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铁硫簇的结构、功能及生物合成研究进展
铁硫簇是普遍存在于生物体中的古老的生命物质之一.铁硫簇基本结构单元有[2Fe-2S]、[3Fe-4S]、[4Fe-4S]及.[8Fe-7S]等几种形式,不同结构的铁硫簇具有不同的生物学功能,主要包括参与电子传递、底物的结合与激活、铁/硫的存储、基因表达的调控、酶活的调控等.铁硫簇既可在生物体内合成,也可在体外进行人工组装.铁硫簇的生物合成主要和NIF、ISC、SUF这三个系统有关.研究已确定了参与铁硫簇合成的关键蛋白,但对它们分子水平上的机制及如何进行相互作用在体内外合成铁硫簇的认识尚待进一步研究.
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阴道毛滴虫铁氧还蛋白基因的克隆和序列分析
目的构建阴道毛滴虫铁氧还蛋白(ferredoxin, Fd)基因重组质粒, 并进行克隆及序列分析. 方法根据Fd基因已知序列, 设计合成 1 对引物, 应用螯合树脂(Chelex-100)提取基因组DNA, 用聚合酶链反应(PCR)扩增出Fd基因, 克隆入pMD-18T 载体, 转化大肠埃希菌JM109 感受态细胞, 经PCR及酶切鉴定、测序. 结果 Fd基因体外扩增产物长度为 306 bp, 重组质粒经PCR及酶切鉴定结果表明获得正确重组子, 测序结果表明其片段与已知序列吻合. 结论克隆出阴道毛滴虫Fd基因.
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阴道毛滴虫铁氧还蛋白基因真核表达质粒的构建
作者用螯合树脂(Chelex-100)提取阴道毛滴虫基因组DNA,PCR扩增出阴道毛滴虫铁氧还蛋白(ferredoxin,Fd)基因,克隆入pMD-18T载体,亚克隆至poDNA3.1(+)真核表达质粒.经PCR及酶切鉴定,Fd基因体外扩增产物为306 bp,与已知序列吻合.成功构建了Fd基因的真核表达质粒.
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一种新的阴道毛滴虫铁氧还蛋白基因
目的铁氧还蛋白系铁硫蛋白,在多种反应体系中起着传递电子的作用,也参与抗滴虫药物甲硝咪唑杀虫作用的激活.本研究旨在克隆和分析阴道毛滴虫铁氧还蛋白基因,以便进一步探讨其生理功能.方法 构建阴道毛滴虫 cDNA表达文库,分离 cDNA进行克隆、测序及序列分析.结果在分离出的 cDNA克隆中发现一个新的铁氧还蛋白基因.该基因读码框全长 312 bp,相应蛋白质序列具 103个氨基酸;在该蛋白质前体的 N端带有 10个氨基酸残基的氢酶体靶片段 (MLSQCSPLRF).序列分析显示该铁氧还蛋白 (TvFd2)与已报道的阴道毛滴虫铁氧还蛋白 (TvFd)有高度同源性 (69% ); TvFd2与铁氧还蛋白 (2Fe-2S)的两大亚类 (氧化酶铁氧还蛋白和光合铁氧还蛋白 )均具较低的同源性;可与 (2Fe-2S)结合的 4个半胱氨酸排列成典型的铁氧还蛋白保守序列 (-C-X5-C-X2-C-Xn-C-).结论分析表明 TvFd2是一新的阴道毛滴虫铁氧还蛋白,其功能有待进一步研究.
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阴道毛滴虫与人型支原体共生对铁氧还蛋白基因影响
采用人型支原体16s rDNA的特异引物,对从郑州大学附属医院妇科门诊患者分离到的30株阴道毛滴虫进行PCR检测,结果有25株感染人型支原体,感染率为83.33%,这显示了阴道毛滴虫和人型支原体之间的共生关系在中国具有普遍性.并对10株阴道毛滴虫(5株人型支原体阳性和5株人型支原体阴性)的铁氧还蛋白(Fd)基因进行测序,探讨人型支原体对Fd基因的影响,结果发现10株阴道毛滴虫的Fd基因完全相同,但与GenBank中的基因进行比较分析,在第200位多出ctg三个碱基,编码亮氨酸,但并未导致读码框架改变.基因同源性为99%.
