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鸡VCP蛋白全长cDNA的克隆及序列分析
目的 获得鸡含缬酪肽蛋白(Valosin-containing protein,VCP)的cDNA和氨基酸序列,为进一步研究VCP和视网膜发育及病变的关系提供理论依据.方法 根据已发表的鸡ATP酶p97的基因序列片段设计引物,从白来杭鸡视网膜cDNA文库中获得VCP全基因序列,并进行序列分析和比较.结果 获得了VCP的全长cDNA序列,此基因cDNA全长为有2916 bp,并有2421 bp的完整开放阅读框,编码806个氨基酸.鸡VCP的基因及其对应的氨基酸序列与人、小鼠VCP基因及其对应的氨基酸序列高度同源,并具有ATP酶结合位点的高度保守AAA序列.结论 获得了全长cDNA序列已在Genbank中登录(AB195711),为从基因及蛋白质水平研究VCP和视网膜发育及病变的关系奠定了基础.
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含缬酪肽蛋白基因单核苷酸多态性在肝细胞癌中的研究
目的:探讨含缬酪肽蛋白(valosin containing protein,VCP)基因不同位点单核苷酸多态性(single nucleotidepolymorphism,SNP)与肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)的关系.方法:采用病例组与对照组研究,收集122例HCC(HCC组)和120例非HCC(对照组)外周血标本,对VCP基因的4个标签SNPs采用直接测序法进行基因测定分型.采用卡方检验比较基因型及等位基因在HCC组与对照组之间分布的差异,采用非条件Logistic回归分析多态基因型与HCC的关系.结果:rs546982位点等位基因及基因型在HCC组与对照组中的分布具有显著性差异(P＜0.05).携带rs546982位点AA基因型者比GG基因型者发生HCC风险低,而携带AA基因型的HCC病人比携带GG基因型的HCC病人发生脉管癌栓及淋巴结转移的风险高.位点rs2074549、rs607671、rs10972300的基因型在HCC组和对照组之间差异无统计学意义.结论:VCP基因多态性与HCC存在关联,rs546982位点AA基因型可降低HCC发生率,但可增加HCC病人的淋巴结转移及脉管癌栓的风险.
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miRNA-129-5p靶向调控VCP基因在人骨肉瘤细胞中表达初步探讨
目的：含缬酪肽蛋白（valosin-containing protein， VCP）基因高表达能通过AKT/PI3K/NF-KappaB/MMP-9等信号通路促进骨肉瘤转移，但VCP基因上游调控机制仍不清楚。文中初步探讨miRNA-129-5p是否调控人骨肉瘤细胞中VCP基因表达及调控靶点。方法运用生物信息学预测软件TargetScanhuman 6．2（http：//www．targetscan．org/）预测miRNA-129-5p在VCP基因（ NM_007126）可能的作用位点。构建野生型VCP 3′UTR报告基因载体（ psi-VCP Vector ）及预测位点突变型VCP 3′UTR报告基因载体（psi-VCPmut Vector），测序鉴定。细胞转染分4组，psi-VCP Vector＋miRNA-129-5p mimic共转染U2-OS细胞为VCP实验组，psi-VCP Vector＋阴性miRNA mimic共转染U2-OS细胞为VCP对照组；psi-VCP突变Vector＋miRNA-129-5p mimic共转染U2-OS细胞为VCP突变实验组，psi-VCP突变Vector＋阴性miRNA mimic共转染U2-OS细胞为VCP突变对照组。分别检测荧光海肾素酶活性。结果 Targetscan软件预测结果显示miRNA-129-5p在VCP 3′UTR163-169 bp有且仅有1个保守作用位点；VCP 实验组荧光海肾素酶活性（15．529±1．902）低于VCP 对照组（21．781±0．854）、VCP 突变实验组（19．978±1．377）、VCP突变对照组（21．952±1．516），差异有统计学意义（P＜0．05）；VCP突变对照组（21．952±1．516）与VCP对照组（21．781±0．854），差异无统计学意义（P＝0．276）。结论 miRNA-129-5p在骨肉瘤细胞U2-OS中可能靶向调控VCP基因的表达及调控位点。
关键词： miRNA-129-5p 含缬酪肽蛋白 骨肉瘤 靶向调控 -
VCP通过促进Huh7肝癌细胞P-IκB的降解激活NF-κB
目的 研究含缬酪肽蛋白(VCP)对肝癌细胞磷酸化核因子kappa B抑制蛋白(P-IκB)和核因子kappa B(NF-κB)信号的影响.方法 聚合酶链式反应(PCR)扩增VCP基因,并克隆于真核表达载体pCDNA3.1/myc-His(-)A,测序正确后将其转染Huh7肝癌细胞,转染30 h后裂解细胞,免疫印迹试验(Western blot)检测核因子kappa B抑制蛋白(IκB)、P-IκB的含量,萤火虫荧光素酶报告基因检测NF-κB的活性;并对VCP RNA干扰,检测对IκB、P-IκB的含量和NF-κB的活性的影响.结果 成功构建真核表达载体pCDNA3.1/myc-His(-)A-VCP,转染Huh7肝癌细胞后,IκB含量无明显变化,然而P-IκB含量明显降低,NF-κB信号活性显著增强;而对VCP RNA干扰后,NF-κB信号的活性受到明显抑制.结论 VCP通过促进Huh7肝癌细胞P-IκB的降解进而活化NF-κB,在肝癌的发生过程中发挥重要作用,是用于肝癌治疗的重要潜在靶点.
