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mTSLP-V1／V2融合蛋白的真核表达与鉴定
目的：将鼠胸腺基质淋巴细胞生成素（ mouse thymic stromal lymphopoietin ，mTSLP）与人免疫缺陷病毒1型（ hu-man immunodeficiency virus type 1，HIV-1）B亚型分离株BAL的gp120 V1/V2结构域在293F真核细胞表达体系中进行融合表达。方法：以真核表达质粒pCEP-Pu为载体，构建mTSLP与gp120BAL V1V2融合基因的重组蛋白表达质粒pCTV1V2BAL。限制性酶切电泳与测序验证质粒构建正确后，使用PEI瞬时转染293 F悬浮细胞，表达产物以SDS-PAGE与Western blot进行分析，并对纯化后重组蛋白的V1/V2抗原表位进行了ELISA分析。结果：SDS-PAGE、Western blot分析显示，在表观分子量35 kD至55 kD的范围内存在一条不均一的糖蛋白条带，并且能与抗mTSLP多克隆抗体和抗His标签单克隆抗体发生反应。 HIV-1阳性病人血清能够识别mTSLP-V1/V2BAL上的HIV-1V1/V2抗原表位。结论：在293F中成功表达了mTSLP-V1/V2BAL融合蛋白，该蛋白具有HIV-1gp120BALV1/V2区的抗原表位，能够用于HIV-1 gp120 V1/V2亚单位疫苗的研究。
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HIV-1CRF01_AE重组型gp120 V1/V2结构域单克隆抗体的制备与鉴定
目的 真核表达人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1) CRF01_AE重组型gp120蛋白的V1/V2结构域,制备其单克隆抗体并鉴定其抗原反应性.方法 构建pTriEx-3-V1/V2CNE55真核表达载体,在HEK293F细胞中表达V1/V2-His融合蛋白,纯化后作为抗原免疫BALB/c小鼠,取免疫后的小鼠脾细胞与Sp2/0骨髓瘤细胞融合,ELISA筛选分泌抗V1/V2重组蛋白单克隆抗体的阳性杂交瘤,对单克隆抗体的特异性、型别以及效价进行鉴定.结果 制备并获得一株稳定分泌抗HIV-1 AE亚型V1/V2结构域单克隆抗体的杂交瘤细胞株,ELISA测定腹水效价高达1:81 000,单克隆抗体类型属于IgG1/κ型.Western blot结果表明该单克隆抗体同样能够识别不同亚型的HIV gp120蛋白.结论 成功制备出抗HIV-1 AE重组型gp120蛋白V1/V2结构域的单克隆抗体.
