首页 > 文献资料
-
20(s)-原人参二醇对体外培养宫颈癌Siha细胞的增殖抑制作用及其机制
目的:观察20(s)-原人参二醇(PPD)对体外培养宫颈癌Siha细胞生长周期的作用及其对p53、p21及细胞周期素E(cyclin-E)基因转录和表达的影响,探讨PPD抑制Siha细胞增殖的机制.方法:体外培养人宫颈癌Siha细胞,将其分为阴性对照组(乙醇)和实验组(20 μg·L-1 PPD),分别用乙醇和PPD处理体外培养的宫颈癌Siha细胞,48 h后流式细胞术检测细胞周期,Real time PCR和Western blotting法检测宫颈癌Siha细胞内p53、p21及cyclin-E mRNA及蛋白的表达情况.结果:与阴性对照组比较,20μg·L-1 PPD处理48 h后,G0/G1期Siha细胞比例增加(P＜0.01),G1期阻滞作用明显增强;Siha细胞中p53与p21 mRNA及蛋白表达水平上调(P＜0.01),cyclin-E mRNA及蛋白表达水平下调(P＜0.01).结论:PPD可抑制人宫颈癌Siha细胞增殖,其机制可能与上调p53、p21基因表达,下调cyclin-E基因表达有关.
关键词： 20(S)-原人参二醇 SIHa细胞 P53 p21 cyclin-E -
褪黑素对小鼠肝癌H22细胞抗增殖和促凋亡的p53依赖性机制研究
背景与目的:本室已经证明了褪黑素(melatonin,MLT)对小鼠肝癌H22细胞的生长具有抑制作用,本研究旨在探讨其机理.方法:(1)建立荷瘤小鼠模型并给予褪黑素处理,取肿瘤组织进行p53、cyclin E 水平的免疫组化分析;(2)不同浓度褪黑素体外培养小鼠肝癌 H22细胞,采用流式细胞技术(flow cytometry,FCM)检测细胞周期分布和凋亡率;免疫组化法分析培养细胞的 p53和 cyclin E 的蛋白水平;采用RT-PCR方法检测Fas mRNA的水平.结果:(1)FCM显示褪黑素可引起 H22细胞 G0/G1期比例升高,从75.24%上升至85.46%,同时细胞凋亡增多,从5.07%升至12.77%;(2)褪黑素作用后 p53水平较对照组增高 42.5%(培养细胞)和 19.5%(肿瘤组织),而cyclin E的水平则降低 31.7%(培养细胞)和 39.9%(肿瘤组织);(3)RT-PCR结果显示 Fas mRNA水平增高 44.2%.结论:MLT通过阻滞细胞周期和诱导细胞凋亡抑制 H22细胞增殖.其机理可能是通过 p53抑制下游的 cyclin E的表达 ,阻止细胞进入 S期; 同时又通过 p53上调 Fas表达,从而诱导细胞凋亡.
-
NUMB调控肿瘤增殖的机制研究
目的 探讨膜相关蛋白NUMB调控肿瘤增殖的机制.方法 构建NUMB基因敲除载体,转染Hela细胞后,经抗性筛选获得稳定细胞株,通过实时定量PCR (qRT-PCR)和Western blot检测NUMB基因和蛋白表达,验证NUMB基因敲除效果.采用裸鼠成瘤实验研究NUMB基因敲除对肿瘤增殖的影响;利用流式细胞术和Brdu标记实验检测NUMB缺失对细胞周期的影响;在体外模型中检测细胞周期各个时期多种调控蛋白的表达水平.结果 Western blot及qRT-PCR结果表明NUMB基因敲除的体外模型构建成功;裸鼠成瘤实验显示NUMB基因敲除促进肿瘤增殖;流式细胞术和Brdu标记实验表明NUMB基因缺失加速细胞周期G1/S期转换,促进肿瘤细胞增殖;Western blot检测发现NUMB基因敲除组细胞周期调控蛋白Cyclin-E的表达增加,而P27的表达降低.结论 NUMB通过调控Cyclin-E以及P27的蛋白水平影响细胞周期,进而调控肿瘤增殖.
