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大鼠骨髓间质多能成体祖细胞系统移植治疗脑缺血性损伤的研究
目的 探讨骨髓间质分离的多能成体祖细胞(MAPCs),通过系统移植方式(尾静脉注入)进入大鼠脑组织内及修复受损的神经功能.方法 采用改良Nagasaway与Zea Longa等线栓法建立大鼠脑缺血再灌注模型,并将大鼠随机分为对照组(n=40)和MAPCs组(n=40).将在体外纯化、增殖和已用5-溴脱氧尿苷(BrdU)处理过的MAPCs经尾静脉注射入大鼠体内.采用行为学评定、免疫荧光技术、RT-PCR和免疫电镜等方法识别移行入大鼠脑组织内的MAPCs分化的神经元样细胞及其功能表达.结果 (1)MAPCs能移行入大鼠脑组织内并在大脑中动脉阻断(MCAO)的同侧海马区分化为神经元样细胞,免疫荧光双重标记染色显示BrdU、神经元特异性烯醇化酶(NSE)表达阳性;(2)与对照组比较,在MAPCs移植组(MAPCs组),MCAO所致的大鼠行为损伤明显恢复,神经生长因子(NGF)表达水平明显升高(P＜0.05);(3)电镜下观察到MAPCs所分化的神经样细胞与其它神经细胞形成突触联系.结论 MAPCs能经血液途径进入脑缺血灶微环境中,分化为神经样细胞并有效地修复大鼠MCAO所致的神经功能缺失症状.因此,MAPCs有望成为中枢神经系统疾病自体移植治疗的佳候选干细胞之一.
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极小胚胎样干细胞的研究进展
近年来随着干细胞研究的进展,一些具有多向分化潜能的细胞群相继在成体中得到分离鉴别,如骨髓间充质干细胞(mes-enchymal stem cell,MSCs)[1],成体多能祖细胞(multipotent a-dult progenitor cells, MAPCs)[2],成体骨髓多向诱导细胞(mar-row-isolated adult muhilineage inducible,MIAMI)[3],以及非限制性体干细胞(unrestricted somatic stem cells, USSC)[4]等.
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大鼠多能成体祖细胞体外成软骨的诱导和鉴定
[目的]探讨大鼠多能成体祖细胞（multipotent adult progenitor cells，MAPCs）在特定培养条件下向软骨细胞定向分化的能力。[方法]分离培养大鼠MAPCs，扩增至第2代，观察其形态学特点，并将其离心成团后分为2组，诱导组应用转化生长因子-β3（transforming growth factor-β3，TGF-β3）、骨形态发生蛋白-6（bone morphogenetic protein-6，BMP-6）、胰岛素样生长因子-1(insulin-like growth factors-1，IGF-1）及地塞米松等进行成软骨诱导分化，对照组用含10%胎牛血清（fetal bovine serum, FBS）的高糖DMEM培养液（dulbecco's modifiedeagle medium high-glucose, H-DMEM）常规培养液自然分化。以Safranin O和Ⅱ型胶原免疫组化染色等进行鉴定，阿尔新蓝比色法测定糖胺聚糖（glycosaminoglycan，GAG）的含量。[结果]体外定向诱导后MAPCs表现出软骨细胞的特性。诱导组形成了透明软骨样外观的细胞团，而对照组体积小、松散，Ⅱ型胶原免疫组化染色显示诱导组可见成熟软骨陷窝形成，Safranin O染色显示诱导组软骨特异性细胞外基质沉积，诱导组GAG的含量高于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）。[结论]MAPCs具有良好的成软骨潜能，可以成为软骨组织工程良好的种子细胞来源。
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Oct-4表达下调促大鼠骨髓多能成体祖细胞向心肌分化
目的:明确骨髓多能成体祖细胞(Bonemarrowmultipotent adult progenitor cells,MAPCs)体外向心肌特异性分化及其与八聚体结合转录因子4(Octamer-bindingtranscriptionfactor-4,Oct-4)表达的相关性.方法:将大鼠骨髓中分离出的MAPCs,在无血清培养基中连续培养35 d,采用5-氮杂胞苷(5-azacytidine,5-aza,l μmol/L)诱导24 h促使其向心肌细胞分化.结果:MAPCs在5-aza诱导的24 h后早期心脏特异性基因NKx2.5与GATA-4的mRNA水平显著增加,Western blot和免疫荧光染色显示心肌特异性蛋白Connexin-43与肌钙蛋白I在5-aza诱导后的7 d开始表达,流式细胞分析表明在35 d后超过37%的细胞为肌钙蛋白I阳性;同时实时定量聚合酶链反应、Western blot、免疫荧光染色和流式细胞技术检测到未分化的MAPCs高表达特异性干细胞标志物Oct-4,但在心肌分化过程中其表达明显下降.结论:MAPCs在5-aza诱导后能够有效地分化为心肌样细胞,并与Oct-4的表达下调相关.
