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Hsp90选择性抑制剂17-AAG诱导白血病细胞株凋亡的基因谱研究
目的:探讨热休克蛋白90(Hsp90)抑制剂17-AAG对急性白血病细胞株HL-60和NB4细胞的凋亡诱导作用及其可能机制.方法:应用CCK-8比色法观察17-AAG对HL-60和NB4细胞的生长抑制作用;用Annexin V/PI标记流式细胞术分析细胞凋亡;Western blot检测凋亡相关蛋白Caspase-3和PARP的表达水平及其活化状态,采用实时定量PCR法检测17-AAG处理后NB4细胞的凋亡相关基因的mRNA变化.结果:17-AAG呈剂量依赖性抑制白血病细胞的生长.Annexin V测定、细胞周期分析和Caspase-3、PARP1的活化均表明17-AAG诱导白血病细胞的凋亡.实时荧光定量PCR分析发现,17-AAG处理后实验组和对照组相比有56个基因显著上调,23个基因显著下调.结论:17-AAG可诱导白血病细胞的凋亡,抑制细胞增殖.17-AAG处理白血病细胞后凋亡相关基因发生明显变化,激活凋亡信号通路可诱导细胞发生凋亡.
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多发性骨髓瘤患者血浆HSP90的表达及其临床意义
本研究检测多发性骨髓瘤(MM)患者外周血HSP90的表达情况,探讨其在MM发病中的作用及与疾病治疗、预后转归的关系.收集58例MM患者和20例健康志愿者的外周血,应用双抗体夹心ELISA法检测血浆HSP90的表达水平.结果表明,MM患者外周血HSP90的表达水平明显高于对照组[(325.205±75.942) vs(85.401±11.261) ng/ml] (P ＜0.001).HSP90表达水平与MM患者的性别、年龄和疾病分型无关(P＞0.05),而与疾病国际分期系统(ISS)的分期、疗效、浆细胞百分比和球蛋白、免疫球蛋白、M蛋白、β2-微球蛋白和轻链水平明显相关(P＜0.05).结论:HSP90在MM患者外周血中的过度表达可能参与了MM发病和进展,检测外周血HSP90的表达水平可能对判断MM患者的病情、疗效和预后有一定临床指导意义.
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联合抑制mTORC2与热休克蛋白90对多发性骨髓瘤细胞增殖和凋亡的影响
目的:探讨mTORC2与HSP90共同受抑对多发性骨髓瘤细胞增殖和凋亡的影响.方法:人多发性骨髓瘤细胞株U266细胞在培养过程中分别加入雷帕霉素20 nmol/L、17-AAG 600 nmol/L、雷帕霉素20 nmol/L+ 17-AAG 600 nmol/L、PBS溶液进行干预,比较各组的细胞抑制率、形态变化、凋亡率以及caspase-3和AKT蛋白的表达.结果:联合使用雷帕霉素和17-AAG对多发性骨髓瘤细胞生长抑制作用明显的大于单一使用相同浓度相应药物;雷帕霉素、17-AAG及两药联合干预组细胞的凋亡率明显的大于PBS对照组,并且联合用药干预细胞的凋亡率明显大于单一使用相同浓度相应药物的干预细胞的凋亡率;雷帕霉素、17-AAG及两药联合干预组U266细胞的caspase-3蛋白表达明显的大于PBS对照组,并且联合用药干预细胞中caspase-3蛋白表达明显大于单一使用相同浓度相应药物;雷帕霉素、17-AAG及两药联合干预组U266细胞AKT蛋白表达明显小于对照组,联合用药干预组细胞AKT蛋白表达明显小于单一使用相同浓度相应药物,其差异均具有显著性(P＜0.05).结论:联合抑制mTORC2与HSP90能抑制多发性骨髓瘤细胞的增殖并且诱导细胞的凋亡.
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HSP90表达与人多发性骨髓瘤细胞迁移力的相关性研究
本研究探讨热休克蛋白90(HSP90)与人多发性骨髓瘤细胞迁移力的相关性.采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测经终浓度为50、100、150和200 nmol/L的蛋白酶体抑制剂硼替佐米作用于人多发性骨髓瘤细胞株U266 4小时后细胞中HSP90的mRNA的表达情况.应用Transwell小室迁移实验检测经上述相同浓度硼替佐米作用4小时后U266细胞迁移力的变化.结果表明:随着硼替佐米药物浓度的增加,U266细胞中HSP90α的mRNA表达量逐渐增加(p<0.05),而HSP90β的mRNA表达量虽然总体上有差别(p<0.05),但增加趋势不很明显.随着药物浓度的增加U266细胞迁移力逐渐减弱(p<0.05).结论:HSP90表达与人多发性骨髓瘤细胞迁移力存在相关性.
