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河南省输入性卵形疟的实验室检测分析
目的 对河南省输入性卵形疟进行实验室检测,比较不同方法的检测效果. 方法 采用镜检法、2种巢式PCR和2种疟原虫抗原快速检测试剂盒,对河南省2011-2016年采集的输入性卵形疟患者血样进行检测,比较不同方法的检出率. 结果 110例卵形疟中curtisi亚种感染43例,占39.1％;wallikeri亚种感染67例,占60.9％.5种检测方法对卵形疟的总检出率,M-nest检测体系的巢式PCR法为100％,镜检法为94.5％,RDT-Wondfo法为51.8％,NP-1993检测体系的巢式PCR法为40.9％,RDT-CareStart法为25.5％,差异有统计学意义(x2=205.940,P＜0.05);对于卵性疟curtisi亚种,M-nest检测体系的巢式PCR法的检出率为100％,NP-1993检测体系的巢式PCR法为97.7％,镜检法为90.7％,RDT-Wondfo法为46.5％,RDT-CareStart法为18.6％,差异有统计学意义(x2=109.700,P＜0.05);对于卵性疟wallikeri亚种,M-nest检测体系的巢式PCR法检出率为100％,镜检法为97.0％,RDT-Wondfo法为55.2％,RDT-CareStart法为29.9％,NP-1993检测体系的巢式PCR法为4.5％,差异有统计学意义(x2=190.292,P＜0.05).结论 巢式PCR方法检测卵形疟敏感性高,但NP-1993检测体系的巢式PCR方法仅对卵形疟curtisi亚种敏感;镜检法次之;抗原检测的RDT方法敏感性低,且不同试剂盒的检出率不同.
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疟疾与青蒿
疟疾,是一种由疟原虫引起的寄生虫病,通过蚊子叮咬而传染.人体疟原虫有四种,即间日疟原虫、三日疟原虫、恶性疟原虫和卵形疟原虫(较少见)等.疟疾发作时患者突然发生寒战,继以高热,数小时后汗出热退;随着各种疟原虫在人体内生长繁殖所特有的周期性,一般间日疟每两日发作一次,三日疟每三日发作一次,恶性疟的发作往往不规则,且可引起凶险的脑型疟疾.其长期多次发作后,患者可出现贫血和脾肿大.
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疟疾
1 西医诊断标准参照<中药新药临床研究指导原则>(试行).有疟区居留史或近期内有输血史,出现周期性发冷、发热、出汗、贫血等症状,血检发现疟原虫无性体即可确诊.而以血检发现疟原虫无性体或原虫DNA-PCR阳性作为确诊疟疾可靠的指标(根据血检疟原虫的形态、结构等特点或PCR检查结果,可将人类疟原虫分为恶性疟原虫、间日疟原虫、三日疟原虫和卵形疟原虫).
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三例输入性卵形疟的实验室诊断
目的：分析3例输入性疟疾的实验室诊断，减少卵形疟的误诊与漏诊。方法采用形态学检查、巢氏聚合酶链反应（PCR）及序列分析等方法确诊3例输入性疟疾病例。结果3例患者形态学检查结果分别是未检出疟原虫（实验室初次检查）、检出卵形与恶性疟原虫和检出卵形疟原虫；巢氏PCR检测结果依次是卵形疟原虫感染、卵形与恶性疟原虫混合感染和卵形与间日疟原虫混合感染。结论需加强疟疾消除地区疟原虫形态学检查技术的培训和推广。应用分子生物学检查技术可减少输入性卵形疟的误诊与漏诊。
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2011-2013全国输入性三日疟与卵形疟疫情分析
目的 分析我国输入性三日疟与卵形疟发病趋势和病例分布特征,为消除疟疾提供依据. 方法 利用中国疾病预防控制中心疾病监测信息报告管理系统(网络直报系统),收集2011-2013年全国三日疟及卵形疟疫情数据资料,应用SAS 9.2和ArgGIS 10.0软件就病例增长趋势和分布特征进行分析. 结果 我国2011-2013年共报告三日疟病例97例,卵形疟病例174例,均为输入性病例.其中,三日疟病例各年分别报告17例、22例和58例,分布于我国的7个、8个和14个省份;卵形疟病例各报告15例、34例和125例,分布于2个、10个和18个省份.自非洲输入的三日疟和卵形疟为240例(88.56％),其中自西非与中非输入共219例(80.81％);自东南亚输入16例(5.90％). 结论 我国输入性三日疟与卵形疟病例呈逐年上升趋势,各地应加强鉴别诊断和防治.
