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影响凝血四项检测结果异常原因的分析
目的 分析凝血标本的采集量、离心时间、离心速度、储存时间和标本是否溶血等对PT、APTT、TT、Fib四项检测指标的影响,便于日常检测过程中控制.方法 回顾性分析2016 年1月至2016年12月在我院检验科检测859例不同因素的凝血标本对PT、APTT、TT和Fib四项指标影响的临床资料.结果 采血量<2.0 ml标本和>2.0 ml标本检测PT、APTT和TT结果均明显长于重新采血合格的标本(P<0.05),Fib检测结果短于重新采血合格的标本(P<0.05);标本经5、10、15 min后不同离心时间检测PT、APTT、TT和Fib结果间比较(P>0.05);标本经4 000 r/min离心5 min和3 000 r/min离心15 min,其四项检测结果间无统计学差异(P>0.05);标本在室温(20℃-25℃)环境下储存1 h 后检测凝血四项结果与立即送检标本检测结果比较(P>0.05);标本储存4 h后检测APTT长于储存2 h标本,TT明显短于储存2 h标本(P<0.05),PT和Fib检测结果与储存2 h标本比较(P>0.05);标本在4℃环境下储存1 h、2 h、4 h后检测凝血四项结果,不同时间之间比较(P>0.05),不同储存时间段与立即送检标本检测凝血四项结果比较(P>0.05),溶血标本检测PT和APTT结果明显短于未溶血标本检测的结果(P<0.05);溶血标本检测TT结果明显长于未溶血标本(P<0.05);溶血标本检测Fib结果与未溶血标本(P>0.05).结论 抗凝比例不合适、室温时间储存过长和标本溶血与否等都是导致检测结果准确性和可靠性异常原因,可用4 000 r/min离心5 min替代3 000 r/min离心15 min以更快速地向临床报告检测结果.
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2645例凝血常规四项检测结果模式的临床意义分析
目的:探讨血浆样本凝血常规四项检测结果模式的临床意义.方法:对2018年4月～2018年9月在我院门诊和住院由临床医生申请检查凝血四项的患者进行凝血常规四项检测,并就结果模式进行统计分析.结果:经统计分析我院2645例凝血常规四项的结果模式,有九种常见模式,其中模式1占68.51％、 模式2占18.19％、 模式3占6.01％,前五种模式占98.97％.结论:通过对凝血结果模式的临床意义总结分析,可使临床医务人员能便捷的掌握各种结果模式,从而快速地进行临床判断和临床运用.
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乏血小板血浆凝胶包埋人脐带间充质干细胞的三维培养体系构建
目的 探讨乏血小板血浆凝胶包埋人脐带间充质干细胞的三维培养体系的可行性.方法 收集足月健康剖宫产新生儿脐带标本,采用组织块培养法进行脐带间充质干细胞的分离培养;收集足月健康剖宫产新生儿脐带血标本,采用二次离心法提取乏血小板血浆,用ELISA方法检测乏血小板血浆中纤维蛋白原浓度.分别用平面培养和三维培养人脐带间充质干细胞:A组:10％胎牛血清;B组:10％胎牛血清+乏血小板血浆凝胶.观察人脐带间充质于细胞在平面培养与三维培养条件下形态变化.结果 直接贴壁培养法3周左右分离出人脐带间充质干细胞.传至3代后,细胞呈现较均一的长梭形,并呈漩涡状排列.经离心提取的脐带血乏血小板血浆,测得其纤维蛋白原浓度为4～5 g/L.人脐带间充质干细胞在平面培养体系中表现为不规则多角形,长梭形,呈漩涡状排列,部分重叠;在三维培养体系中人脐带间充质干细胞表现为多突触的星形或长梭形,细胞突触较长,细胞间连接呈网状;人干细胞逐渐从凝胶周围爬出,乏血小板血浆凝胶逐渐降解,人脐带间充质干细胞错综交织,部分呈铺路石状.结论 乏血小板血浆凝胶可作为体外培养人脐带间充质干细胞的三维载体.
