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ARF1文献资料
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氧化应激对Hsp90α、ARF1细胞内定位和相互作用的影响
目的:探讨氧化应激对热休克蛋白90α(Hsp90α)与ADP-核糖基化因子1(ARF1)细胞内定位、相互作用的影响.方法:应用500μM H2O2处理HepG2细胞,建立氧化应激模型,MTT比色法检测细胞活力,Western blotting检测Hsp90α和ARF1水平,细胞免疫荧光法、免疫共沉淀检测上述蛋白在氧化应激下的分布、共定位变化和相互作用.结果:MTT比色法结果提示,随氧化应激时间延长,细胞存活力降低;Western blotting结果显示,氧化应激可提高胞内Hsp90α和ARF1蛋白水平；免疫共沉淀结果显示,随氧化应激作用时间延长,Hsp90α与ARF1相互结合增多；细胞免疫荧光结果显示,随氧化应激作用时间延长,Hsp90α与ARF1荧光强度增强,并趋于沿胞膜分布.结论:提示氧化应激影响Hsp90α和ARF1的水平、胞内分布及相互作用.
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小G蛋白在心肌钠通道蛋白转运中的作用
目的 研究小G蛋白Sar1和Arf1对钠通道蛋白(Nav1.5)转运的调控作用.方法 以HEK293细胞作为宿主细胞,将人SCN5A基因转染到HEK293细胞中,通过G418筛选稳定表达SCN5A基因的细胞系;为了检测小G蛋白对Nav1.5的调节效应,野生型或突变型的小G蛋白Sar1和ARF1分别瞬转到HEK293-Nav1.5细胞.利用免疫印迹对目标蛋白进行定量,应用免疫荧光对细胞内的目标蛋白进行定位.结果 过表达突变的Sar1减少了细胞膜上Nav 1.5的表达和抑制了Nav 1.5转运到细胞膜上.另外,过表达ARF1对于Nav 1.5在细胞的表达及定位无明显影响.结论 小G蛋白Sar1可能参与调节Nav 1.5在细胞内的运输.
