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喉癌组织中MKRN1和HSP90基因表达的研究
目的 正常细胞中MKRN1和HSP90基因的平衡决定了端粒酶活性和端粒长度,使细胞保持正常的状态;二者的表达异常可能与肿瘤的发生发展有关.为探讨MKRN1和HSP90基因的表达与喉癌发生发展之间的关系,我们研究了喉癌组织中MKRN1和HSP90基因mRNA的表达情况.方法 提取50例喉癌组织的总mRNA,用半定量RT-PCR的方法检测MKRN1和HSP90基因mRNA的表达情况.结果 50例喉鳞癌中有26例MKRN1基因mRNA表达下调,占52%(26/50);23例HSP90基因mRNA表达上调,占46%(23/50).MKRN1基因在肿瘤组织中的表达水平为0.74±0.63,在癌旁正常对照组织中为1.21±0.76,(P＜0.01).HSP90基因在肿瘤组织中表达水平为1.82±1.25,而在癌旁正常对照组织中为1.23±1.04,(P＜0.05),差异具有统计学意义.MKRN1与HSP90基因的表达存在负相关(r=-0.458,P＜0.05).HSP90基因表达情况与肿瘤的病理分期和患者年龄相关(P＜0.05),MKRN1的表达与肿瘤的临床特征均无相关性(P＞0.05).结论 喉癌组织中MKRN1和HSP90基因mRNA的表达异常存在相关性,二者表达平衡的破坏可能在喉癌的发生发展中起着重要的作用.
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真核表达载体pEGFP-N1-MKRN1的构建及其在Siha细胞中的表达
目的:构建真核表达载体pEGFP-NI-MKRNl并稳定转染人宫颈癌细胞系Siha细胞,检测MKRNI表达情况及对细胞增殖和凋亡的影响.方法:用RT-PCR技术从人胚肾细胞株HEK293细胞中获得MKRNl的cDNA并将其插入表达载体pEGFP-N1中;构建的重组质粒经脂质体介导转染Siha细胞;Western Blot鉴定MKRNI在Siha细胞中的稳定表达.结果:RT-PCR成功地扩增出一条约1477 bp的片段,经限制性内切酶酶切分析和DNA序列测定证实目的基因已插入重组质粒,荧光显微镜下观察到稳定转染的细胞发出较强绿色荧光,Western Blot证明人MKRN1能以融合蛋白的形式在si-ha细胞中稳定表达.结论:成功构建了真核表达载体pEGFP-N1-MKRN1,获得了稳定表达人MKRNl基因的Siha细胞克隆,为进一步研究人MKRNI的功能及其与细胞增殖及凋亡的关系提供了实验基础和重要的细胞模型.
关键词： MKRN1 pEGFP-N1载体 SIHa细胞 增殖和凋亡