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应用巢式PCR评价低流行区疟疾诊断结果
目的 初步评价大连市疾控人员对疟疾的诊断能力,为低流行区疟疾诊断方法的选择提供理论依据. 方法 收集2010-2012年大连市上报的27例疟疾阳性病例的血液样本,应用巢式PCR(nest-PCR)方法对诊断结果进行复核;以复核结果为标准,比较镜检和快速诊断试剂盒(rapid diagnosistest,RDT)方法的检测敏感性及对虫种鉴定的正确率. 结果 27份样本的巢式PCR结果为恶性疟23份,间日疟2份,卵形疟1份,阴性1份,无混合感染.镜检对阳性样本的敏感度为76.9％(20/26),远低于RDT方法的96.2％(25/26);镜检和RDT联合使用,敏感度可达100％.对虫种的鉴别,镜检对阳性样本的正确检测率为50％(13/26);RDT方法仅能鉴别恶性疟和非恶性疟,对恶性疟阳性样本的正确检测率为100％(23/23). 结论 采用镜检和RDT联合应用的方法,能够提高检测的敏感性.建议在有条件的疾控单位建立人体疟原虫的分子检测体系,更有效地防止对疟疾病例的漏诊和误诊.
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输入性卵形疟原虫细胞色素b、细胞色素c氧化酶Ⅰ和乳酸脱氢酶基因单核苷酸多态性分析
目的 对卵形疟原虫(Plasmodium ovale)curtisi亚种和wallikeri亚种编码的细胞色素b(cytochrome b,Cytb),细胞色素c氧化酶Ⅰ(cytochrome c oxidase Ⅰ,Cox Ⅰ)和乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)基因的单核苷酸多态性进行分析. 方法 选择浙江省疟疾诊断参比实验室2011-2014年确诊的卵形疟原虫感染患者血样,提取卵形疟原虫DNA,巢式PCR扩增卵形疟原虫Cytb、Cox Ⅰ和LDH基因的部分片段,对扩增产物进行双向测序.测序序列经校对、拼接后,应用MEGA软件对测序序列和相应的氨基酸序列进行比对,分析单核苷酸多态性位点以及氨基酸突变位点. 结果 19例卵形疟原虫感染者(其中curtisi亚种11例,wallikeri亚种8例)均为赴非洲返国人员.PCR扩增Cytb、Cox Ⅰ和LDH基因的产物长度分别为735、1 323和355 bp.curtisi和wallikeri两个亚种在Cytb、Cox Ⅰ和LDH基因分别发现10、13、13个单核苷酸二态性位点,且大多数的二态性位点属于同义突变.此外,两个亚种内部也存在核苷酸多态性,同时发现1例血样的Cox Ⅰ基因存在693个碱基的缺失. 结论 对卵形疟患者血样的Cytb、Cox Ⅰ和LDH基因进行了单核苷酸多态性分析,丰富了卵形疟原虫基因多态性信息.
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巢式PCR技术在输入性卵形疟诊断中的应用研究
目的 应用巢式PCR扩增小亚单位核糖体核糖核酸(18S rRNA)基因确诊卵形疟原虫感染. 方法 采集2012-2013年山东省疟疾患者全血和滤纸血样,吉氏染色镜检观察血膜疟原虫形态并鉴定虫种.提取血样中DNA,根据疟原虫18S rRNA基因以属和种特异性引物进行巢式PCR扩增,筛查卵形疟阳性标本并进行测序验证. 结果 2012和2013年山东省共筛查到7例输入性卵形疟原虫感染病例.巢式PCR扩增7份血样均在800 bp处出现卵形疟原虫特异性单一条带,Blast比对表明产物序列与GenBank卵形疟参考序列一致. 结论 经巢式PCR方法确诊了2012和2013年山东省7例输入性卵形疟病例.
