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牛乳腺炎无乳链球菌PI-2a菌毛岛屿辅助蛋白BP、AP2主要抗原域的串联表达及其免疫活性
目的 构建无乳链球菌(group B Streptococcus agalactea,GBS)菌毛岛屿辅助蛋白BP、AP2主要抗原表位域融合表达重组质粒,进行高效表达,并分析其免疫活性.方法 利用DNAstar生物信息软件Protean功能筛选BP和AP2主要抗原表位域,并引入15位柔性多肽,通过重叠延伸PCR技术扩增融合BP、AP2主要抗原表位域基因,PCR扩增串联体基因片段,克隆至原核表达载体pET-30a(+),构建重组表达质粒pET-30a(+)/BP+ AP2,转化至大肠埃希菌BL21 (DE3),IPTG诱导表达.表达的融合蛋白BP+ AP2经亲和层析纯化后,进行Western blot鉴定,并免疫昆明小白鼠,检测其免疫原性.结果 PCR扩增出675 bp的BP和759 bp的AP2主要抗原域,经重叠延伸PCR获得了1 380 bp的BP、AP2串联体基因片段,DNA测序结果表明,无碱基的缺失、突变和移码.构建的重组表达质粒经诱导后获得表达,目的蛋白相对分子质量约55 000,主要以包涵体形式存在,纯化后纯度达96％以上,浓度为2.05 mg/ml.纯化的融合蛋白能被兔抗GBS阳性血清所识别,且具有良好的免疫原性.结论 构建了GBS BP、AP2主要抗原表位域串联体重组表达质粒pET-30a(+)/BP+ AP2,表达产物具有良好的免疫活性,为进一步研究基于BP、AP2蛋白的致病机制、诊断制剂及基因工程疫苗奠定了基础.
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奥氮平对脂肪细胞UCP2和aP2表达的影响
奥氮平属于非典型广谱抗精神病药物,由于其椎体外系副作用很少,现已成为治疗精神分裂症、躁狂症的主要药物之一.但是奥氮平和其他抗精神病药物一样会引起一系列与代谢有关的副作用,包括体质量增加、内脏脂肪增加和糖代谢异常,这些都是2型糖尿病、心血管疾病的高危因素,同时也是精神分裂症治愈率低的原因之一.心血管代谢疾病是导致精神分裂症患者死亡的主要原因,因此,寻找患者出现代谢紊乱疾病的原因并使其减少是非常有临床意义的.通过控制饮食、运动、药物降低患者的食欲都只能收到短期的体质量控制效果[1],而寻找长期有效的控制体质量的方法又通常令人失望.因此我们需要研究奥氮平引起代谢紊乱的具体原因以寻找更好的预防方法.
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脂肪细胞型脂肪酸结合蛋白的研究
脂肪细胞型脂肪酸结合蛋白(adipocyte fatty-acid binding protein A-FABP,又称脂肪细胞脂类结合蛋白adipocyte lipid binding protein ALBP,FABP4,422蛋白,aP2或P15蛋白),属于小分子量细胞内脂肪酸结合蛋白超家族成员之一[1].近年来研究表明aP2对能量代谢,炎症反应起重要调节作用,和某些肿瘤的临床分期及病理分化程度有较好的对应关系.
