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神经肽的免疫调节作用
机体自我免疫耐受的降低或者破坏会导致免疫系统的失衡,并加重炎症反应过程,从而引发多种自身免疫性疾病.所以诱导免疫耐受并终止炎症反应对恢复机体健康具有十分重要的意义.近研究发现机体在炎症反应过程中会释放一类神经肽,如VIP,urocortin,ghrelin等.这些神经肽可下调固有免疫应答,抑制抗原特异性Th1细胞分化,诱导调节性T细胞的产生,维持免疫耐受,并终止炎症反应.神经肽的这种抑炎作用主要是通过激活cAMP-PKA通路以及调节与免疫炎症因子表达相关的信号通路来实现的.神经肽有可能成为治疗炎症性疾病的一类新药物.
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PGE2通过cAMP-PKA信号转导通路促进肝癌细胞VEGF表达
目的:探讨PGE2对人肝癌细胞HuH7 VEGF表达的影响及其可能涉及的信号转导通路.方法:用PGE2、EP1-4四种受体激动剂、SQ22536+PGE2、H89+PGE2处理HuH7细胞,Real-time PCR、Western blot、ELISA等检测VEGFmRNA、蛋白表达的变化.结果:10μmol/LPGE2处理HuH7细胞24 h后,VEGFmRNA的表达水平上升了264%(P＜0.01)、细胞培养上清中VEGF蛋白表达水平上升了24%(P＜0.01);10 μmol/L PGE2处理HuH7细胞6、12、24 h后,胞浆中VEGF蛋白的表达水平分别上升了13.6%、25.7%、39.6%(P＜0.01);10μmol/L EP2受体激动剂处理HuH7细胞24 h后.胞浆、细胞培养上清中VEGF蛋白表达水平与对照组相比分别上升了32.3%、20.1%(P＜0.01),而10 μmol/L EPl、EP3、EP4受体激动剂处理HuH7细胞24 h后,VEGF的表达水平无明显改变;30 μmol/L PKA抑制剂(H89)、500 μmol/L腺苷酸环化酶抑制剂(SQ22536)处理HuH7细胞24 h后,胞浆VEGF的表达水平分别为对照组的91.6%、89.6%,细胞培养上清中VEGF的表达水平分别为对照组的98_3%、91.9%.与PGE2组相比均有统计学差异(P＜0.01).结论:PGE2可上调HuH7细胞VEGF的表达,其作用机制可能是通过EP2受体激活cAMP-PKA信号转导通路所致.
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EP2受体介导的前列腺素E2影响胆管细胞癌细胞HuCCT1细胞间黏附因子-1表达和侵袭的研究
目的:探讨前列腺素E2(prostaglandin E2,PGE2)通过EP2受体影响人胆管细胞癌细胞HuCCT1细胞间黏附因子-1(intercellular adhesion molecule-1,ICAM-1)的表达及癌细胞的侵袭能力.方法:用PGE2、EP1～4四种受体激动剂(17-phenyltrinor Prostaglandin E2、Butaprost、Sulprostone和Prostaglandin E1 Alcohol)、EP2受体抑制剂AH6809、腺苷酸环化酶(AC)抑制剂SQ22536和蛋白激酶A(PKA)抑制剂H89处理HuCCT1细胞,通过Western blot、划痕试验等方法检测ICAM-1的蛋白表达水平以及HuCCT1细胞侵袭能力的变化.结果:PGE2明显提高HuCCT1细胞ICAM-1蛋白的表达水平,5μmol/L,PGE2处理HuCCT1细胞24h后,ICAM-1蛋白表达水平与对照组相比上升了66.17％(P＜0.05),并呈浓度依赖性和时间依赖性；5μmol/L PGE2处理HuCCT1细胞24h后,HuCCT1细胞的侵袭能力较对照组增强了43.29％(P＜0.01).10 μmol/L EP1～4受体激动剂处理HuCCT1细胞24 h后,ICAM-1蛋白的表达水平与对照组相比明显增高,其中EP2受体激动剂上升了257.88％(P＜0.05),10μmol／L EP2受体激动剂处理HuCCT1细胞24h后,HuCCT1细胞的侵袭能力较对照组增强了 56.99％(P＜0.01)；10 μmol/LEP2受体抑制剂AH6809处理后ICAM-1蛋白的表达水平与PGE2组相比下降了49.14％(P＜0.05),细胞侵袭能力下降了52.06％(P＜0.01).25 μmol/L AC抑制剂SQ22536、10 μmol/LPKA抑制剂H89处理HuCCT1细胞后,ICAM-1蛋白的表达水平较EP2受体激动剂处理组分别下降了72.87％(P＜0.05)和80.78％(P＜0.05).结论:PGE2可通过EP2受体激活cAMP-PKA信号转导通路上调HuCCT1细胞ICAM-1的表达,从而促进HuCCT1细胞的侵袭转移.
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褪黑素通过cAMP-PKA信号转导通路抑制黑色素瘤细胞VEGF表达
目的 探讨褪黑素对人黑色素瘤细胞A375 VEGF表达的影响及其可能涉及的信号转导通路.方法 用褪黑素、褪黑素受体拮抗剂、forskolin+褪黑素、8-brom-camp+褪黑素处理A375细胞,Real-time PCR、Western blot、ELISA等检测VEGFmRNA、蛋白表达的变化.结果 10μmol/L褪黑素处理A375细胞24 h后,VEGFmRNA的表达水平下降了48.7％(P ＜0.01)、细胞培养上清中VEGF蛋白表达水平下降了24.3％(P ＜0.01);10μmol/L褪黑素处理A375细胞6、12和24h后,胞浆中VEGF蛋白的表达水平分别下降了14.2％、27.3％和41.8％(P ＜0.01);10μmol/L褪黑素受体拮抗剂处理A375细胞24h后,胞浆、细胞培养上清中VEGF蛋白表达水平与对照组相比分别下降了32.3％和20.1％ (P ＜0.01);30μmol/L PKA激动剂(8-brom-camp)、500μmol/L腺苷酸环化酶激动剂(forskolin)处理A375细胞24 h后,胞浆VEGF的表达水平分别是对照组的1.58和2.24倍,细胞培养上清中VEGF的表达水平分别为对照组的1.65和2.39,与褪黑素组相比均差异有显著性(P＜0.01).结论 褪黑素可下调A375细胞VEGF的表达,其作用机制可能是通过褪黑素受体阻断cAMP-PKA信号转导通路所致.