关键词： 卵形疟原虫 小亚单位核糖体核糖核酸 巢式PCR 输入性疟疾 -
浙江省5例输入性卵形疟原虫wallikeri亚种感染病例的鉴定
目的 对浙江省5例镜检阳性、常规巢式PCR检测阴性的输入性疟疾病例进行卵形疟原虫wallikeri亚种(Plasmodium ovale wallikeri)的鉴定与分析.方法 收集5例待检病例的流行病学资料和血样,进行镜检、快速疟疾诊断试纸条检测(RDT)和巢式PCR检测(采用疟原虫属特异性引物、种特异性引物和卵形疟原虫wallikeri亚种特异性引物),将PCR扩增片段测序后,与GenBank中相关序列进行Blast比对分析.结果 5例疟疾病例均为自非洲归国人员,并有疟疾发病史.镜检结果显示,5例患者均疟原虫阳性.RDT检测结果为泛疟原虫阳性2例,阴性3例.应用常规巢式PCR检测5份血样DNA,4种疟原虫均为阴性.改用卵形疟原虫wallikeri亚种特异性引物进行扩增,结果均为阳性.将5份血样的阳性扩增产物进行测序,所得序列经Blast分析,与GenBank中编号为KF219561.1的卵形疟原虫wallikeri亚种clone RSH10 18S核糖体RNA基因的序列一致性均达100％.结论 综合镜检和PCR检测结果,证实该5例镜检疟原虫阳性、常规PCR检测阴性的病例均为卵形疟原虫wallikeri亚种感染.
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广东口岸首例输入性卵形疟病例的诊断分析
广东发现首例输入性卵形疟病例,该患者在缅甸务工1周,回国入境时有发热等症状.right VIEW疟疾快速胶体金检测卡检测为弱阳性;采血制备厚、薄血片镜检,并提取血样DNA,实时荧光PCR检测间日疟原虫、卵形疟原虫和三日疟原虫感染情况,检测结果为卵形疟原虫阳性.给予蒿甲醚抗疟治疗,该患者症状好转.
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疟疾巢式PCR检测方法的优化应用
目的 结合疟疾检测工作实际,对疟疾基因检测的巢式PCR方法进行优化应用,以提高疟疾检测效率.方法通过采用PCR预混液、内引物一步扩增、重新设计针对卵形疟多个亚种的新引物,在疟疾巢式PCR的基础对反应体系、反应条件和卵形疟原虫特异性引物进行优化.对优化后的方法进行特异性和敏感性分析,并用巢式PCR和优化后的方法同时对疟疾阳性血样和疟疾送检血样进行检测,对检测结果进行比较分析.结果优化后的方法特异性较好,敏感性可达pg至fg级.两种方法同时检测疟疾阳性血样的结果表明,优化后的方法PCR扩增产物的产量无明显变化,非特异性扩增明显减少,卵形疟不同亚种的检出率提高,总体特异性提高.对111份疟疾送检血样的实测结果表明,巢式PCR的敏感性和虫种特异性分别为94.57％和86.96％,优化后方法的敏感性和虫种特异性均为93.48％,两种方法敏感性差异无统计学意义(P>0.05),但优化后的方法特异性明显提高(P<0.05).结论优化后的PCR检测在保持常规巢式PCR方法敏感性的基础上提高了特异性,同时因其实验环节减少而节省了检测成本、提高了检测效率.