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我国原发性青光眼患者外周血中含缬酪肽蛋白和 α-胞衬蛋白含量的研究
目的 检测不同类型青光眼患者与正常人外周血中含缬酪肽蛋白(valosin-con-taining protein,VCP)、α-胞衬蛋白(α-fodrin)的水平差异,评估各指标在青光眼诊断中的价值.方法 收集2015年1月至2017年9月首诊于我院和郑州大学第一附属医院眼科的青光眼患者80例,其中原发性闭角型青光眼(primary angle-closure glaucoma,PACG)组40例,原发性开角型青光眼(primary open angle glaucoma,POAG)组40例;同期收集我院健康体检者40例作为对照组.采用ELISA法分别测定各组外周血中VCP和α-fodrin的含量,并作对比,同时对上述指标绘制受试者工作特征曲线,计算曲线下面积.采用多因素Logistic回归分析青光眼患者发病的危险因素.结果 POAG组、PACG组和对照组VCP含量分别为(124.866±34.858)ng·L-1、(94.143±28.970)ng·L-1和(44.707±8.892)ng·L-1,α-fodrin含量分别为(0.531±0.306)μg·L-1、(0.399±0.213)μg·L-1、(0.304±0.214)μg·L-1,3组间两两相比,VCP、α-fodrin含量的差异均有统计学意义(均为P<0.05).受试者工作特征曲线下面积分析结果显示,VCP为0.754(95％CI为0.646～0.862,P<0.001),α-fodrin为0.610(95％CI为0.486～0.733,P=0.091).多因素Logistic回归分析提示,仅VCP是POAG患者发病的独立危险因素(OR=9.134,P<0.01).结论 POAG患者外周血中VCP和α-fodrin的含量高于PACG患者和正常人群,提示免疫因素可能在青光眼视神经损害机制中起重要作用,VCP是POAG发病的独立危险因素.
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含缬酪肽蛋白在神经退行性疾病中的作用
含缬酪肽蛋白(valosin-containing protein,VCP)是一种重要的Ⅱ型三磷酸腺苷(ATP)酶,细胞内含量丰富且结构保守,在内质网相关蛋白降解、自噬等途径中起重要作用.VCP的活性取决于其复杂的分子结构,可与不同的衔接蛋白或辅助蛋白结合改变构象,促进与泛素蛋白的相互作用而发挥作用.近年来,VCP的突变和功能障碍在神经退行性疾病的发病机制中的作用受到重视.本文将围绕VCP及其复合物在神经退行性疾病中的作用研究进展展开综述.
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P97抵抗高糖培养的人视网膜血管内皮细胞增殖
目的:研究含缬酪肽蛋白(valosin-containing protein,P97) 对高糖培养的人视网膜血管内皮细胞的作用.方法:体外高糖培养人视网膜血管内皮细胞(HRCECs),转染P97的RNA干扰质粒到HRCECs,抑制P97的表达,观察血管内皮生长因子(VEGF)的mRNA水平变化,同时观察HRCECs增殖的变化.结果:RNA干扰P97组和对照组的VEGF/actin分别为:0.21±0.03和0.10±0.01,两组差异有显著性(P<0.05),RNA干扰P97组和对照组,HRCECs在G1期细胞分别为44.05%±3.62%、25.21%±3.20%,两组比较差异有显著性(P<0.05).结论:当P97表达受抑制后,VEGF的表达增高,HRCECs的增殖增强,这些变化可能与DR的发生发展相关.
