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巢式PCR扩增SSU rRNA基因确诊1例三日疟原虫感染
目的 通过巢式PCR扩增18SSU rRNA基因片段确诊三日疟原虫的感染,减少三日疟的漏诊和误诊.方法 采用18SSU rRNA基因片段,通过巢式PCR方法,用镜检确诊的间日疟和恶性疟滤纸血样本进行对照,检测1例可疑疟疾患者滤纸血样本.结果 通过种间特异性引物的巢式PCR扩增后,间日疟及恶性疟确诊样本均扩增出相应的120 bp和205 bp特异性条带；可疑疟疾患者样本仅在用三日疟原虫特异性作引物时扩增出相应144 bp条带的产物,证实患者感染三日疟原虫；用卵形疟原虫特异性引物扩增时,所有样品均未有条带.结论 通过18SSU rRNA基因片段种间特异引物扩增,证实该患者为三日疟原虫感染.
关键词： 三日疟原虫 小亚单位核糖体核糖核酸 输入性疟疾 -
巢式PCR技术在输入性卵形疟诊断中的应用研究
目的 应用巢式PCR扩增小亚单位核糖体核糖核酸(18S rRNA)基因确诊卵形疟原虫感染. 方法 采集2012-2013年山东省疟疾患者全血和滤纸血样,吉氏染色镜检观察血膜疟原虫形态并鉴定虫种.提取血样中DNA,根据疟原虫18S rRNA基因以属和种特异性引物进行巢式PCR扩增,筛查卵形疟阳性标本并进行测序验证. 结果 2012和2013年山东省共筛查到7例输入性卵形疟原虫感染病例.巢式PCR扩增7份血样均在800 bp处出现卵形疟原虫特异性单一条带,Blast比对表明产物序列与GenBank卵形疟参考序列一致. 结论 经巢式PCR方法确诊了2012和2013年山东省7例输入性卵形疟病例.
关键词： 卵形疟原虫 小亚单位核糖体核糖核酸 巢式PCR 输入性疟疾 -
巢式PCR法在疟疾检测及虫种鉴别中的应用
根据疟原虫小亚单位核糖体核糖核酸(SSU rRNA)基因序列设计疟原虫通用型和种特异性的引物,对60份血样进行巢式PCR检测及虫种鉴定,并与血样的吉氏染色镜检结果进行比较.巢式PCR检出40份疟原虫阳性血样,其中22份为恶性疟原虫(Plasmodium falciparum)阳性、13份为间日疟原虫(P.vivax)阳性、3份为恶性疟原虫和间日疟原虫混合感染、1份为卵形疟原虫阳性(P.ovale)、1份未能分型.与镜检结果一致的血样为46份,占76.7％ (46/60),其中恶性疟原虫阳性18份、间日疟原虫阳性11份和阴性17份.将两种检测结果不一致的血样进行扩增片段序列测定和实时荧光PCR分析,检测结果均与巢式PCR结果一致.卵形疟原虫阳性血样扩增片段的序列分析结果显示,该序列与卵形疟原虫SSU rRNA基因序列(GenBank登录号DQ845247)的对应部分同源性为100％,证实该病例为输入性卵形疟原虫感染病例.
关键词： 疟疾 巢式PCR 小亚单位核糖体核糖核酸 -
间日疟原虫荧光定量聚合酶链反应检测方法的建立
目的建立间日疟原虫荧光定量聚合酶链式反应(FQ-PCR)检测方法,为快速、准确定量检测间日疟原虫奠定基础.方法根据间日疟原虫SSURNA基因序列,设计并合成引物和荧光标记探针,将PCR扩增的间日疟原虫SSURNA基因片段克隆入载体,对重组质粒进行筛选、鉴定后,作为阳性模板,用于标准曲线的判定和样品检测.结果应用重组质粒制作的定量曲线,循环阈值与模板浓度具有良好的线形关系,127份疟区血样和30份正常血样的检测,显示此法有较高的灵敏度和特异度,定量检测结果与镜检感染率呈直线相关,相关系数为0.959.结论建立了间日疟原虫的荧光定量PCR检测方法.
关键词： 荧光定量PCR 间日疟原虫 小亚单位核糖体核糖核酸 -
疟疾的实时荧光PCR快速检测方法
目的:建立疟疾的实时荧光PCR检测方法并用于疟疾的快速检测.方法:设计了疟原虫通用型实时荧光PCR检测的引物和探针,建立了疟疾的实时荧光PCR检测方法.对40份疟疾镜检阳性样本和20份镜检阴性样本进行实时荧光PCR检测,并和巢式PCR方法检测结果进行了比较.结果:疟疾实时荧光PCR检测速度快,20分钟即可完成.40份镜检阳性样本的荧光PCR检测均为阳性,2份样本的巢式PCR结果为阴性;20份镜检阴性样本中有3份样本为实时荧光PCR阳性,其余17份样本为实时荧光PCR阴性,与疟疾巢式PCR检测结果相同.结论:该实时荧光PCR方法检测速度快,特异性强,准确性高,阳性率高,不易漏检,适用于疟疾的快速检验,这对防止该病在国境口岸的传入提供了技术依据.
关键词： 疟疾 小亚单位核糖体核糖核酸 实时荧光PCR 巢式PCR