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万孚疟原虫检测试剂盒检测卵形疟原虫效果评价及影响因素分析
目的 评价万孚疟原虫检测试剂盒(Pf-LDH/Pan-pLDH)对卵形疟原虫的检测效果,并分析原虫密度、疟原虫乳酸脱氢酶(pLDH)浓度和基因多态性等因素对检测结果的影响.方法 按照万孚疟原虫检测试剂盒的操作说明书,对经PCR确认的100份卵形疟患者血样进行检测.采用显微镜镜检法计数患者血片的原虫密度,以ELISA法检测血样中的pLDH浓度,以PCR扩增卵形疟原虫LDH(Po-LDH)基因并测序,并分析上述3个因素对检出率的影响.结果 万孚疟原虫检测试剂盒对上述100份卵形疟患者血样的总体检出率为70.0％ (70/100).当原虫密度≤500个/μl时,检出率为27.3％;原虫密度＞ 500个/μl时,检出率为75.0％～ 75.4％.当pLDH浓度较低时(A值≤0.100),检出率为6.7％;pLDH达到一定浓度时(A值＞ 0.100),检出率为95.1％～ 100％.Po-LDH基因序列分析结果显示所有卵形疟样本可分为2种亚型,分别为卵形疟原虫curtisi亚种(P.o.curtisi)和卵形疟原虫wallikeri亚种(P.o.wallikeri).2种亚型的LDH基因同源性为97％,共有24个单核苷酸多态性(SNP),其中3个SNPs为非同义突变,其余均为同义突变.2种亚型的LDH编码氨基酸序列同源性为99％,共有3个氨基酸的差异.万孚疟原虫检测试剂盒对P.o.curtisi的检出率为73.1％(38/52),对P.o.wallikeri拘检出率为66.7％(32/48),两者差异无统计学意义(P＞0.05).结论 万孚疟原虫检测试剂盒对卵形疟原虫的检测效果优于大部分同类产品,其检出率与原虫密度、pLDH浓度关系密切,与pLDH基因多态性无关.
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西湖区首例输入性卵形疟病例诊疗分析
目的：分析杭州市西湖区首例输入性卵形疟病例诊疗过程。方法收集病例资料和流行病学资料，采集患者抗凝血样，结合镜检和巢式 PCR 检测结果确诊后规范治疗。结果该患者曾在非洲尼日利亚务工6年，有疟疾发作史，回国后30 d 出现发热等症状，经外周血涂片镜检和 PCR 检测诊断为卵形疟，随后给予磷酸氯喹片3 d 加磷酸伯氨喹片8 d 疗法治疗后，患者痊愈。结论根据镜检和 PCR 检测结果，确诊该病例为卵形疟原虫感染。
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福建省3例输入性卵形疟的实验诊断分析
目的 随着输入性疟疾的增加,通过镜检结合PCR方法,提高检出率.方法 福建省2013年成立基因诊断参比实验室,用PCR方法回顾性筛查过往病例时发现有3例卵形疟原虫误诊为间日疟.结果 镜检结合PCR扩增和序列分析发现F J1、F J2为卵形疟亚种curtisi和恶性疟混合感染,FJ3为单一卵形疟亚种curtisi感染.结论 福建省以往卵形疟报道很少,需要加强诊断培训,镜检结合PCR检查提高检出率.
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武汉市两种输入性卵形疟巢式PCR检测
目的 了解巢式PCR鉴别卵形疟curtisi及变种wallikeri效果.方法 收集武汉市2008-2015年疟疾患者血样和流行病学资料.提取患者血样中的疟原虫DNA,进行巢式PCR检测.结果 采用巢式PCR检测疟疾患者282例,其中恶性疟原虫206例、间日疟原虫62例、三日疟原虫6例、卵形疟原虫19例.巢式PCR结果显示,卵形疟原虫经典型curtisi和变种型wallikeri分别扩增出800 bp和780 bp目的条带.2012-2015年卵形疟占当年疟疾患者分别为4.1％(2/49)、12.2％(9/74)、8.2％(4/49)、11.4％ (4/35),卵形疟总数占全部病例的6.74％,其中,经典型curtisi 14例,变种型wallikeri3例,混合感染2例,变种型wallikeri检出率占卵形疟26.3％.19例卯形疟病例全部为男性,感染输入地主要分布在撒哈拉沙漠以南地区,2例卵形疟混合感染分别来自安哥拉和尼日利亚.其中有2例卵形疟原虫curtisi型镜检结果分别为间日疟和恶性疟,1例血片重新复核后为卵形疟,另1例巢式PCR检测为间日疟和卵形疟混合感染型.结论 分子生物学技术可以减少卵形疟误诊的情况;加强卵形疟curtisi及变种wallikeri的巢式PCR检测,避免误诊.
