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甲基丙二酰辅酶A变位酶表达载体的构建及初步表达
目的:克隆表达甲基丙二酰辅酶A变位酶(MCM)蛋白,为进一步研究相关基因突变对功能的影响机制奠定基础.方法:自人外周血淋巴细胞中提取总RNA、逆转录,并与pET32a构建融合蛋白原核表达载体；优化蛋白表达诱导条件；经SDS-PAGE、Western Blot检测目的蛋白的表达.结果:经酶切鉴定并经测序证实获得全长2210bp的甲基丙二酰辅酶A变位酶基因(MUT),并成功构建融合蛋白原核表达载体,SDS-PAGE在102 kDa处获得目的条带,Western Blot检测确定为MCM表达蛋白.结论:成功克隆表达出MCM表达蛋白.
关键词： 甲基丙二酰辅酶A变位酶(MCM) MUT基因 表达 -
甲基丙二酸尿症合并先天性肾上腺皮质增生症1例报告
目的：探讨罕见的甲基丙二酸尿症合并先天性肾上腺皮质增生症患儿的诊疗方法。方法分析1例甲基丙二酸尿症变位酶缺乏合并21羟化酶缺乏症患儿的临床及实验室资料。结果患儿，男，生后3个月起病，接种疫苗及高蛋白饮食后出现喂养困难、腹泻、代谢紊乱及智力运动发育倒退，1岁8个月时确诊为甲基丙二酸尿症，治疗后好转。5岁后出现性早熟表现，确诊为21羟化酶缺乏症男性化型。基因证实MUT基因存在c.866G?>?C和c.2179C?>?T两个突变，CYP21A2基因存在c.188A?>?T和c.518T?>?A两个已知突变。结论遗传代谢病及内分泌病临床表现复杂，鲜有病例共患多种疾病，该患儿共患甲基丙二酸尿症及21羟化酶缺乏症两种罕见疾病。
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单纯型甲基丙二酸血症家系MUT基因变异的分析及产前诊断
目的 对20个单纯型甲基丙二酸血症家系MUT基因的变异进行测序分析,为家系产前诊断提供依据.方法 应用PCR产物直接测序法对20例单纯型甲基丙二酸血症患儿及其父母的MUT基因进行变异检测和分析,明确基因变异情况,并对9名孕妇进行产前诊断.结果 20例患儿的家系共检测出19种MUT基因变异,常见的变异为c.323G＞A (p.Arg108His)、c.1106G＞A (p.Arg369His)、c.729730insTT (p.D244Lfs* 39)和c.1107dupT(p.T370Yfs* 22).c.920_923delTCTT (p.F307Sfs*6)、c.419T＞C(p.Leu140Pro)和c.613G＞A (p.Glu205Lys)为未报道过的新变异.Polyphen2和Mutationtaster软件预测这3个变异均可能致病.产前诊断结果显示1例胎儿未检测到MUT基因变异,3例胎儿为MUT基因杂合变异携带者,5例胎儿为MUT基因复合杂合变异或纯合变异患儿.MUT基因正常或杂合变异携带者胎儿的家系选择继续妊娠,而MUT基因纯合变异或复合杂合变异胎儿的家系均选择终止妊娠,胎儿娩出后随访结果与产前诊断结果一致.结论 MUT基因突变分析结果为家系的产前诊断提供了依据,新变异的检出丰富了MUT基因突变谱.
关键词： 单纯型甲基丙二酸血症 MUT基因 基因突变 产前诊断 -
一个单纯性甲基丙二酸血症家系中MUT基因两个新突变的鉴定
目的 对一个单纯性甲基丙二酸血症(methylmalonic acidemia,MMA)家系进行基因突变的检测和分析,探讨其发病的分子遗传学病因.方法 PCR结合Sanger测序方法对先证者MUT、MMAA、MMAB 3个基因的全部外显子及其旁侧序列进行分析,鉴别其中可能存在的基因突变.采用Polyphen2、SIFT、HSF、DNAMAN 6.0和Swiss-PdbViewer4.1.0等软件对检测到的新的基因突变进行致病性分析.结果 先证者MUT基因检测到两个杂合突变,分别为c.581C＞T(p.P194L)和c.1219A＞T(p.N407Y),家系分析显示,前者遗传于母亲,后者遗传于父亲.Polyphen2和SIFT软件预测这两个突变均可能致病.这两个位点所在的密码子在不同物种间高度保守,均位于MCM结构的底物结合区——(β,α)8 barrel结构域,这两个突变可能通过影响MCM空间构象,从而影响蛋白质的功能.结论 两个新的MUT基因突变可能是导致单纯性甲基丙二酸血症的致病原因.
