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日本血吸虫可溶性虫卵抗原组分的分离与纯化
目的 分离和纯化日本血吸虫可溶性虫卵抗原(soluble egg antigens,SEA)各组分.方法 常规制备血吸虫可溶性虫卵抗原,经十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)柱电泳层析仪分离,分别按每管20、60、120 min的流速各收集15管,并经透析纯化各抗原组分,再用SDS-PAGE检测并分析其相对分子质量(Mr).结果 获得40种相对分子质量不同的可溶性虫卵抗原组分,时间流速对蛋白峰的出现和各组份中相对分子质量大小有明显的影响,当流速为20、60、120 min,相对分子质量(×103)分别为34.19±4.56、60.35±11.10、91.08±12.75,组间比较差异有统计学意义(F=12.488,P＜0.05).电泳网显示各蛋白峰均为清晰的单一带.结论 SDS-PAGE柱电泳层析方法能有效地分离出日本血吸虫可溶性虫卵抗原相对分子质量不同的抗原组分,流速明显影响分离结果.
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日本血吸虫虫卵可溶性糖蛋白去糖基化对其刺激机体产生Th2免疫应答能力的影响
目的 探究日本血吸虫虫卵可溶性蛋白(Schistosoma japonicum soluble egg antigen,SjEA)中的糖蛋白去糖基化后对其诱导机体产生Th2免疫应答能力的影响.方法 用胶原酶消化法制备SjEA,用过碘酸钠氧化处理后,制备成去糖基化的SjEA(deglycosylated SjEA,d-SjEA).6～8周龄雄性BALB/c小鼠随机分为PBS、SjEA和d-SjEA组,每组9只.用后足垫皮下注射的方式免疫小鼠,其中PBS组注射25μl PBS/侧,SjEA组注射50 μg SjEA/侧,d-SjEA组注射50μgd-SjEA/侧,4d后断髓法处死小鼠,取腘窝淋巴结,制备成浓度为4×106/ml淋巴细胞悬液,体外用anti-CD3和anti-CD28刺激48h后,ELISA检测细胞上清中的细胞因子IL-4.结果 SjEA组上清中IL-4的平均值为1.55 ng/ml,高于PBS组的0.03 ng/ml,差异有统计学意义(P ＜0.001)；d-SjEA组上清中IL-4为1.42 ng/ml,和SjEA组相比,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 日本血吸虫虫卵可溶性蛋白中的糖蛋白在去除糖基化后对其诱导机体产生Th2免疫应答的能力无影响.
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日本血吸虫感染对小鼠血清中脂质含量影响的初步研究
目的 探讨日本血吸虫感染对小鼠血清中脂质含量的影响. 方法 24只ICR小鼠随机均分为2组,分别喂食高脂鼠料和普通鼠料,4周后每组随机取6只小鼠经腹部皮肤感染日本血吸虫双性尾蚴(150条/鼠),42 d后摘眼球取血.另取36只ICR小鼠均分为3组,均喂食普通鼠料.第1组小鼠感染日本血吸虫单性尾蚴(150条/鼠),42 d后摘眼球取血；第2组小鼠腹腔注射日本血吸虫虫卵10 000枚,注射后第3天眼内眦静脉取血,第6天摘眼球取血；第3组小鼠腹腔注射虫卵可溶性抗原(soluble egg antigen,SEA),每鼠1 mg/d,连续注射6d后摘眼球取血.各组均设空白对照,全自动生化仪检测各组小鼠血清总胆固醇(total cholesterol,TC)、甘油三酯(triglyceride,TG)、高密度脂蛋白(high density lipoprotein,HDL)和低密度脂蛋白(low density lipoprotein,LDL)的含量. 