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离心条件对凝血三项检测结果的影响及分析
目的：验证该实验室常规凝血检测离心条件并探讨建立优化离心条件。方法以该院体检者及住院患者为研究对象，分为常规组、标准组、提速组。应用不同离心条件离心获得乏血小板血浆（PPP），进行常规凝血项目凝血酶原时间（PT ）、国际标准化比率（INR）、纤维蛋白原（FIB）、活化部分凝血活酶时间（APT T ）的检测；其次对不同血小板含量的标本采用常规条件和标准条件离心后，检测血浆中剩余血小板含量。结果常规组和提速组的凝血常规各项检测结果与标准组比较，差异无统计学意义（P＞0．05）；血小板浓度低于500×109／L 时，常规条件和标准条件离心后 PPP 100％合格，血小板浓度高于500×109／L 时合格率降低为64％。结论目前的常规离心条件可以满足常规凝血检测，对特殊类型凝血检测及血小板浓度高于500×109／L 的标本，需要严格按照美国临床和实验室标准化协会（CLSI）的要求进行离心处理。
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影响凝血4项检测结果异常原因的研究
目的 探讨凝血标本的采集量、离心时间、离心速度、储存时间和标本是否溶血等对凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血活酶时间(APT T)、凝血酶时间(T T)、纤维蛋白原(Fib)检测指标的影响.方法 回顾性分析2016年1-12月该院检验科859例不同因素的凝血标本对PT、A PT T、T T、Fib指标的影响.结果 采血量小于2.0 mL标本和大于2.0 mL 标本检测 PT、APT T、T T 结果均明显长于重新采血合格的标本(P<0.05),Fib检测结果短于重新采血合格的标本(P< 0.05);标本经5、10、15 min 后不同离心时间检测 PT、APT T、T T、Fib水平比较,差异无统计学意义(P>0.05);4项指标的标本经4000 r/min离心5 min和3000 r/min离心15 min比较,差异无统计学意义(P>0.05);标本在室温(20~25 ℃)环境下储存1 h 后检测凝血4项结果与立即送检比较,差异无统计学意义(P>0.05);标本储存4 h后检测APTT 长于储存2 h的标本,TT明显短于储存2 h的标本(P< 0.05),PT 和 Fib检测结果与储存2 h的标本比较,差异无统计学意义(P>0.05);标本在4 ℃环境下储存1、2、4 h后的凝血4项结果,差异无统计学意义(P>0.05),不同储存时间与立即送检标本的凝血4项结果比较,差异无统计学意义(P>0.05),溶血标本检测PT 和APT T 结果明显短于未溶血标本(P<0.05);溶血标本检测T T 结果明显长于未溶血标本(P<0.05);溶血标本检测Fib结果与未溶血标本比较,差异无统计学意义(P>0.05).结论 抗凝比例不合适、室温时间储存过长和标本溶血与否等都可导致检测结果的准确性和可靠性出现异常,采用4000 r/min离心5 min替代3000 r/min离心15 min可更快速地向临床报告检测结果.
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库存血小板血浆中sCD40L含量变化及其对PMNs呼吸爆发的作用
目的 探讨单采血小板(A-PLTs)和白膜法浓缩血小板(BC-PLTs)库存过程中,其乏血小板血浆(简称血浆)中可溶性CD40配体(sCD40L)含量变化及对中性粒细胞(PMNs)呼吸爆发的作用.方法 取库存d1、d3、d5的A-PLTs和BC-PLTs,离心分离获得血浆；ELISA检测血浆中sCD40L的含量；用活性氧特异性荧光探针二氢若丹明123(DHR),流式细胞术检测PMNs呼吸爆发；以小鼠抗人CD154抗体抑制试验去除sCD40L.结果 sCD440L含量(pg/mL),在血小板库存d1、d3、d5时,A-PLTs血浆分别为1 341.62±279.92、2 589.69±856.83及3 250±1 170.44(P＜0.05)；BC-PLTs血浆分别为3 342.35±1 322.30、3 827.12±1 714.43及3691.87±1 631.03 (P＞0.05).血浆引发fMLP(formyl-Met-Leu-Phe)活化的PMNs呼吸爆发程度(PMNs的引发活性),库存d1、d5 A-PLTs血浆处理组相对于单独加入fMLP阴性对照组其MFI比值相应为1.25±0.1、1.76±0.41 (P＜0.05).用小鼠抗人CD154抗体特异性去除血浆中的sCD40L后血浆引发fMLP活化的PMNs呼吸爆发程度相应降低41.84％.以0.1 μm滤器滤除血小板微粒后血浆引发fMLP活化的PMNs呼吸爆发程度相应降低69.56％.结论 常规库存的血小板随库存时间延长,其血浆中的sCD40L水平升高,并对fMLP活化的PMNs的呼吸爆发具有引发作用.
