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培养乳猪肝细胞型生物反应器的药物转化作用
物反应器是生物人工肝的核心部分,借助反应器,生物材料肝细胞与流经反应器的血液相互作用,可对肝衰竭患者进行辅助支持与治疗[1].为构建理想的体外生物人工肝支持系统,我们用乳猪肝细胞和中空纤维管组成生物反应器,用药物转化试验对其性能进行了初步评价.
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中空纤维反应器管外腔胶原凝胶混合肝细胞培养
早期的生物人工肝是将培养液混悬肝细胞灌入中空纤维反应器管外腔,一般效果不好.后改将培养液混悬肝细胞或微载体肝细胞灌入中空纤维管内腔或先用胶原液在中空纤维管内腔壁涂层,再将培养液混悬肝细胞灌入中空纤维管内腔;使患者血(血浆)流过管外腔,通过中空纤维膜上的微孔,管内腔和管外腔发生物质交换,使血中的毒物被肝细胞解毒[1-2].近年来Excorp Medical公司推出将胶原凝胶混合肝细胞灌注中空纤维管外腔的生物人工肝反应器,效果尚待验证[3].本研究将胶原凝胶混合肝细胞灌注中空纤维反应器管外腔培养(凝胶混合法),与将培养液混悬肝细胞灌注腔壁涂有胶原层的中空纤维管外腔培养(单层凝胶法)对照,验证肝细胞功能.
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美国C3A细胞支持的生物人工肝研究进展
以肝细胞瘤C3A细胞支持的生物人工肝是目前世界上第一个混合型人工肝支持系统,在美国已完成1、2期临床试验,其GMP生产工厂建在圣地亚哥,并有意在中国建厂.C3A细胞能在中空纤维管中生长,代谢毒素,合成对生命有用的蛋白质.
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周围神经组织工程材料的预构
目的研究具有雪旺细胞(SC)活性的组织工程周围神经修复材料的构建方法.方法①采用干/湿相转化纺丝法,将分子量为730 kD的聚乳酸(PLA)制成外径为2.3 mm、内径为1.9 mm、壁厚0.4 mm、长4 cm、孔隙率为70%、孔径为20~40 μm的中空纤维管和孔径为100~200 μm、孔隙率为85%的PLA无纺纤维布.②将SC置入细胞外基质(ECM)凝胶中,观察SC在ECM凝胶中的生长.③SC/ECM悬液浸入PLA无纺纤维布中,观察SC在PLA支架材料中的生长.④将SC、SC/ECM和SC/ECM/PLA置入PLA中空纤维管中,桥接大鼠坐骨神经长10 mm缺损,观察SC移植后存活情况.结果①SC在ECM凝胶中,细胞生长良好,1天后开始有细胞伸出两极,形态开始展开,3天后几乎全部细胞恢复成双极梭形状细胞,并开始分裂、增殖,直到14天后随着凝胶的溃解,SC开始死亡,降解成碎片;当ECM凝胶溃解后,加入DMEM培养基,SC游出,贴壁生长.②SC/ECM悬液浸入PLA无纺纤维布后,大部分细胞随ECM凝胶状态的形成,滞留于PLA纤维网孔中,1天后开始伸出两极,3天后可见网孔中大量双极梭形细胞,部分细胞沿着纤维生长,仅少数细胞脱落于培养瓶底贴壁生长.③SC移植术后21天,BrdU免疫组织化学染色发现大量SC细胞存活,SC/ECM组和SC/ECM/PLA组存活细胞数量明显多于单纯SC悬液组.结论 ECM凝胶能维持SC存活.PLA无纺纤维布与ECM凝胶复合是良好的携带SC的多孔生物降解材料.