结果 日本血吸虫双性尾蚴感染可降低高脂和普通鼠料喂养的小鼠血清中TC、TG、HDL和LDL含量(P＜0.05),其中高脂鼠料喂养组的感染小鼠TC、TG、HDL和LDL含量分别为(1.45±0.31)、(0.17±0.06)、(1.11±0.26)和(0.44±0.15) mmol/L,均低于对照组小鼠的(7.86±0.07)、(0.23±0.07)、(4.96±0.81)和(3.93±0.29) mmol/L(P＜0.05),血清中TC、TG、HDL和LDL分别降低81.6％、26.1％、77.6％和88.8％；普通鼠料喂养组的感染小鼠TC、TG、HDL和LDL含量分别为(1.03±0.08)、(0.17±0.03)、(0.84±0.02)和(0.09±0.02) mmo]/L,均低于对照组小鼠的(1.85±0.05)、(0.90±0.14)、(1.38±0.18)和(0.15±0.01) mmoUL (P＜0.05),血清中TC、TG、HDL和LDL分别降低44.3％、81.1％、39.1％和40.0％.单性尾蚴感染以及腹腔注射虫卵的小鼠与对照组比较,血清中TC、TG、HDL和LDL含量差异无统计学意义(P＞0.05).注射日本血吸虫SEA小鼠的血清TC、TG、HDL和LDL含量分别为(1.07±0.15)、(1.06m15)、(0.71_±0.14)和(0.05±0.04),均低于对照组小鼠的(1.81±0.06)、(2.15±0.13)、(1.16±0.15)和(0.16±0.03) mmol/L(P＜0.05).与对照组相比,TC、TG、HDL和LDL分别降低40.8％、50.7％、38.8％和68.8％. 结论 日本血吸虫感染能降低小鼠血清中的脂质TC、TG、HDL和LDL含量.
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芍药苷对小鼠巨噬细胞产生TGF-β1的影响
目的 探讨芍药苷(paeoniflorin,PAE)对血吸虫可溶性虫卵抗原(SEA)刺激小鼠腹腔巨噬细胞(PMs)产生转化生长因子β1(TGF-β1)的影响.方法 研磨法制备SEA,分别加入含有小鼠PMs的培养板、培养瓶及培养皿中.培养24 h,ELISA法测定TGF-β1含量,RT-PCR检测PMs内TGF-β1基因的表达,Western blotting检测PMs内,TGF-β1蛋白的表达;在含PMs的堵养瓶和培养皿中分别加入10 mg/L SEA 5 ml,培养12 h,再分别加入不同浓度的PAE(0、7.5、15、30、60及120 mg/L),继续培养12 h和24 h.RT-PCR与蛋白质印迹(Wcstern blotting)分别检测PAE对SEA刺激的PMs内TGF-β1基因与蛋白的表达.结果 10mg/L的SEA可明显刺激PMs产生TGF-β1(235.86±3.43 ng/L),PAE呈浓度依赖性地抑制TGF-β1 mRNA的表达(r=-0.827,P＜0.01)和TGF-β1蛋白的表达(r=-0.952,P＜0.01).结论 PAE能抑制SEA刺激的PMs产生TGF-β1.
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应用免疫蛋白质组学方法鉴定日本血吸虫虫卵诊断抗原
目的 虫卵可溶性抗原(soluble egg antigen,SEA)是目前日本血吸虫病免疫诊断中常用的抗原.本研究联合应用双向凝胶电泳(2-DE)、Western blot和MALDI-TOF质谱等技术,鉴定SEA中诊断抗原蛋白质.方法 SEA经2-DE分离蛋白质后进行银染,或应用日本血吸虫感染兔血清Western blot筛选抗原蛋白点,用MALDI-TOF/TOF串联质谱鉴定每一抗原蛋白质分子.结果 虫卵可溶性蛋白分子经2-DE分离后转印PVDF膜上,与感染兔血清孵育出现29个特异性阳性反应点,与健康兔血清出现3个非特异的阳性反应点；29个特异性抗阳性反应点中,从银染2-DE胶图上找到21个匹配的抗原蛋白质点;MALDI-TOF/TOF质谱鉴定和NCBI数据库检索,13个点(61.9％)获得匹配蛋白质,4个点(19.0％)获得匹配EST,4个点(19.0％)未能从数据库中找到相匹配的信息.重组表达筛选出的SjCHGC06040和SjP40两个抗原蛋白质,Western blot结果显示reSjCHGC06040、reSjP40均能与感染兔血清抗体发生特异性反应,具有潜在的应用价值.结论 2-DE、MALDI-TOF质谱联合Western blot的免疫蛋白质组学研究方法,用于筛选、鉴定SEA中诊断抗原蛋白质,是切实可行的；但该方法存在一定的局限性,有待进一步改进.
