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HSP90在乳腺癌细胞株ZR-75-30中的表达及对粘附侵袭能力的影响
目的:研究热休克蛋白(Heat Shock Protein,HSP)90在乳腺癌细胞株ZR-75-30中的表达及对该细胞粘附侵袭能力的影响,并探讨相关机制及意义.方法:体外培养ZR-75-30乳腺癌细胞株,以HSP90抑制剂Geldanamycin(GA)作用处理;免疫印迹技术(Western-blot)检测GA处理前后HSP90在乳腺癌细胞株ZR-75-30中的表达情况;噻唑兰比色(MTT)法检测GA对ZR-75-30细胞的增殖抑制作用;噻唑兰比色(MTT)法检测细胞对人工基底膜(Matrigel)的粘附能力变化;TranswellCham-ber法观察癌细胞侵袭、迁移能力的改变.结果:HSP90抑制剂GA对ZR-75-30细胞具有增殖抑制作用,呈时间剂量依赖关系;GA作用后HSP90在乳腺癌细胞株ZR-75-30中表达明显下降;HSP90抑制剂GA处理的乳腺癌细胞ZR-75-30的粘附率较未加GA的对照组下降明显(P＜0.01);在GA未处理对照组侵袭、迁移实验穿膜细胞数分别为95.4±5.2,103±15.4与GA处理实验组穿膜细胞数46.2±4.9,52.4±8.4相比具有显著性差异(P＜0.01).结论:通过抑制HSP90在乳腺癌细胞株ZR-75-30中的表达,GA能明显减弱乳腺癌细胞株ZR-75-30增殖粘附侵袭能力,HSP90与乳腺癌细胞增殖侵袭转移能力相关.
关键词： 乳腺癌细胞 Hsp90 geldanamycin 转移 -
HSP90的抑制剂Geldanamycin对乳腺癌细胞侵袭、转移能力的影响
目的:探讨HSP90抑制剂Geldanamycin(GA)对高转移性乳腺癌细胞株MDA-MB-231、MDA-MB-435s侵袭、转移能力的影响.方法:噻唑兰比色(MTT)法检测两株细胞对人工基底膜(Matrigel)的粘附能力变化;Transwell Chamber体外侵袭运动实验研究GA处理前后MDA-MB-231、MDA-MB-435s细胞侵袭、运动能力的改变.结果:GA处理后的MDA-MB-231和MDA-MB-435s细胞的粘附、侵袭、运动能力与未处理组细胞相比均明显下降,差异具有显著性(P＜0.05和P＜0.01).结论:HSP90抑制剂Geldanamycin(GA)能够明显抑制乳腺癌细胞株MDA-MB-231、MDA-MB-435s粘附、侵袭和运动能力.
关键词： 乳腺癌细胞 geldanamycin Hsp90 -
HSP90表达对乳腺癌细胞侵袭转移能力的影响
目的研究HSP90的表达与乳腺癌细胞侵袭转移能力的相关性.方法采用RT-PCR和Western blot检测HSP90在MDA-MB-435s和MDA-MB-231细胞中mRNA水平和蛋白质水平的表达差异.Transwell小室人工重组基底膜侵袭迁移实验检测经HSP90抑制剂Geldanamycin(GA)处理前后两株细胞侵袭迁移能力的改变.结果MDA-MB-435s细胞中HSP90α的mRNA表达水平明显高于MDA-MB-231细胞(P＜0.01),MDA-MB-435s和MDA-MB-231细胞中HSP90β的mRNA表达水平没有明显差异(P＞0.05),MDA-MB-435s细胞中HSP90的蛋白质表达水平明显高于MDA-MB-231细胞(P＜0.01).两株细胞用药前侵袭迁移能力无明显差异(P＞0.05),HSP90的抑制剂GA对MDA-MB-435s和MDA-MB-231细胞的侵袭迁移能力均呈现明显抑制作用(P＜0.01,P＜0.05),对MDA-MB-435s细胞的抑制作用更明显(P＜0.01).结论HSP90的表达影响乳腺癌细胞侵袭转移能力.