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热休克蛋白－肽复合物与肿瘤免疫
热休克蛋白(heat shock protein,HSP)是一类在生物进化过程中高度保守,广泛表达于所有生命机体组织细胞并具有管家功能的蛋白质.根据分子量的差异,HSP可分为10个家族,包括HSP 110/grp 170、gp96/grp94、HSP90、HSP70/grp78、HSP65、HSP25/27等,每个家族有1～5个成员[1].
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热休克蛋白60与冠状动脉病变的联系及经皮冠状动脉介入治疗前后的变化
热休克蛋白(heat shock protein,HSP)又称应激蛋白(stressprotein),是一组具有重要生理功能、进化上高度保守的蛋白质分子家族,根据分子量大小和同源程度可分为HSP110、HSP90、HSP70、HSP60、小分子HSP和泛素等.
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ILK与HSP90相互作用对乳腺癌细胞迁移影响及其机制的探讨
目的:研究ILK与HSP90的相关性及其在肿瘤侵袭转移中的作用.方法:免疫共沉淀方法检测ILK与HSP90的相互作用；用反义ILK质粒转染乳腺癌细胞,建立稳定表达反义ILK的细胞系；蛋白质印迹法检测细胞内源性ILK的表达；细胞增殖实验和划痕实验观察细胞增殖和迁移情况；蛋白质印迹法检测E-cadherin、MMP-9以及β-catenin的表达.结果:在IEC18和MA891细胞中均检测到ILK与HSP90α和HSP90β的相互作用；反义ILK在抑制细胞内源性ILK表达的同时促进HSP90β的表达；与对照组细胞相比,反义ILK使MA891细胞生长速度减慢、运动迁移能力下降；其在增加E-cadherin表达的同时抑制MMP-9以及细胞核β-catenin的表达.结论:乳腺癌细胞中存在ILK与HSP90的相互作用,反义ILK通过抑制Wnt/β-catenin信号通路关键分子β-catenin的核积累而抑制乳腺癌细胞迁移.
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美国ASCO年会拾贝:一种新型的组蛋白脱乙酰基酶抑制剂OSU-HDAC42对HER-2阳性乳腺癌有抗肿瘤作用
组蛋白脱乙酰基酶抑制剂是一类新的抗肿瘤药物,可以通过过乙酰化热休克蛋白90(HSP90),从而下调HER-2表达.OSU-HDAC42是一种新型的口服类以生物利用性丁酸苯酯为基础的组蛋白脱乙酰基酶抑制剂.
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长期游泳运动对自发性高血压大鼠主动脉血管内皮细胞HSP90表达的影响
目的:研究长期游泳运动对自发性高血压大鼠(sHR)主动脉血管内皮细胞HSP90(heat shock protein 90)表达的影响及其对血管内皮功能的作用.方法:16只自发性高血压大鼠随机分为SHR运动组8只,SHR对照组8只,8只雄性Wistar大鼠作为正常对照组.SHR运动组每天进行90 min无负重有氧游泳运动,每周6天,共8周.每周测定大鼠血压1次,8周后,测定各组大鼠主动脉血管内皮细胞HSP90含量.结果:与SHR对照组相比,SHR运动组血压显著降低,主动脉血管内皮细胞HSP90含量显著升高.与正常对照组相比,SHR运动组和SHR对照组主动脉血管内皮细胞HSP90含量升高,但无统计学意义.结果提示长期有氧运动可以促进主动脉血管内皮细胞HSP90表达的增加,降低血压.
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17-丙烯胺-17-去甲氧格尔德霉素对HeLa细胞辐射增敏作用机制研究
格尔德霉素(geldanamycin,GA)及其衍生物17-丙烯胺-17-去甲氧格尔德霉素(17-AAG)和17-二甲基胺乙基-17-去甲氧基格尔德霉素(17-DMAG)是已经发现的热休克蛋白90(HSP90)特异性抑制剂[1].它们可以与肿瘤细胞特异性结合,抑制肿瘤生长,增加其凋亡[2-3].HSP90特异性抑制剂17-AAG对肿瘤细胞辐射敏感性影响的研究报道较少,已有的研究结果表明,17-AAG对宫颈癌细胞有辐射增敏作用,而对正常成纤维细胞无辐射敏感性影响[4-5].但其辐射增敏的作用机制是否通过抑制DNA损伤的修复和影响细胞周期而发挥作用,本研究将对这一问题进行探讨.
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HSP90小分子抑制剂研究进展
HSP90既是细胞应激反应的生物标志物,也是细胞内重要的分子伴侣蛋白.HSP90调控的很多客户蛋白,如EGFR、Met、Raf-1、IKK、p53等,均与肿瘤等疾病的发生和发展关系密切.HSP90抑制剂通过与靶点结合抑制其活性,导致其客户蛋白无法正确折叠而降解,可从多环节多途径影响细胞生物学效应,因此HSP90抑制剂在肿瘤治疗等领域展示出良好应用前景.本文将对近年来重要的小分子HSP90-N端抑制剂的研究进展进行综述.
