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自杀基因HSV-TK/ACV系统对人脑胶质瘤细胞DNA含量的影响
目的探讨HSV-TK/ACV系统的抗肿瘤机制.方法将新近克隆并构建的含HSV-TK基因的真核表达载体pCR3-TK,用Lipofectamine转染至人脑胶质瘤TJ905细胞中,给予ACV,用FCM检测了对细胞DNA含量的影响.结果转染了TK基因的细胞在ACV的作用下,DNA含量下降(分别为109.43和65.81;而对照组分别为109.28和83.24,细胞DNA的合成被抑制.结论证实了我们克隆的TK基因对人脑胶质瘤的杀伤作用,同时也将HSV-TK/ACV系统的抗肿瘤机制研究推进了一步.
关键词： HSV-TK/ACV 胶质瘤 FCM -
肝癌HSV-tk/ACV基因治疗的实验研究
目的:观察单纯疱疹病毒胸苷激酶基因(HSV-tk基因,自杀基因)与阿昔洛韦(ACV)系统对人肝癌细胞的体外杀伤效果.方法:体外培养已感染含HSV-tk基因的重组逆转录病毒的PA317-tk细胞,获取含HSV-tk基因的重组逆转录病毒颗粒.用后者感染人肝癌细胞株SMMC-7721,G418培养基筛选抗性克降SMMC-7721-tk,并以PCR技术检测HSV-tk基因判断转染成功与否.用形态学方法和MTT法检测ACV对SMMC-7721-tk细胞的杀伤作用.结果:SMMC-7721-tk细胞经PCR证实含PCR-tk基因.形态学观察显示,ACV浓度在0.01～l μg/ml时,SMMC-7721-tk细胞小部分死亡,在浓度自1 μg～1 000 μg/ml时,细胞大部分死亡;HE染色可见细胞凋亡.MTT法测定显示,ACV浓度自1 μg/ml开始即对SMMC-7721-tk细胞产生明显抑制作用,抑制率自49%到78%,作用强度呈ACV浓度依赖性.各种浓度的ACV对SMMC-7721细胞没有或只有轻度抑制作用.结论:HSV-tk/ACV系统体外对肝癌细胞有明显的杀伤作用,有可能成为临床基因治疗方案.
关键词： 肝癌 HSV-TK/ACV 基因治疗 -
旁观者效应在肝癌基因治疗中的作用
目的:观察HSV-tk/ACV(Herpes Simplex Virus thymidine kinase gene/Acyclovir)系统基因治疗恶性肿瘤过程中旁观者效应的作用.方法:HSV-tk基因重组逆转录病毒载体转染PA317细胞为PA317-tk细胞.培养PA317-tk细胞即可获得有感染力的携带HSV-tk基因的病毒颗粒,然后转染肝癌细胞株SMMC-7721细胞为SMMC-tk细胞.SMMC-TK细胞与SMMC-7721细胞以不同百分比混合,用ACV(100ug/ml)培养基培养,MTT法检测ACV对各组细胞抑制率(Inhibit Rate,IR),根据各组IR与该组SMMC-tk细胞数的百分比值(IR/SMMC-tk%,IR/St)的大小判断旁观者效应作用的有无和强弱.结果:旁观效应试验表明,含SMMC-tk细胞10%,20%,30%,40%,50%,60%,70%,80%,90%,100%各组IR/St比值分别为2.15,1.91,1.83,1.47,1.30,1.11,1.02,0.93,0.84,0.76.10%～70%各组IR/St比值均大于1,存在明显旁观者效应,以10%,20%,30%,40%组强,80%～100%三组IR/St比值小于1,旁观者效应不明显.结论:研究结果证实用HSV-tk/ACV系统基因治疗恶性肿瘤,适宜比例TK+细胞时,存在明显的旁观者效应,TK/细胞为10%时旁观者效应强,这对于HSV-TK/ACV系统基因治疗恶性肿瘤具有重要意义.
关键词： 肝癌 HSV-TK/ACV 基因治疗 旁观者效应
