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腺病毒介导HCN2基因转染对人脂肪干细胞生物学特性的影响
目的:研究腺病毒介导的HCN2基因(Ad.HCN2)转染对人脂肪干细胞(ADSCs)生物学特性的影响.方法:取人脂肪组织分离得到脂肪干细胞并进行体外培养,腺病毒绿色荧光蛋白转染测定佳感染倍数(MOI)值,Ad.HCN2转染后测量HCN2表达情况,并检测转染后细胞生物学特性的变化.结果:MOI=50为佳MOI,Ad.HCN2转染后,ADSCs可表达HCN2,且其细胞活力、细胞周期、生长曲线、表面标志及诱导分化能力无明显变化.结论:ADSCs被Ad.HCN2转染后可表达目的基因HCN2,并可保持其生物学特性.
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质粒shRNA体内干扰Klotho基因对窦房结通道基因的影响
通过质粒shRNA体内干扰,研究Klotho基因与窦房结起搏通道相关基因HCN4及HCN2之间的关系,为病窦综合征的研究提供新思路.取C57BL/6J小鼠20只,分为4组,每组5只,分别为:质粒shRNA 24 h组、质粒shRNA 12 h组、生理盐水24 h组、生理盐水12h组.质粒shRNA组经尾静脉注射质粒shRNA 50 μL(1 μg质粒/μL),生理盐水组经尾静脉注射生理盐水50 μL.分别于注射12h及24 h后取窦房结周围组织,行RT-PCR检测各组小鼠的Klotho、HCN2、HCN4基因的mRNA水平.RT-PCR结果显示:与生理盐水12h组比较,shRNA 12 h组的klotho、HCN4和HCN2的mRNA表达量明显降低,均有统计学差异(P<0.05).以上结果提示,小鼠Klotho基因和窦房结起搏基因可能存在一定关系.