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平目汤含药血清对Graves眼病眼眶脂肪细胞FAS、 FAS L、 CHOP、 CASPASE-4蛋白表达的影响
目的 研究平目汤对Graves眼病眼眶脂肪细胞FAS、FAS L、CHOP、CASPASE-4蛋白表达的影响,探讨眼眶成熟脂肪细胞凋亡的机制.方法 体外培养Graves眼病患者眼眶前脂肪细胞,传代并诱导其分化为成熟脂肪细胞.平目汤含药血清,配成终浓度分别为5％、10％、20％的平目汤低、中、高剂量组.采用MTT法检测前脂肪细胞增殖情况.Western blotting法检测平目汤对眼眶成熟脂肪细胞FAS、FAS L、CHOP及CASPASE-4蛋白表达的影响.结果 ①MTT法检测结果显示,与空白对照组比较,平目汤低、中、高剂量组的生长曲线显著下移,其中平目汤中剂量组活性下降趋势明显.地塞米松组与空白对照组差异无统计学意义(P＞0.05).相同的时间点与空白对照组比较,平目汤各组OD值均减小,其中以平目汤中剂量组降低为明显,差异有统计学意义(P＜0.05).②Western blotting结果显示:与空白对照组比较,除地塞米松组外,各组FAS、FAS L蛋白表达均上调,差异有统计学意义(P＜0.05),其中FAS蛋白表达以平目汤中剂量组高,其次为低剂量组,FAS L蛋白表达以平目汤高剂量组高,其次为中剂量组,但二者比较差异无统计学意义(P＜0.05).与空白对照组比较,除地塞米松组外,平目汤各组CHOP、CASPASE-4蛋白表达均上调,差异有统计学意义(P＜0.05),其中平目汤各组组间比较CHOP蛋白表达以高剂量组高,其次为中剂量组;CASPASE-4蛋白表达以平目汤中剂量组高,其次为低剂量组.结论 平目汤通过死亡受体途径和内质网途径诱导FAS、FAS L、CHOP、CASPASE-4活化,促进成熟脂肪细胞凋亡,进而减少眼眶脂肪细胞积聚,发挥治疗效果.
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Caspase-4活化参与TRAIL诱导的胃癌细胞凋亡
目的：研究caspase-4在肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体( tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand, TRAIL)诱导胃癌细胞凋亡中的作用。方法采用碘化丙啶染色,流式细胞术检测TRAIL和caspase-4抑制剂( z-LEVD-fmk)单独或联合作用对胃癌细胞凋亡的影响；化学合成3条针对caspase-4基因的小干扰RNA( small interfering,siRNA),用脂质体法转染胃癌细胞,采用Western blot验证沉默效果,流式细胞术观察转染后对 TRAIL 诱导胃癌细胞凋亡的影响；Western blot检测TRAIL作用后葡萄糖调节蛋白78(78-ku glucose-regulated protein,GRP78)的表达情况,以内质网应激经典诱导剂衣霉素( tunicamycin,TM)为参照；Western blot检测TRAIL作用后caspase-3和caspase-4蛋白的表达情况。结果 z-LEVD-fmk能明显地抑制TRAIL诱导的胃癌细胞凋亡( P<0．05)；与阴性对照相比,转染 caspase-4 siRNA 后caspase-4蛋白表达水平明显下降,且转染后细胞凋亡率降低(P<0．05)；和TM相比,TRAIL能诱导较低程度的内质网应激反应；在 TRAIL 处理的早期 caspase-4和 caspase-3即活化。结论 Caspase-4的活化参与了TRAIL诱导的胃癌细胞凋亡,这可能与TRAIL诱导的内质网应激有关。
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AAVC－Ⅰ对人口腔鳞癌Tca8113细胞GRP78和Caspase－4基因表达的影响
目的：研究不同浓度的AAVC－Ⅰ对人口腔鳞癌Tca8113细胞GRP78、Caspase－4基因表达的影响。方法：设置正常对照组和AAVC－Ⅰ实验组，Trizol试剂提取各组总RNA，运用RT－PCR法扩增内参基因β－actin及目的基因GRP78、Caspase－4片段，ChemiDoc XRS凝胶成像系统观察电泳结果并采用QuantityOne软件测定目的条带灰度值。结果：正常对照组、实验组均扩增出GRP78、Caspase－4目的条带，且随AAVC－Ⅰ浓度增大GRP78、Caspase－4表达增加。结论：高浓度AAVC－Ⅰ可上调GRP78、Caspase－4基因的表达，因此AAVC－Ⅰ可能诱导人口腔鳞癌Tca8113细胞发生了内质网应激。
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益气除痰方对肺癌A549移植瘤细胞凋亡途径Caspase-4及DNA-PK的影响
目的:探讨益气除痰方是否通过内质网UPR介导的细胞凋亡途径发挥抗肿瘤作用.方法:建立40只肺癌A549裸鼠皮下移植瘤模型,于接种第7天将小鼠随机分为模型组(生理盐水组)、顺铂注射液组(0.002 g/kg)、益气除痰方(3.0 g/kg)+顺铂注射液(0.002 g/kg)组及益气除痰方低、高剂量组(3.0、6.0 g/kg),每组8只.中药灌胃给药,1次/d,连用21d.顺铂注射液腹腔注射,1次/d,连用7d.干预第22天,处死所有小鼠,测量瘤体质量、体积,采用免疫组化及Western blot法检测肿瘤组织中Caspase-4、DNA-PK的表达.结果:与模型组比较,益气除痰方各剂量组及益气除痰方+顺铂注射液组肿瘤体积、肿瘤质量显著降低,肿瘤组织中Caspase-4、DNA-PK表达均显著升高(P＜0.01);益气除痰方+顺铂注射液组效果优于顺铂注射液组(P＜0.05).结论:益气除痰方对小鼠A549肺癌有一定抑制作用,其机制可能与通过升高Caspase-4、DNA-PK蛋白的表达介导细胞凋亡途径有关.
