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IFA筛选经EMS诱导的沙眼衣原体突变株
目的:用甲基磺酸乙酯(Ethylmethylsulfone,EMS)诱导D型沙眼衣原体突变,利用间接免疫荧光法筛选出突变菌株,为研究不同衣原体基因的功能提供实验依据.方法:将D型沙眼衣原体标准株接种McCoy细胞,加入EMS诱导突变,收集存活菌株,利用空斑实验进行衣原体的分离和纯化,并用不同衣原体蛋白单克隆抗体做间接免疫荧光实验筛选突变株.结果:用间接免疫荧光筛选经EMS作用的沙眼衣原体,筛选出三株包涵体形态偏小的菌株(56#、58#、95#),一株圆形包涵体的突变株(61#)和一株D413N表达阴性的突变菌株(83#).结论:用EMS作为诱导剂诱导D型沙眼衣原体突变,并成功筛选出三种突变株.为寻找衣原体功能基因与衣原体表型之间的联系奠定了实验基础.
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免疫磁珠检测水中f2噬菌体方法的研究
目的:构建免疫磁珠检测水中f2噬菌体的方法,为检测水中病毒及相关研究提供基础数据和参考.方法:将兔抗亿噬菌体IgG与微磁珠化学偶联构建免疫磁珠,吸附水中f2噬菌体,然后洗脱免疫磁珠结合的噬菌体,空斑实验检测f2噬菌体的效价.改变洗脱液pH,观察不同pH对免疫磁珠捕获病毒洗脱效果的影响.结果:通过化学方法将抗体包被到磁珠上效果良好,免疫磁珠对f2噬菌体的吸附效率约50%以上,但洗脱效率存在差异,约30%的f2噬菌体可从免疫磁珠上洗脱下来;不同pH值洗脱液冼脱效果有差异,在pH值接近2.7时效果较好.结论:本实验通过化学偶联法成功构建免疫磁珠,并获得了较好的捕获病毒效果,但洗脱解离效率偏低,因此洗脱液及洗脱条件的选择是本研究提高病毒回收率关键因素之一.
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不同血清型汉坦病毒基因重排的研究
目的 探明汉坦病毒HTN型与SEO型、HTN型与PHV型之间基因重排的频率和特点.方法 分别用相同滴度的汉坦病毒HTN型与SEO型(76-118株与SR-11株),及汉坦病毒HTN型与PHV型(76-118株与PHV株)毒株分别混合感染Vero E6细胞,用空斑形成试验挑选子代病毒克隆,挑得的单个病毒克隆在Vero E6细胞上扩增.分别用分型引物对子代病毒进行RT-PCR实验,以确定子代病毒L、M、S片段核酸的来源,鉴定子代病毒基因型.结果 发现76-118株与SR-11株混种的子代病毒株基因30/44株来源于亲代病毒,9/44株子代病毒发生了基因片段重排.76-118株与PHV株混种的子代病毒株基因26/36株来源于亲代病毒,3/36株子代病毒发生了基因片段重排.76-118株与SR-11株混种的子代病毒株的基因重排率(20.45%)明显高于76-118株与PHV株混种的子代病毒株(8.33%).结论 这种重排率的差异可能是由于HTN型与SEO型HV基因核酸序列之间的同源性较高,而更容易发生基因重排.而HTN型与PHV型HV基因核酸序列之间的同源性较低,发生基因重排的机会显著降低.
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运用流式细胞术快速检测汉滩病毒滴度
目的:建立用流式细胞仪快速测定汉滩病毒滴度的方法.方法:汉滩病毒76-118株感染Vero-E6细胞,以汉滩病毒核蛋白单克隆抗体(mAb) 3G1为一抗,FIX标记的羊抗小鼠抗体为二抗,用流式细胞术(FCM)检测阳性细胞率,评价感染后不同时间点,以及不同病毒接种量的阳性细胞率,并与间接免疫荧光法对比.结果:感染后36 h阳性细胞百分率为(10.06±0.42)%,低检测的病毒滴度为100 TCID50/ML.结论:相对于传统的空斑实验及间接免疫荧光滴定法,FCM是一种简单、快速、有效检测汉滩病毒滴度的方法.
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汉滩型与希望山型汉坦病毒的体外重组
目的探明汉坦病毒汉滩型与希望山型之间能否发生基因重排,以及发生重排的频率和特点. 方法用汉坦病毒汉滩型76-118株与希望山型PHV株混合感染Vero E6细胞,空斑形成实验挑取子代病毒克隆株,传代培养后用RT-PCR方法鉴定子代病毒基因型. 结果子代病毒14/36来源于PHV株; 12/36来源于76-118株;5/36 汉滩型与希望山型分型引物扩增均为阳性;1株子代病毒L, S片断均来源于76-118株,而M片段两种引物扩增均为阳性;2株子代病毒L片断来源于76-118株,S片断来源于PHV株,M片段两种引物扩增均为阳性. 1株子代病毒L, S片断均来源于76-118株,而M片段来源于PHV株. 结论汉坦病毒汉滩型与希望山型之间可以发生基因片段的重排.