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单纯性甲基丙二酸血症患儿MUT基因突变分析
目的 探讨1例单纯性甲基丙二酸血症患儿临床特点与MUT基因突变类型.方法 分析患儿的临床表现特点与实验室检查结果.提取患儿外周血基因组DNA,应用PCR技术扩增患儿MUT基因13个外显子及其侧翼区序列,扩增产物直接测序确定基因型.结果 患儿临床表现为发育迟缓,嗜睡,抽搐,肌张力降低以及难以纠正的代谢性酸中毒和高氨血症.血串联质谱发现多种酰基肉碱含量降低,尿液中发现甲基丙二酸明显增高,血同型半胱氨酸结果正常,对患儿进行维生素B12负荷试验,结果显示维生素B12治疗无效,提示患儿为单纯性甲基丙二酸血症可能性大.通过MUT基因突变分析,确定息儿基因型为c.755dupA+c.944dupT.其中c.944dupT为新突变.结论 遗传代谢病筛查实验对疾病的临床诊断有重要的提示作用,但确诊还需行致病基因突变分析.
关键词： 单纯性甲基丙二酸血症 MUT基因 串联质谱 丙酰肉碱 遗传代谢病 -
甲基丙二酸血症患儿MUT基因突变分析
目的 检测甲基丙二酸血症(methylmalonic acidemia,MMA)患儿MUT基因突变类型及突变频率,探讨基因型与临床表型之间的关系.方法 依据串联质谱检测血酰基肉碱、气相色谱-质谱检测尿甲基丙二酸以及维生素B_(12)负荷试验等,诊断21例单纯MMA患儿;采用聚合酶链反应和直接测序法对这些患儿进行MUT基因突变检测分析.结果 在21例单纯MMA患儿中14例检测到17种MUT基因突变,其中8种为未报道突变.以c.323G>A(R108H)、c.729_730insTT(D244LfsX39)与c.1630_1631GG>TA(G544X)较为常见,突变频率分别为14.3%、10.7%及14.3%,以错义突变多见(64.7%).14例MUT突变患儿中10例为早发型,1例为迟发型,3例由新生儿出生筛查检出;11例为维生素B_(12)无效型,3例为有效型.结论 揭示了中国MMA患儿中MUT基因的部分突变谱,MUT基因突变患儿发病较早,多为维生素B_(12)无效型.
关键词： 甲基丙二酸 甲基丙二酰辅酶A变位酶 MUT基因 突变 -
用高通量测序检测一个缺乏先证者样本的甲基丙二酸血症家系的基因突变
目的 探讨高通量测序在缺乏先证者样本的甲基丙二酸血症家系突变基因检测和产前诊断中的应用.方法 对1个具有甲基丙二酸血症生育史的家系,应用高通量测序技术对亲本进行14个相关致病基因进行检测,结合Sanger测序对基因突变的进行确认,并对胎儿进行产前诊断.结果 高通量测序结果显示孕妇丈夫为MUT基因第3外显子c.729_730insTT(p.Asp244Leufs* 39)杂合突变携带者,孕妇为MUT基因第5外显子c.914T＞C(p.Leu305Ser)杂合突变携带者;夫妻的Sanger测序验证结果与高通量测序相符.Sanger测序结果显示胎儿未携带其双亲的突变,出生后随访,表型正常.结论 对于临床诊断明确、但无法进行先证者基因诊断的常染色体隐性遗传病家系,用高通量测序进行携带者检测可为产前诊断提供重要的参考.
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MUT基因突变致单纯性甲基丙二酸尿症家系的突变分析及产前诊断
目的 探讨MUT基因检测用于单纯性甲基丙二酸尿症(methylmalonic academia,MMA)家系的基因突变分析及产前诊断的可行性.方法 应用PCR扩增和直接测序方法对3对MMA生育史的夫妇共6人进行MUT基因测序,分析了MUT基因外显子区和剪切区DNA序列改变情况,同时选择100名正常对照个体进行MUT基因序列分析.在确定每个家系基因型后,对家系中的3个高危胎儿抽取绒毛进行产前诊断.结果 3个单纯性MMA家系共发现6种MUT基因突变:家系1中,先证者母亲携带MUT基因c.1880A＞G(p.H627R)杂合突变,父亲携带IVS9-1G＞A杂合突变;家系2中,先证者母亲携带c.1741C＞T(p.R581X)杂合突变,父亲携带c.729insTT(p.D244fX39)杂合突变;家系3中,先证者母亲携带c.616C＞T(p.Q206X)杂合突变,父亲携带c.1280G＞A (p.G427D)杂合突变,其中p.Q206X、IVS9-1G＞A、p.R581X和p.H627R为新突变.100名健康个体MUT基因相应区域测序,未发现有上述同样序列改变.对3个家系的胎儿行产前诊断,家系1胎儿为p.H627R杂合突变携带者,家系2胎儿为p.R581X杂合突变携带者,家系3胎儿未携带突变,3对夫妇均选择继续妊娠,胎儿娩出后随访与产前诊断结果一致.结论 MUT基因突变是3个家系患者致病的主要原因的可能性大,发现4个MUT基因新突变,应用基因测序技术对有单纯性MMA生育史的夫妇行产前MUT基因突变分析可以有效地预防患儿出生.
关键词： 单纯性甲基丙二酸尿症 MUT基因 突变 产前诊断
