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去泛素化酶UCHL1促进乳腺癌化疗耐药作用与机制研究
本研究探讨去泛素化酶UCHL1通过影响肿瘤细胞主动外排药物和乳腺癌肿瘤干细胞(breast cancer stem cell,BCSC)调控乳腺癌化疗耐药的作用及机制.比较肿瘤细胞MCF-7及其阿霉素耐药株MCF-7/ADM的UCHL1表达差异,以抑制剂LDN57444干预MCF-7/ADM的UCHL1功能,检测MCF-7/ADM的半数抑制浓度,流式细胞术检测ADM在细胞内的积聚和CD44+ CD24-BCSC比例,微球体形成实验观察BCSC干性,real-time PCR和western blotting检测药泵蛋白和干细胞相关基因的表达.结果显示,MCF-7/ADM高表达UCHL1,抑制UCHL1后MCF-7/ADM的半数抑制浓度显著下降,药泵蛋白P-gp和MRP1表达下调且药物在细胞内的聚积增加,MCF-7/ADM中CD44+ CD24-BCSC比例、微球体形成能力及干细胞相关基因表达均显著下降.以上结果说明UCHL1可促进乳腺癌细胞耐药性形成,主要通过改变药泵蛋白介导的经典耐药机制实现,并与促进BCSC干性密切相关.
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UCHL1基因缺失突变A549肿瘤细胞单克隆株的建立与特性分析
本研究旨在探索泛素羧基末端水解酶L1 (ubiquitin C-terminal hydrolase-L1,UCHLl)对非小细胞肺癌细胞系A549细胞的作用.用CRISPR-CAS9基因编辑技术构建UCHL1基因敲除的A549细胞株,用RT-PCR和Western blot检测A549细胞中UCHL1基因敲除情况,用CCK-8检测细胞增殖能力的变化,用流式细胞仪检测细胞周期的变化,用CCK-8检测A549细胞对顺铂药物敏感性的改变,用划痕与Transwell实验检测A549细胞迁移能力的变化,用Western blot检测与A549细胞迁移有关的蛋白表达变化.结果显示,使用CRISPR-CAS9技术构建的基因移码突变导致A549细胞株UCHL1 mRNA和蛋白缺失,UCHL1基因功能缺失后A549细胞增殖和各细胞周期比例没有明显变化,但对顺铂的药物敏感性降低,迁移能力下降,Erk 1/2蛋白磷酸化水平升高.以上结果提示,UCHL1基因功能缺失可导致A549细胞顺铂耐药性提高,细胞迁移能力降低,其机制可能涉及Erk1/2信号通路的激活.
关键词： UCHL1 CRISPR-Cas9 非小细胞肺癌 耐药性 迁移 -
Uchl1及其关联蛋白参与小鼠实验性隐睾中精母细胞凋亡
以往研究显示Uchl1参与调节生理状况下小鼠精母细胞的凋亡.本文以小鼠实验性单侧隐睾为研究模型,以切除单侧睾丸和假手术作为对照,用苏木精-伊红(HE)染色和DNA末端标记(TUNEL)观察生精细胞的形态和凋亡情况;用免疫组化分析Uchl1及其相关蛋白Jab1和p27kiP1在隐睾症的热应激反应导致精母细胞损失过程中的变化情况,并用亲和分析(pull-down)和免疫荧光共定位检测三种蛋白在精母细胞的关联性.结果显示,Jab1和p27kip1,与Uch1平行,在具凋亡形态的精母细胞中响应热应激而含量增加,而在多核巨细胞中无类似变化.Jab1可以与睾丸蛋白提取物中Uchl1结合,并与Uchl1和p27kip1特异性地在具凋亡形态的精母细胞中共定位.以上结果提示,Uchl1蛋白的积累参与隐睾中热应激诱导的生精细胞凋亡过程,但不影响接下来的多核巨细胞的形成,且Uchl1蛋白的作用机制涉及Jab1和p27kip1参与的一种新途径.
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运用双向电泳技术探索恶性胸膜间皮瘤潜在的肿瘤标志物研究
目的：利用双向凝胶电泳技术通过对恶性胸膜间皮瘤细胞株 H2052和肺腺癌细胞株 PC9胞浆内蛋白质进行差异蛋白质组学分析，为恶性胸膜间皮瘤与肺腺癌的鉴别诊断提供候选肿瘤标志物。方法利用双向凝胶电泳技术和基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱仪（MALDI-TOF-MS）技术筛选鉴定出恶性胸膜间皮瘤细胞株 H2052和肺腺癌细胞株 PC9胞浆内的差异蛋白质，再运用免疫组化染色方法验证被标识的差异蛋白质在12例恶性胸膜间皮瘤组织标本及19例低分化腺癌组织标本的表达情况。结果运用蛋白质组学技术标识并筛选出15种差异蛋白，经过免疫组化染色方法验证，结果有3种蛋白质在恶性胸膜间皮瘤中高表达且有统计学意义。结论 Rab GDP Dissociation Inhibitorβ、Septin11、UCHL1可能成为鉴别恶性胸膜间皮瘤与低分化肺腺癌细胞的新的靶点，它们在间皮瘤细胞分化、增殖中起到关键的作用，进一步的研究可能为将来的靶向治疗提供新的靶点。