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荧光光谱法研究姜黄素衍生物C0817与Hsp90的相互作用
目的 研究姜黄素衍生物C0817与Hsp90的结合作用,及其对Hsp90-ATPase活性抑制作用.方法 采用荧光光谱法,研究不同浓度C0817与Hsp90的相互作用;实验选取280 nm为激发波长,290 ～510 nm内进行荧光光谱扫描.采用孔雀绿磷钼酸铵-无机磷检测法,研究C0817对Hsp90-ATPase活性的抑制.结果 C0817解离常数为(24.740±1.752) μmol· L-1;C0817与Hsp90之间的主要作用力为静电作用力;C0817的存在使得Hsp90构象改变;当ATP为1 mmol·L-1时,C0817对Hsp90-ATPase活性无抑制作用.结论 经过荧光光谱分析,可以确定C0817与Hsp90的结合机制.
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淫羊藿女贞子配伍提高哮喘大鼠对地塞米松作用的敏感度研究
目的 探讨中药淫羊藿女贞子合用的煎剂及其提取物在地塞米松干预大鼠哮喘的模型中,对于糖皮质激素受体(GR)作用途径的影响,以评价中药提高哮喘大鼠对糖皮质激素作用的敏感度.方法 SPF级雄性SD大鼠卵蛋白诱发哮喘造模,在地塞米松治疗的同时给予淫羊藿女贞子合用的煎剂或提取物.采用免疫组化、Westem blot法及实时荧光PCR技术检测肺组织GRα、GRβ、HSP90的蛋白及mRNA的表达.结果 与正常组相比,模型组肺组织中GRα与HSP90蛋白和mRNA的表达、GRβ mRNA的表达、GRα/GRβ,GRα/HSP90在mRNA水平和GRβ/HSP90在蛋白水平有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01).与模型组比较,地塞米松组GRα表达明显下调(P＜0.05);淫羊藿女贞子煎液及提取物单用及合用地塞米松组均能明显上调肺组织中GRα和HSP90的表达、GRα/GRβ和GRα/HSP90在mRNA水平的比值(P＜0.05或P＜0.01),抑制GRβ mRNA表达以及GRβ/HSP90(P均＜0.01).结论 淫羊藿女贞子煎剂及提取物均能通过改善GR亚型与HSP90的表达,调整GR作用途径而提高哮喘大鼠对地塞米松作用的敏感度.
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以HSP90为靶点的靶向治疗在非小细胞肺癌治疗中的研究进展
热休克蛋白(Heat Shock Protein，HSP)是一切生物细胞包括原核细胞及真核细胞在受热或病原体、理化有害因素等应激后发生热休克反应，产生的一类生物进化保守、由热休克基因所编码的伴随细胞蛋白。根据分子量大小可分为HSP100、HSP90、HSP70、HSP60和小HSP五大家族，尤以HSP90，主要起稳定蛋白质结构的作用，与肿瘤的发生、发展关系为密切，参与众多与肿瘤增殖和凋亡信号相关的分子构象与稳定性的调节[1]。
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热休克蛋白90抑制剂的临床应用
热休克蛋白90(HSP90)是细胞内进化保守的蛋白之一,通过与效应蛋白和分子伴侣形成复合物产生生理作用.HSP90在胃癌、肺癌、肝癌、乳腺癌等肿瘤组织中高表达,且和肿瘤分级、分期及预后呈正相关性.HSP90抑制剂主要分为天然HSP90抑制剂及其衍生物和合成的抑制剂两大类,且有多个药物进入临床试验阶段.HSP90已成为一类重要的抗肿瘤治疗靶标,HSP90抑制剂将在抗肿瘤的治疗领域得到长久的关注.
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热休克蛋白90(HSP90)对HBV复制的影响
目的 探究热休克蛋白90(HSP90)对乙型肝炎病毒(HBV)复制以及HBV稳定复制细胞系细胞增殖的影响.方法 在HBV稳定复制细胞系中瞬时转染HSP90过表达质粒与对照质粒,采用Western blot方法验证HSP90过表达水平;采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测HSP90过表达对HBV总RNA,3.5 kb mRNA表达的影响;同时在HBV稳定复制细胞系中稳转HSP90过表达质粒,构建成功后,检测细胞增殖能力的改变.结果 HSP90在HBV稳定复制细胞系HepAD38和HepG2.2.15细胞中过表达成功;在过表达HSP90的HepAD38和HepG2.2.15细胞中HBV总RNA,3.5 kb mRNA表达水平均上调;增殖实验显示HSP90可促进HBV稳定复制细胞的增殖.结论 HSP90参与HBV的复制,并促进HBV稳定复制细胞系的增殖.
