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松针油抗甲型流感病毒的实验研究
目的 研究松针油抗甲型流感病毒的作用.方法 采用细胞病变抑制实验、噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞活性,以治疗指数(TI)为评价指标,观察松针油在MDCK细胞中对甲型流感病毒的抑制作用.结果 松针油的细胞毒性较低,松针油在一定浓度范围内对流感病毒有直接灭活作用;在吸附阶段和合成阶段都能抑制流感病毒的复制,但松针油不能阻止病毒侵入细胞.结论 松针油具有很好的抗甲型流感病毒的作用.
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松针油抑制S-180及Hela细胞的实验研究
[目的]探讨松针油在体内、体外的抑瘤作用及机制.[方法]采用水蒸气蒸馏法提取松针油,并用气相色谱-质谱联用仪进行成分分析.成功制备小鼠肉瘤S-180的动物模型,并观察不同浓度松针油在体内的抑瘤作用,以探讨佳抑瘤剂量及抑瘤效果.体外培养人宫颈癌细胞(Hela),通过在光镜下观察细胞形态以及MTT法观察Hela细胞在不同浓度松针油及不同时间点的生长曲线,进一步探讨松针油在体外的作用机制.[结果]松针油对小鼠S-180肉瘤有一定的抑制作用,佳剂量为2g/kg,抑瘤率为44.4%;松针油作用体外培养的HeLa细胞后,生长曲线测定及MTT比色法结果显示,松针油对Hela细胞的生长和增殖具有明显的抑制作用,而且抑制明显的时间为48～96h.[结论]松针油在体内、体外对肿瘤细胞具有直接杀伤作用,其机制可能通过干扰细胞代谢,改变细胞外膜的性质抑制肿瘤细胞增殖.
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松针油诱导宫颈癌Hela细胞凋亡及其作用机制研究
目的 研究松针油对人宫颈癌Hela细胞生长的抑制作用,探讨Hela细胞发生凋亡的分子机制.方法 采用水蒸气蒸馏法提取松针油,气相色谱-质谱联用仪分析成分.MTT法测定松针油对Hela细胞增殖的影响.流式细胞仪和Hochest 33258检测药物作用前后细胞凋亡的情况.应用Western blotting观察Hela细胞caspase-3酶原的变化.用caspase活性检测试剂盒检测caspase-3,8,9的活性.结果 MTT结果显示松针油对Hela细胞生长有明显的抑制作用.呈显著的时间和浓度依赖性.流式细胞仪分析显示松针油诱导Hela细胞发生凋亡,细胞表现出典型的凋亡特征,并且可见凋亡小体,且凋亡率具有时间依赖性.松针油诱导Hela细胞凋亡过程中caspase-3被激活.Caspase-8,9活性增高,又有时间依赖性,且有时间顺序.结论 松针油对Hela细胞的生长有明显的抑制作用,其作用机制是松针油可诱导Hela细胞发生凋亡.在诱导细胞凋亡的过程中,caspase-3的激活是介导Hela细胞发生凋亡的共同通路.同时,活化的caspase-8,9可能参与了caspase-3的激活,从而诱导凋亡的发生.
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松针油诱导肝癌HepG2细胞凋亡及对端粒酶活性的影响
目的:研究松针油对人肝癌HepG2细胞的作用.方法:水蒸气蒸馏法提取松针油,GC-MS分析其成分,不同浓度松针油处理HepG2细胞后,用MTT法测定HepG2细胞的生长抑制率.HE染色及电镜下观察细胞凋亡形态的改变.流式细胞仪技术检测细胞凋亡率;流式细胞仪检查bcl-2基因表达水平;TRAP法测定端粒酶活性的变化.结果:MTT法证明松针油可显著抑制HepG2细胞生长,抑制率与药物浓度正相关,呈现明显的量-效和时-效关系.流式细胞仪可以检测到细胞凋亡,0.125～8 mg/L的松针油能引起HepG2细胞凋亡,且呈时间依赖性及剂量依赖性.电镜下可观察到核浓缩及核碎裂等典型的细胞凋亡特征.松针油在诱导细胞凋亡的同时伴随端粒酶活性下调和bcl-2表达水平下降.结论:松针油诱导肝癌HepG2细胞凋亡,并抑制端粒酶活性,bcl-2参与了松针油诱导的肝癌HepG2细胞凋亡过程中端粒酶活性的调控.
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松针油引起人乳腺癌MCF7凋亡、自噬的机制研究
目的：探讨松针油对人乳腺癌细胞（MCF7）影响及可能损伤、凋亡及自噬的机制。方法：用不同浓度的松针油处理MCF7细胞24、48及72h后观察，用噻咗蓝（MTT）比色法测定MCF7细胞生长抑制；电镜下观察细胞凋亡的形态改变；流式细胞仪测定P53的表达及荧光法测定乳腺癌细胞自噬，流式细胞仪测定细胞凋亡率及银染法（TRAP-PCR）法测定端粒酶的活性变化。结果：不同浓度下的松针油对MCF的增值均有一定的抑制作用，能诱导MCF7细胞损伤、凋亡及自噬，且与作用时间及剂量明显相关。结论：松针油可通过抑制端粒酶的活性，促进P53、LC3-II表达来诱导MCF7细胞损伤、凋亡及自噬。
