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TLR4胞外段蛋白文献资料
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人TLR4胞外段的克隆、表达及功能活性分析
目的:获得高纯度、高活性的人TLR4 胞外段蛋白.方法:采用PCR方法从含人TLR4 cDNA的质粒pCDNA3-TLR4中扩增人TLR4 胞外段基因片段,将其插入载体pET32a并导入大肠杆菌BL21(DE3)plysS中表达.用Ni2+-NTA琼脂糖柱纯化融合蛋白.SDS-PAGE和免疫印迹分析目的蛋白的相对分子质量和抗原性,ELISA和FCM鉴定其功能活性.结果:获得1 911 bp 的人TLR4 胞外段基因片段,构建成重组表达载体pET32a-TLR4并在大肠杆菌中表达.TLR4-Trx融合蛋白的表达量占菌体总蛋白的12%,其纯度较高.ELISA和FCM检测显示,TLR4-TrX融合蛋白不仅与配体LPS结合,还能竞争性抑制LPS与THP1细胞结合.结论:所获TLR4-Trx融合蛋白纯度高,功能活性好,为进一步研究TLR相关的免疫调节机制提供物质基础.