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HepG2细胞中RORγ相互作用蛋白的筛选及鉴定
目的 筛选HepG2细胞中转录因子RORγ(the retinoid-related orphan nuclear receptor gamma)相互作用蛋白,并对这些蛋白进行初步鉴定,为阐述RORγ介导调节HepG2细胞中各种生理学进程提供理论依据.方法 从HepG2细胞中克隆RORγ基因并连接入载体pCeMM CTAP(SG)中形成RORγ-CTAP (SG)融合基因,再将其亚克隆入含嘌呤霉素抗性基因的载体质粒中,构建pMSCVpuro RORγ-CTAP(SG)质粒；稳定转染HepG2细胞并对RORγ-CTAP(SG)融合基因的表达和定位进行检测后,进行大规模扩增培养；用TAP(串联亲和纯化)方法捕获RORγ相互作用蛋白,通过银染找出差异性蛋白条带,质谱鉴定得到候选RORγ相互作用蛋白；用免疫共沉淀方法对候选蛋白RORγ相互作用蛋白进行验证鉴定.结果 成功构建了质粒pMSCVpuro RORγ-CTAP(SG)并得到稳定转染HepG2细胞株,同时RORγ-TAP(SG)融合基因能定位表达于细胞核内；通过TAP方法获得了RORγ蛋白复合物,然后通过串联质谱分析和数据库搜索从银染差异性显著蛋白条带中找到7个候选RORγ相互作用蛋白；用RORγ蛋白进行免疫共沉淀,对纯化出的7个RORγ相互作用蛋白分别检测,证实了RIP140,HSP90和RORγ在HepG2中有相互作用关系.结论 筛选并鉴定了HepG2细胞中蛋白RORγ的相互作用蛋白RIP140和HSP90,这些研究发现支持了RORγ是共调解蛋白依赖的转录因子且以复合物形式行使功能的假说.其中,HSP90可能扮演分子伴侣角色,而RIP140在HepG2细胞中则可能充当RORγ蛋白的转录调控伙伴蛋白,具体机制有待进一步研究.
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针对热休克蛋白90的靶向治疗在恶性血液病中的研究进展
热休克蛋白(heat shock protein，HSP) 90是生物体中普遍存在的包浆分子伴侣，与恶性血液性疾病多种癌基因信号蛋白的结构稳定性密切相关，通过抑制HSP90活性可同时阻断恶性肿瘤内多条信号途径的异常激活。本文就近年来，对HSP90靶向治疗应用于恶性血液病的相关研究，综述如下。
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Hsp90表达上调与肺癌细胞化疗耐药的相关性研究
背景与目的 热休克蛋白(heat shock protein,Hsp)90是Hsps家族中的重要成员,其高表达与肿瘤的发生、发展及化疗耐药密切相关.本研究旨在探讨替普瑞酮(geranylgeranylacetone,GGA)作用下人肺癌细胞SPCA-1及H446中Hsp90的表达水平变化及与肺癌细胞对顺铂化疗耐药的相关性.方法 将细胞分成实验组与对照组,分别用含有不同浓度(0μM,10 μM,50 μM,100 μM,500μM,1,000 μM)的诱导剂GGA处理6 h.采用免疫荧光细胞化学及Western blot方法 检测各组细胞中Hsp90在蛋白水平的表达;应用M2T法测定细胞在化疗药物顺铂作用下生存率,并分析Hsp90的表达在两种肺癌细胞对顺铂耐药中的作用.结果 SPCA-1及H446实验组细胞中Hsp90的表达水平均明显高于相应的对照组细胞,且与GGA具有一定的浓度依赖性.MTT显示两种实验组细胞对顺铂的生存率均明显高于相应的对照组细胞,亦呈一定的GGA浓度依赖性.结论 GGA可以诱导人肺癌细胞SPCA-1及H446中的Hsp90的表达上调,且其表达水平都与GGA具有一定的浓度依赖性.Hsp90高表达的细胞对顺铂的生存率日月显高于低表达的细胞,表明Hsp90的表达上调与肺癌细胞对顺铂的耐药有一定的相关性.
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Hsp90抑制剂的研究
Hsp90是一类普遍存在于各种细胞的分子伴侣,参与调节肿瘤细胞的发生、增殖、转移和血管生成等过程.通过对Hsp90的抑制可实现对多种肿瘤信号通路进行调控,从而有效控制肿瘤.Hsp90抑制剂是现在靶向治疗肿瘤的研究热点,其单独使用或与其他药物联合应用都有较好的抗肿瘤活性.本文主要对微生物来源的Hsp90抑制剂及其衍生物的研究进展进行综述.