关键词： 疟疾 卵形疟原虫 wallikeri变种 巢式PCR -
湖北省市(州)级疟疾实验室检测能力分析
目的 湖北省级疟疾参比实验室对各市(州)级疟疾实验室所送血涂片和滤纸血进行复核检测,评估全省各市(州)级疟疾实验室的检测能力.方法 湖北省级疟疾参比实验室收集2015-2017年全省疟疾病例和疑似疟疾病例样品,采用镜检法和巢氏PCR进行复核检测,以省级疟疾参比实验室确诊结果为标准,对市(州)级输入性疟疾实验室检测能力进行评估.结果 2015-2017年,全省16个市(州)送检相对完整样本400份,其中武汉市送样量多(占32.50％).省级疟疾参比实验室对400份样品进行复核检测,确诊疟疾阳性样品374份,阴性样品26份.16个市(州)级疟疾实验室检测完成率均为100％,将市(州)级各虫种鉴定和阴性检测结果占比与省级疟疾参比实验室确诊结果占比进行对比分析,武汉市、鄂州市和天门市鉴定结果符合率为100％,其他13个市(州)级疟疾实验室鉴定结果占比与省级确诊结果占比相比均有不一致情况,主要集中在间日疟,卵形疟和三日疟原虫的鉴定分型上.以省级疟疾参比实验室确诊结果为标准,市(州)级疟疾实验室共误判72份,但未出现漏诊判定.确诊的374份疟疾阳性样本均由境外国家输入,其中94.39％来自非洲,5.08％来自亚洲,0.53％来自大洋洲.结论 应持续加强全省各市(州)级疟疾实验室检测能力,特别是针对卵形疟原虫和三日疟原虫的镜检鉴定水平提升,提高检测准确率,巩固湖北全省消除疟疾成果.
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套式PCR扩增特定SSU rRNA基因片段检测四川疟原虫感染的研究
目的用套式PCR系统诊断、鉴别人体疟原虫感染。方法以疟原虫小亚单位核糖体核糖核酸（SSU rRNA）基因为靶基因，选用1对疟原虫属特异性引物和4 对种特异性引物，建立套式PCR扩增系统并用于四川省疟疾病人血样的检测。结果从间日疟原虫、恶性疟原虫和三日疟原虫感染血样中分别扩增出104bp、102bp和115bp预期大小的特定扩增带。61份血样检测结果与镜检的间日疟阳性符合率为100％。并查出镜检漏诊的2例P.v.和P.m.的混合感染及1例P.v.、P.f.和P.m.的混合感染病例。结论本系统特异、灵敏、稳定、简便，可在诊断疟疾的同时判定混合感染，故对疟疾的诊断、大规模流行病学研究及疫情监控有实际应用价值。
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2015年大连市疟疾病例实验室检测结果分析
目的:分析大连市疟疾病例实验室检测结果,为疟疾诊断方法的选择提供理论依据.方法:收集2015年大连市疟疾患者的血片和血液样本,应用镜检,RDT和巢氏PCR(Nest-PCR)分别对血片和血样进行检测.结果:17份样品镜检检出恶性疟原虫10例,卵形疟原虫1例,阴性6例;RDT检出恶性疟原虫13例,共同抗原阳性者1例,阴性3例,与镜检结果一致率为82.4％(14/17);巢式PCR检出恶性疟原虫13例,阴性4例,与镜检结果一致率为82.4％ (14/17),与RDT结果的一致率为94.1％(16/17).结论:采用镜检和RDT联合应用的方法,能够提高检测的敏感性,巢式PCR可提高虫种鉴定的准确性.