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不同方法调整血小板数量对血小板聚集功能检测的影响
目的 寻求更好的方法调整富血小板血浆(PRP)中的血小板数量,以满足光透射血小板聚集检测(LTA)对样本的质量要求.方法 收集18～50岁健康人血样36例.分别以乏血小板血浆(PPP)和生理盐水(PS)调整PRP中血小板数量,调整(稀释)倍数为1.5倍、2倍、2.5倍和3倍,以终浓度5μmol/L二磷酸腺苷(ADP)、0.5 mmol/L花生四烯酸(ARA)、2 μg/mL胶原(COL)、5μmol/L肾上腺素(EPI)以及1.2 mg/mL瑞斯托霉素(RIS)为诱导剂,测定调整前后PRP的血小板大聚集率(MA)的差异.用PRP离心制备的PPP(离心PRP-获取-PPP),比较其与传统方法(离心全血-获取-PPP)对RIS诱导血小板聚集的影响.结果 当ADP、ARA或EPI为激活剂时,PS各调整倍数的PRP与原PRP相比,其MA值的差异无统计学意义(P＞0.05);而PPP各调整倍数的PRP与原PRP相比,其MA值均下降,在调整倍数为2～3倍时,差异有统计学意义(P＜0.05).当激活剂为RIS时,PS各调整倍数的PRP与原PRP相比,其MA值均下降,且差异有统计学意义(P＜0.05);而PPP各调整倍数的PRP与原PRP相比,其MA值的差异无统计学意义(P＞0.05).当激活剂为COL时,PS和PPP各调整倍数的PRP与原PRP相比,其MA值的差异均无统计学意义(P＞0.05).全血或PRP离心制备的PPP,均不影响RIS诱导血小板聚集的MA值(P＞0.05).结论 以ADP、ARA、COL或EPI为诱导剂检测MA时,推荐使用PS调整血小板数量;而以RIS为诱导剂时,应使用自身PPP调整血小板数量;2 100×g,5 min条件下用传统离心全血制备的PPP方便可行.
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建立九色流式细胞术定量检测血浆中不同来源微粒
目的 建立九色流式细胞术定量检测人血浆中不同来源微粒的实验方法.方法 用CD235a、CD41a、CD45、CD34、CD66b、CD20、CD3、CD14等8种抗体和Annexin-V建立定量检测人血浆中不同来源微粒九色流式染色方案.用乏血小板血浆标本分别进行抗体的单色染色和缺一色染色实验,确定补偿和电压后,2014年12月-2015年1月对10例正常成人的血浆标本进行检测分析,并进行重复试验及稀释试验.结果 缺一色染色中,阳性微粒群较单色染色变化均＜ 15％.系列稀释血浆中的血小板及红细胞来源微粒具有良好的直线相关性.重复试验中,红细胞、血小板、粒细胞来源微粒的变异系数均＜10％.检测的10例正常成人乏血小板血浆标本,能分别检测到血小板、红细胞、内皮细胞、单核细胞、粒细胞、B淋巴细胞及T淋巴细胞来源微粒,其平均浓度及范围分别为132.6个/μL(60.6～288.9个/μL)、35.4个/μL(22.0～99.7个/μL)、21.6个/μL(3.3～45.5个/μL)、13.9个/μL(7.3～35.1个/μL)、60.0个/μL(22.5～101.2个/μL)、21.9个/μL(6.0 ～ 33.4个/μL)、1.2个/μL(0.7～2.8个/μL).结论 建立了九色流式细胞术定量检测人血浆中不同来源微粒的实验方案,该方法简单实用,适合临床推广应用.
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血小板血浆对人牙髓细胞增殖的影响
目的:观察血小板血浆及其细化成分对人牙髓细胞增殖的影响.方法:使用因正畸而拔除的人牙的牙髓细胞,用细胞定量测定试剂盒测定细胞增殖情况.结果:5%的多血小板血浆(platelet-rich plas-ma,PRP)、5%和10%的洗净血小板(washed platelet,WPLT)均明显地促进了人牙髓细胞的增殖,而且WPLT的作用较PRP更显著.乏血小板血浆(platelet-poor plasma,PPP)呈浓度依赖性地抑制了人牙髓细胞增殖,5%WPLT促进人牙髓细胞增殖的作用.结论:去除血浆成分的WPLT对培养的人牙髓细胞增殖有明显的促进作用;血浆中可能存在对抗血小板生长因子作用的因子.