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Hsp90抑制剂的研究进展
热休克蛋白90(Hsp90)是生物进化过程中高度保守的一类蛋白,作为分子伴侣对细胞中众多信号蛋白的构象成熟和功能稳定进行调控.近年来的研究证明,Hsp90与肿瘤发生、发展、生物学行为及其预后有密切的关系,已成为新兴的抗肿瘤药物作用靶点,众多Hsp90抑制剂应运而生,同时基于结构的小分子抑制剂的设计也引起日益广泛的关注,本文就Hsp90的结构特点及其相关抑制剂进行综述,以期对Hsp90抑制剂的发现和优化提供依据.
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Hsp90和真菌耐药性
近年来的研究发现,热休克蛋白90(Hsp90)作为一种高分子量的分子伴侣,不仅可以辅助胞内蛋白质的折叠和转运,还可以调节细胞内的信号传导,增强微牛物细胞的耐药性.本文主要就Hsp90的结构、功能、使真菌产生耐药性的作用机制,和Hsp90抑制剂的研究进展等方面进行了综述.
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HSP90功能抑制对乳腺癌细胞端粒酶和突变型P53的影响
目的 应用HSP90功能抑制剂格尔德霉素(geldanamycin,GA)研究HSP90功能抑制对乳腺癌细胞增殖及端粒酶活性和突变型P53表达的影响.方法 培养人乳腺癌细胞株MDA-MB-435s,采用MTT法检测GA对 MDA-MB-435s 细胞的生长抑制作用,流式细胞术分析细胞周期,用TRAP-ELISA法检测细胞端粒酶活性.Western blot 检测细胞内突变型P53蛋白表达变化.结果 GA对MDA-MB-435s 细胞增殖有明显抑制作用,呈时效量效依赖关系,GA 作用后细胞呈现 G2/M 期阻滞,细胞内端粒酶活性下降,突变型 P53 蛋白表达明显下调.结论 乳腺癌细胞中端粒酶活化和突变型P53表达与HSP90功能有关,用GA抑制HSP90功能可降低端粒酶活性和突变型P53表达,从而抑制乳腺癌细胞增殖.
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不同剂量GA对 BALB/c和C57BL/6小鼠创伤耐受能力的影响
目的 观察 BALB/c 和 C57BL/6 两品系小鼠的创伤耐受能力差异与热休克蛋白90(HSP90)的关系.方法 观察在正常情况下和给予 HSP90 特异阻断剂格尔德霉素(geldanamycin,GA)后,二品系小鼠在全身冲击伤(whole-body blast injury,WBBI)时的整体死亡率和大体变化.结果 WBBI后,C57BL/6小鼠的总体死亡率低于BALB/c小鼠(P<0.05),GA处理后C57BL/6小鼠的总体死亡率无明显变化,而 BALB/c 小鼠总体死亡率随GA 剂量增加而增大(P<0.05).结论 两品系小鼠的HSP90对 GA 敏感性不同提示 HSP90 的差异可能是C57BL/6 小鼠具有较强的创伤耐受能力的重要原因.
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17-AAG联合顺铂对人胃癌SGC-7901细胞株增殖和凋亡作用的影响
目的 探讨热休克蛋白90 (HSP90)抑制剂17-AAG联合顺铂对人胃癌细胞SGC-7901的抑制效应.方法 体外培养SGC-7901,采用四氮唑盐比色法测定不同浓度、不同时间17-AAG、顺铂单药和联合处理后SGC-7901的生长抑制情况；采用流式细胞术检测不同浓度17-AAG和顺铂单药、联合处理后对SGC-7901细胞的细胞周期变化及凋亡率变化.结果 2种药物单用均对SGC-7901细胞有明显的生长抑制作用,2种药物联合后呈协同作用,呈时间、剂量依赖性.流式细胞仪细胞周期分析显示,17-AAG和顺铂单药处理24 h后,17-AAG阻滞SGC-7901细胞于G2/M期,顺铂阻滞SGC-7901细胞于S期.并都具有诱导SGC-7901细胞凋亡的作用,其联合用药可显著增加SGC-7901的凋亡率.结论 17-AAG和顺铂均可明显抑制SGC-7901的增值、诱导细胞凋亡,联合用药有一定的协同效应,呈剂量依赖关系.
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格尔德霉素在鼻咽癌临床治疗中的应用
热体克蛋白90( heat shock protein 90,Hsp90)是生物进化过程中具有一定保守性质的蛋白质,研究发现多种肿瘤的发生发展与其异常表达有关.Hsp90抑制剂与Hsp90结合,抑制了Hsp90的活性,诱导Hsp90作用蛋白降解,从而阻断了细胞的增殖、生长,是一类具有开发前景的抗肿瘤药物.本文就Hsp90抑制剂格尔德霉素(geldnamycin,GA)在鼻咽癌治疗中的应用进行了简要综述.
