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UreC文献资料
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在真核细胞中表达的幽门螺杆菌UreC,OipA抗原性的检测及其对细胞的作用
目的:研究幽门螺杆菌(Hp)UreC、OipA基因重组子转染胃上皮细胞后表达产物的抗原性及其对胃上皮细胞的作用,为两种毒力因子DNA疫苗的研制提供可行性依据及安全性指标.方法:用RT-PCR方法从国际标准株NCTC11637中获取UreC、OipA全长基因,克隆入pGEM-T Easy载体并测序,以重组T载体为模板,将两种基因的开放读码框架分别定向克隆入pcDNA3.1载体;获得的重组子转染SGC-7901细胞,筛选耐潮霉素的细胞克隆,用RT-PCR及Immuno-blot方法检测细胞内UreC、OipA蛋白的表达和抗原性;用荧光染色技术、MTT、流式细胞术分别检测UreC、OipA对细胞表型、增殖及凋亡的影响.结果:SoipA、SureC细胞(分别转染OipA、UreC重组子)表达相应的产物且具有抗原性.荧光显微镜下观察SoipA、SureC细胞未见明显形态学改变;用MTT法检测细胞增殖:SoipA、SureC细胞与SpcDNA3.1细胞(转染pcDNA3.1)比较,生长增殖无显著性差异(P＞0.05),流式细胞技术检测细胞凋亡结果:SoipA和SureC的凋亡率与SpcDNA3.1比较无显著性差异(P＞0.05).结论:OipA、UreC在培养细胞内的表达产物具有抗原性且对细胞的功能无影响, 可考虑用于制备DNA疫苗.
