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HBsAg联合rhIL-12对慢性乙型肝炎患者PBMC诱生IFN-γ的作用
目的 确认重组人白细胞介素12(rhIL-12)联合乙型肝炎表面抗原(HBsAg)可增强慢性乙型肝炎患者外周血单个核细胞(PBMC)对HBsAg产生特异性细胞免疫应答,探讨rhIL-12联合HBsAg作为治疗型乙型肝炎疫苗的应用前景.方法 取8名正常人和16例慢性乙型肝炎患者的PBMC,分别用不同浓度的HBsAg、rhIL-12单独体外刺激,再用HBsAg联合rhIL-12(0.01、0.1和1.0 ng/mL)刺激患者PBMC,72 h后用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定培养上清中的γ干扰素(IFN-γ).结果 HBsAg或rhIL-12单独刺激仅产生低水平的IFN-γ,联合使用HBsAg和rhIL-12刺激后,患者PBMC产生的IFN-γ平均水平显著高于单独使用HBsAg或rhIL-12(P均＜0.05).HBsAg(0.5 μg/mL)联合rhIL-12(0.01、0.1和1.0 mg/mL)刺激患者PBMC产生的IFN-γ与rhIL-12的浓度之间呈明显的量效关系.结论HBsAg和rhIL-12联合刺激乙型肝炎患者PBMC,通过产生高水平IFN-γ激活乙型肝炎患者特异性细胞免疫.
关键词： 乙型肝炎表面抗原 重组人白细胞介素12 外周血单个核细胞 细胞免疫 γ干扰素 -
重组人白细胞介素12对健康人外周血单个核细胞产生γ干扰素影响的研究
目的 建立重组人白细胞介素12(rhIL-12)的生物活性检测方法 ,观察rhIL-12诱导健康人外周血单个核细胞(PBMC)产生γ干扰素(IFN-γ)的水平与剂量和时间之间的关系,揭示其变化规律.方法 rhIL-12供试品刺激健康人PBMC分泌IFN-γ,经国际标准品校正,建立rhIL-12生物活性测定方法 .以1 ng/mL浓度rhIL-12诱导健康人PBMC,分别于24、48、72、96和120 h 5个时间点用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定培养上清的IFN-γ水平.测定0.1、0.5和2.5 ng/mL 3个浓度rhIL-12诱导人PBMC 72 h后培养上清的IFN-γ水平, 用Prism 5.0统计软件的重复测量方差分析法对所得数据进行统计学处理.结果 rhIL-12供试品的生物活性曲线呈典型S型,IFN-γ含量为大浓度一半时的供试品浓度(ED50)为(1.008±0.238) ng/mL,供试品rhIL-12效价为7 938 IU/mL.测定1 ng/mL浓度rhIL-12刺激健康人PBMC后5个时间点培养上清中IFN-γ显示,不同个体高峰出现时间有所不同,在高峰出现前均呈现递增趋势.高、中、低3个浓度rhIL-12分别诱导健康人PBMC产生的IFN-γ水平与浓度之间呈显著量效关系,且在 0.1 ng/mL的极低浓度即可诱生高水平IFN-γ.结论 rhIL-12供试品生物活性良好,与国际标准品比对基本一致,不同人群对rhIL-12的应答高峰存在个体差异,以诱生IFN-γ作为评价rhIL-12生物活性的指标具有明显的量效关系.
关键词： 重组人白细胞介素12 γ干扰素 细胞免疫 -
rhIL-12联合HBsAg刺激健康人外周血单核细胞对IL-12R的影响
目的 确认重组人白细胞介素12(rhIL-12)联合乙型肝炎表面抗原(HBsAg)可增强健康人外周血单核细胞(PBMC)产生特异性细胞免疫应答,并分析其细胞来源,及对IL-12R的影响,探讨hIL-12联合HBsAg作为治疗型乙型肝炎疫苗的应用前景.方法 8名健康人PBMC分别与rhIL-12(1 ng/mL)、rHBsAg(500 ng/mL)和rhIL-12(1ng/mL)+ rHBsAg(500 ng/mL)体外孵育,采用流式细胞术检测CD4+ IFN-γ(γ-干扰素)+T细胞、CD8 +IFN-γ+T细胞及CD56+ IFN-γ+ NK细胞百分比,并测定表达IL-12Rβ1、IL-12RB2的细胞百分比.结果 rhIL-12与rHBsAg联合组CD8+ IFN-γ+T细胞及CD56+ IFN-γ+ NK细胞百分比均较对照组明显升高,且有非常显著差异(P＜0.01),联合组CD8+ IL-12Rβ1和CD56+ IL-12Rβ1与单用rhIL-12或rHBsAg组比较均显著升高.结论 提示rhIL-12联合rHBsAg诱生的IFN-γ主要来自CD56+ NK细胞、CD8+T细胞,其次是CD4+T细胞;rhIL-12和rHBsAg单独均能上调健康人PBMCs表面IL-12R的表达,rhIL-12与rHBsAg联合具有增强作用.
关键词： 乙型肝炎表面抗原 重组人白细胞介素12 外周血单个核细胞 γ干扰素 IL-12R -
重组人白细胞介素12的纯化与鉴定
目的 探索重组人白细胞介素12(rhIL-12)的纯化与鉴定方法.方法 采用Millipore超滤浓缩系统对含rhIL-12的无血清培养上清进行浓缩,用阴离子交换色谱柱,阳离子交换色谱柱和尺寸排阻色谱柱纯化出rhIL-12;并对rhIL-12的纯度、活性及氨基酸序列进行检测.结果 纯化后产物经Western blot鉴定(P35、P40)为rhIL-12,毛细管电泳法测得其纯度在98%以上;生物学活性达8.0×106IU/mg,且氨基酸序列与已报道的序列相一致.结论 建立了获得高纯度、高生物活性的rhIL-12的纯化与鉴定方法.
关键词： 重组人白细胞介素12 纯化 鉴定 -
正交试验优化注射用重组人白细胞介素12处方
目的:优化注射用重组人白细胞介素12的处方.方法:采用正交试验设计,以甘露醇含量(A)、人血白蛋白含量(B)和pH值(C)为因素,活性、水分和外观的综合评分为指标优化处方,制备3批优化处方制剂并测定其活性、水分、pH值等.结果:优化处方为A4％、B0.5％、C7.4;3批制剂冻干后活性约为8400、8111、8511u·μg-1,水分＜3％,pH值约为7.35～7.42,均符合质量标准要求(批间比较P＞0.05).结论:以优化处方制备的注射用重组人白细胞介素12活性较高,工艺重现性好.
关键词： 重组人白细胞介素12 处方 正交试验 活性