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抑制热休克蛋白90活性对HepG2细胞迁移的影响和相关机制
目的:通过抑制热休克蛋白90 (heat shock protein 90 beta,Hsp90β3)的活性,检测其对HepG2细胞迁移的影响.方法:使用已知的Hsp90抑制剂Ganetespib靶向抑制Hsp90β蛋白活性,检测Hsp90β抑制后细胞内Akt介导的细胞迁移相关信号通路的影响;RT-PCR实验检测Ganetespib对MMP-9及COX-2基因的调节作用;划痕实验检测抑制Hsp90β活性对细胞浸润侵袭作用的影响.结果:Ganetespib对Hsp90的表达量影响较小(P＞0.05),但能有效降低Akt的磷酸化程度,且该程度与Ganetespib用量呈正相关(P＜0.01);对Akt/NF-κB信号通路检测发现Ganetespib能显著降低IκB的磷酸化水平,进而阻止NF-κB入核发挥转录作用;此外,RT-PCR检测显示受Ganetespib的影响,NF-κB的下游转录基因MMP-9及COX-2均出现不同程度的下调[MMP-9下降(42.7±3.7)％,P＜0.01;COX-2下降(45.3±5.2)％,P＜0.01];划痕实验表明,HepG2细胞的迁移率受Ganetespib的影响,与其剂量呈正相关.结论:Hsp90β对HepG2细胞迁移活性有重要的影响,其机制可能是通过阻断Akt/IKK介导的NF-κB转录活性实现的.
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Hsp90潜在抑制剂姜黄素诱导人宫颈癌Hela细胞凋亡的机制
目的:研究姜黄素对人宫颈癌细胞Hela的抑制作用及对Hsp90信号通路的影响.方法:MTT法检测姜黄素对Hela细胞的增殖抑制作用.划痕实验检测姜黄素对细胞浸润侵袭的影响.流式细胞术检测姜黄素促进细胞凋亡的效果.Western blotting检测姜黄素对Hela细胞内Hsp90、Hsp70、AKT及Her-2蛋白表达的影响.结果:作用48h后,姜黄素对Hela细胞的增殖抑制呈现出显著的剂量依赖性(P＜0.01),当药物浓度为100 μmol/L时抑制率达到(87.5 ±3.5)％,IC50值为(41.8 ±2.3)μmol/L.划痕实验表明,姜黄素能抑制细胞的浸润和迁移.流式细胞结果显示,姜黄素能有效的促进Hela细胞凋亡,40 μmol/L组细胞的凋亡率即从原来的(10.3±0.6)％提高至(19.1±1.5)％(P＜0.05),当药物浓度达到100 μmol/L时凋亡率达到(55.8±2.6)％.Westem blotting结果显示,姜黄素能引起Hsp70蛋白表达上调,并促进Hsp90下游客户蛋白AKT及Her-2降解.结论:姜黄素表现出较强的抗Hela细胞活性,其机制可能是通过抑制Hsp90活性,影响相关信号通路引起的.
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姜黄素对Hsp90的结合及抑制作用
目的：研究姜黄素对Hsp90的结合及抑制作用。方法：采用分子模拟对接、等温滴定微量热法及Oc-tet技术检测姜黄素与Hsp90的结合机制。采用变性荧光素酶再复性法检测姜黄素对Hsp90的抑制作用。结果：分子模拟对接结果显示姜黄素与Hsp90的ATPase区域有特异性结合。等温滴定微量热法及Octet测定二者的结合常数分别为2.84×104L/mol和9.79×104L/mol。荧光素酶复性法确定姜黄素能通过对 Hsp90的抑制作用阻止其对变性荧光素酶进行修复，与阳性对照 GA 相比（ IC50值为1.14μmol/L），姜黄素对Hsp90的IC50值为7.51μmol/L。结论：姜黄素与Hsp90有较强的结合且对其分子伴侣功能具有一定的抑制效果。
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热休克蛋白70,90在口腔鳞癌及癌前病变中的表达及意义
目的: 检测热休克蛋白70,90在口腔鳞癌及癌前病变中的表达情况,探讨其在口腔癌中的作用及其意义. 方法: 采用SABC法免疫组化方法检测42例口腔鳞癌、22例口腔扁平苔藓、20例口腔白斑、10例正常黏膜中HSP70,90蛋白表达的情况. 结果: HSP70在OLP组中主要以阳性和强阳性表达为主,占91%(20/22),明显高于正常黏膜、口腔白斑和口腔鳞癌组(P＜0.05);HSP90在OLP, OSCC组中主要以弱阳性和阳性表达为主,分别占73%(16/22)和70%(14/20),明显高于正常组和口腔白斑组(P＜0.05). 结论: HSP70,90在口腔扁平苔藓中均起着一定的作用;同时HSP90可能还参与口腔鳞癌的发生和发展过程.
