抗肿瘤作用.
关键词： 鼠Muc1 Muc1-MBP融合蛋白 CTL活性 异种同源蛋白 肿瘤疫苗 -
重组鼠Muc1-MBP融合蛋白疫苗体内抗肿瘤作用
目的:研究重组鼠Muc1-MBP蛋白的体内抗肿瘤作用.方法:采用皮下注射法将不同剂量Muc1-MBP蛋白免疫小鼠,2 wk/次,共免疫3次.在第3次免疫后4 d,给予C57BL/6小鼠尾静脉注射LLCl细胞,或给予5 Gy x射线照射的ICR小鼠背部皮下注射MCF-7细胞.注射3 wk后剥离并测量肿瘤大小;肿瘤组织行常规HE染色.免疫组织化学染色分析肿瘤周围浸润的淋巴细胞亚群.结果:LLCl细胞尾静脉接种后21 d,肺肿瘤结节对照组,Muc1-MBP 0.15 g/L组小鼠分别为54和39个(100%),Muc1-MBP 0.3 g/L组小鼠共计17个(60%),提示Muc1-MBP 0.3 g/L组可显著抑制肺癌的生长(P<0.05),Muc1-MBP0.15 g/L组作用较弱.皮下接种MCF-7细胞后21 d,对照组,Muc1.MBP0.15 g/L组小鼠100%(6/6)可见乳腺癌瘤体形成,平均体积分别为(142.8±70.2)和(96.1±53.4)mm~3,Muc1.MBP 0.3 g/L组瘤体形成66.7%(4/6),平均体积为(54.5±46.7)mm~3.表明Muc1-MBP 0.3 g/L组免疫后可显著抑制人乳腺癌移植瘤生长(P<0.05),Muc1-MBP 0.15 g/L组作用较弱.免疫组化结果显示MucI-MBP免疫组肿瘤周围有大量CD4~+和CD8~+T的细胞浸润到肿瘤周围.结论:Muc1-MBP诱导免疫能够明显抑制LLC1,MCF-7细胞的生长,为临床应用研究奠定了基础.
关键词： MUC1 Muc1-MBP融合蛋白 异种同源蛋白 肿瘤疫苗