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HSP90高表达细胞株的建立及细胞增殖性状的改变
目的:建立稳定高表达热休克蛋白90(HSP90)细胞株,研究其对细胞增殖的影响.方法:含人HSP90 13全长基因的重组质粒pSmycHSP经亚克隆、纯化、酶切鉴定后,用电穿孔法转染到小鼠成纤维细胞系NIH-3T3细胞内.经G418筛选、克隆分离培养,用免疫细胞化学、免疫印迹鉴定阳性克隆.以转染空质粒的NIH-3T3细胞为对照,用MTT法、流式细胞术测定,分析HSP90高表达对细胞增殖和细胞周期的影响.结果:转染pSmycHSP的NIH-3T3细胞HSP90染色增强,生长速度减慢,S期DNA含量降低.结论:己建立稳定高表达热休克蛋白90(HSP90)NIH-3T3细胞株;转染pSmycHSP的NIH-3T3细胞能够有效地表达HSP90,影响细胞周期,使细胞增殖迟滞.
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宫颈癌组织中MHC-Ⅰ类抗原呈递相关蛋白CNX HSP90 GRP94的表达及意义
目的:探讨宫颈炎和宫颈癌组织中CNX、HSP90、GRP94蛋白和HPV16感染在维吾尔族和汉族妇女中的表达及相关关系.方法:采用免疫组化SP法和PCR技术检测宫颈炎组织66例(汉族39例,维吾尔族27例)以及宫颈癌组织92例(汉族30例,维吾尔族62例)中CNX、HSP90、GRP94蛋白的表达和HPV16的感染情况.结果:CNX蛋白在维、汉宫颈癌组织中的阳性率低于维、汉宫颈炎组织中阳性率表达(67.39%,86.36%)(P<0.05).并且,CNX蛋白的阳性率在宫颈炎组织中维吾尔族高于汉族(100%,76.92%)(P<0.05).HSP90和GRP94蛋白在维、汉宫颈癌组织中的阳性率表达高于维、汉宫颈炎组织(77.17%,56.06%;77.17%,60.60%)(P<0.05).宫颈癌组织中HSP90蛋白阳性率表达维吾尔族低于汉族(74.19%,83.33%)(P<0.05).HPV16感染在宫颈炙及宫颈癌中的阳性率均为维吾尔族高于汉族(P<0.05).通过相关性研究发现,在维吾尔族妇女宫颈癌组织中HSP90与GRP94呈正相关性(r=0.249,P<0.05).HSP90蛋白的阳性表达率与HPV16型感染在宫颈癌组织中呈显著正相关(r=0.361,P<0.05).结论:通过对CNX、HSP90、GRP94蛋白和HPV16联合检测能提高宫颈癌的栓出率.
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Hsp90特异性抑制剂对宫颈癌细胞存活机制的探讨
目的:研究Hsp90的特异性抑制剂格尔德霉素(GA)在宫颈癌Hela细胞存活中的作用,并对其机制进行探讨.方法:培养人宫颈癌细胞株Hela,MTT法检测GA作用后细胞抑制率,RT-PCR方法检测GA作用后Bcl-2 mRNA的表达.结果:MTT法显示GA对Hela细胞有生长抑制作用,用药浓度越高,抑制率越高.不同浓度的GA处理宫颈癌Hela细胞后,Bcl-2 mRNA呈剂量依赖性降低,10 μmol/L的GA抑制作用强.10 μmol/L的GA处理Hela细胞不同时间点后,Bcl-2 mRNA的表达呈时间依赖性降低.结论:在宫颈癌Hela细胞应用特异性Hsp90抑制剂GA,能够抑制宫颈癌细胞的生长,并通过抑制Bcl-2来促进其凋亡,Hsp90可以成为宫颈癌治疗中的一个新靶点
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热休克蛋白与离子通道在功能上的相互作用和治疗结果
分析与离子通道相互作用的伴侣蛋白有助于阐明对细胞信号级联放大反应的靶点和进程,从而有助于更好的理解疾病的起因.为重要的是位于细胞膜上的电压和配体门控离子通道,或者说是与特殊信号复合体连接的离子通道调节器.到目前为止,这些蛋白间的相互作用尚未明了.分子伴侣是一类蛋白质,能催化介导蛋白质的生物合成,参与体内蛋白质的装配但又不构成其结构的一部分.分子伴侣可通过催化或非催化的方式,加速或减缓组装的过程,传递组装所需要的空间信息,也可抑制组装过程中不正确的副反应.热休克蛋白(heat shock proteins,Hsps)如Hsp70和Hsp90是一类分子伴侣.