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HSP90-eNOS在糖尿病大鼠胸主动脉的表达及普罗布考干预实验
目的 建立糖尿病大血管病变模型,观察HSP90和eNOS在糖尿病大鼠胸主动脉中的表达,以及普罗布考干预治疗后的影响.方法 50只雄性SD大鼠分为正常对照组(N组)和模型组,模型组以高糖高脂喂养联合腹腔注射STZ成模.以随机血糖≥16.7 mmol/L并维持2 w者定为造模成功.成模大鼠随机分为糖尿病组(DM组)和普罗布考干预组(PB组),PB组每日以普罗布考灌胃,N组和DM组以等体积柠檬酸钠缓冲液灌胃.8 w后处死大鼠并分离胸主动脉,光镜下观察胸主动脉病变,免疫组织化学检测血管组织HSP90、eNOS的表达.结果 ①DM组大鼠胸主动脉内皮细胞广泛脱落,平滑肌排列紊乱.PB组大鼠胸主动脉可见内皮细胞灶状脱落,平滑肌排列稍紊乱.N组大鼠内皮细胞光滑平整,平滑肌排列整齐.②DM组大鼠较N组大鼠相比,胸主动脉表达HSP90明显升高(P<0.05).PB组与DM组比较,胸主动脉HSP90表达无明显差异(P>0.05).三组间胸主动脉表达eNOS无明显差异(P>0.05).结论 ①高糖高脂喂养联合腹腔注射STZ的糖尿病大鼠,胸主动脉呈早期动脉粥样硬化改变;②HSP90在糖尿病大鼠胸主动脉表达明显升高,普罗布考干预治疗后对其表达无明显影响.
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MHC-Ⅰ类分子抗原呈递相关蛋白与乙肝相关性研究
目的 探讨正常肝组织与乙型肝炎中TAP1、TAP2、HSP70、HSP90、CNX、β2-MG蛋白表达及相关关系.方法 以内源性生物素阻断S-P法来检测32例乙肝患者和16例健康对照者石蜡包埋肝组织的TAP1、TAP2、HSP70、HSP90、CNX、β2-MG蛋白表达情况.结果 β2-MG、TAP1、HSP70、HSP90、CNX蛋白在乙肝组表达高于正常组(P均<0.05);通过相关性分析发现,TAP2蛋白与HSP70蛋白在正常组中呈相关性(χ2=16.000,P=0.008).结论 TAP1、TAP2、HSP70、HSP90、CNX、β2-MG蛋白均在乙肝组表达高于正常组(P<0.05),提示这些蛋白均参与MHC-Ⅰ类分子的乙肝病毒抗原处理及提呈过程,并且可以做为诊断乙肝的临床指标.
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HSP90抑制剂对食管鳞癌细胞株TE-1凋亡的影响及作用机制
目的 探讨抑制热休克蛋白90(Hsp90)对食管鳞癌细胞株TE-1凋亡的影响.方法 采用不同浓度(0.25、0.5、1.0、2.0 μmol/L)、不同时间(24、48、72 h)HSP90抑制剂17-烯丙胺-17-脱甲氧格尔德霉素(17-AAG)处理食管鳞癌细胞株TE-1,分别采用MTT法、流式细胞仪及westemblot检测细胞增殖、细胞凋亡及Hsp90、Hsp70、Akt、Fas蛋白表达.结果 17-AAG对TE-1细胞体外增殖抑制率和细胞凋亡率有明显促进作用,并呈现时间-剂量依赖性.17-AAG处理后TE-1细胞Hsp90、Akt蛋白表达明显降低,Hsp70、Fas蛋白表达明显上调.结论 17-AAG可显著抑制TE-1增殖,促进凋亡,其机制可能是通过抑制Hsp90活性、影响其相关信号通路所致.
