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替米沙坦在牵张刺激导致的心室肌细胞延迟整流钾通道改变中的作用
目的:探讨替米沙坦在牵张刺激导致的心室肌细胞延迟整流钾离子通道改变中的作用. 方法:将体外培养的乳鼠心室肌细胞分为对照组、牵张组、替米沙坦组、牵张+替米沙坦组.定量分析细胞蛋白/DNA比值及细胞培养上清中N-末端B型利钠肽原(NT-proBNP)水平以鉴定牵张有效性.实时荧光定量PCR检测延迟整流钾离子通道基因KCNH2、KCNQ1、KCNE1和KCNE2的mRNA水平;Western blot检测KCNH2和KCNQ1蛋白表达水平. 结果:牵张刺激导致心室肌细胞蛋白/DNA比值增大和细胞培养上清中NT-proBNP水平升高.与对照组相比,牵张组KCNH2、KCNQ1、KCNE1和KCNE2 mRNA水平上调;替米沙坦可明显抑制牵张刺激引起的KCNH2、KCNQ1和KCNE1变化,而对KCNE2基因无显著抑制效应.与对照组相比,牵张组KCNH2和KCNQ1蛋白表达下调;与牵张组相比,牵张+替米沙坦组KCNH2和KCNQ1蛋白水平明显上调. 结论:阻断血管紧张素受体可以抑制牵张刺激引起的心室肌细胞延迟整流钾通道改变.
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细胞骨架与牵张刺激诱导心肌细胞分泌生长因子的关系
目的:探讨细胞骨架与牵张刺激诱导心肌细胞分泌生长因子中的关系.方法:在可变形膜上培养心肌细胞,采用放射免疫法测定培养上清血管紧张素Ⅱ和内皮素的含量,观察细胞骨架解聚剂对牵张刺激心肌细胞分泌生长因子的影响.结果:牵张刺激可诱导心肌细胞c-fos蛋白、β-MHC mRNA表达显著升高,同时心肌细胞分泌血管紧张素Ⅱ和内皮素明显升高.而细胞骨架解聚剂不仅可显著抑制c-fos蛋白、β-MHC mRNA表达,同时,也明显抑制牵张刺激心肌细胞分泌血管紧张素Ⅱ和内皮素.结论:细胞骨架可能是介导牵张刺激诱导心肌细胞分泌细胞生长因子的重要途径.
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细胞骨架在牵张刺激心肌细胞肥大过程中的作用
目的探讨细胞骨架在牵张刺激心肌细胞肥大过程中的作用.方法在可变形膜上培养心肌细胞,采用 3H-亮氨酸掺入法反映心肌细胞肥大指标和放射免疫测定培养上清血管紧张素Ⅱ和内皮素的含量,观察细胞骨架解聚剂对牵张刺激心肌细胞肥大的影响.结果 4 μmol/L秋水仙素即可部分地抑制牵张刺激诱导的3H-亮氨酸掺入(P<0.05),而细胞松驰素B对牵张刺激诱导的 3H-亮氨酸掺入无影响.牵张刺激细胞骨架解聚剂处理后的培养上清刺激心肌细胞 3H-亮氨酸掺入的活性显著低于单纯牵张刺激时的培养基.同时,细胞骨架解聚剂显著抑制牵张刺激心肌细胞分泌血管紧张素Ⅱ和内皮素.结论细胞骨架仅通过介导细胞自分泌细胞生长因子参与牵张刺激诱导的心肌细胞肥大反应.
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牵张刺激诱导心肌细胞分泌生长因子的机制
目的探讨牵张刺激诱导心肌细胞分泌生长因子的机制. 方法在可变形膜上培养心肌细胞,采用放射免疫法测定培养上清血管紧张素Ⅱ和内皮素的含量,观察细胞骨架解聚剂和百日咳毒素对牵张刺激心肌细胞分泌生长因子的影响.结果牵张刺激可诱导心肌细胞c-fos蛋白、β-MHC mRNA表达显著升高,同时心肌细胞分泌血管紧张素Ⅱ和内皮素明显升高.而细胞骨架解聚剂、百日咳毒素不仅可显著抑制其表达,同时,也明显抑制牵张刺激心肌细胞分泌血管紧张素Ⅱ和内皮素. 结论 G蛋白-细胞骨架可能是介导牵张刺激诱导心肌细胞分泌细胞生长因子的重要途径.
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一氧化氮抑制牵张刺激心肌细胞肥大反应的实验研究
目的探讨一氧化氮(NO)对牵张刺激心肌细胞肥大的抑制作用.方法用分光光度法、原位杂交及图像分析法测定蛋白、DNA含量及β-MHC mRNA表达.结果 20%牵张刺激可诱导培养心肌细胞内游离Ca2+含量迅速升高,12～24 h即见蛋白质合成及β-MHC mRNA显著增加.大于3×10-4mol/L的硝普钠(NO供体)可显著抑制牵张刺激诱导的心肌细胞蛋白质合成及β-MHC mRNA表达.NO可同时使牵张刺激引起的细胞内游离Ca2+浓度升高受到抑制.结论一氧化氮可显著抑制牵张刺激诱导的心肌细胞肥大反应,这种抑制可能是通过降低细胞内游离Ca2+浓度而发挥作用的.
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培养细胞牵张刺激装置的建立及初步应用
目的为进一步探讨细胞机构感受机制,建立一套实用的培养细胞牵张刺激模拟装置.方法用有机玻璃和可变形膜设计制作一套培养细胞牵张刺激模拟装置,并用同位素标记氨基酸和核苷酸掺入法作初步应用评价.结果应用自行设计制作的两个模型,对培养细胞进行较强的牵张刺激,发现20%的拉长或12 kPa负压的球面牵张对培养心肌细胞的数量和乳酸脱轻酶释放均无影响;但可显著刺激培养心肌细胞3H-亮氨酸及成纤维细胞3H-TdR的掺入.结论初步应用说明该装置结构简单实用.
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间质细胞在牵张刺激心肌细胞肥大中的作用
大量研究表明心脏是一个重要的内分泌器官。心肌间质细胞(主要是成纤维细胞、微血管内皮细胞)约占心肌组织细胞总数的40%，但是，单独针对心肌组织中各种间质细胞功能的离体研究较少。尤其是对于成纤维细胞、微血管内皮细胞在受到超负荷力学机械刺激后的内分泌功能有何变化及其在超负荷心肌肥大机制中的作用均不清楚。 我们应用体外细胞牵张刺激模型，采用条件培养基刺激法观察成纤维细胞、微血管内皮细胞在受到牵张刺激后的内分泌活化情况及在心肌细胞肥大中的作用。结果发现，对培养在硅酮膜上的成纤维细胞和微血管内皮细胞进行20%牵张刺激，24h即可见到两种细胞培养上清中血管紧张素Ⅱ和内皮素含量显著升高，牵张时间延长，二者的浓度进一步显著增加。因此，上述结果不仅说明牵张刺激可诱导成纤维细胞、微血管内皮细胞的内分泌活化，还提示牵张刺激对内分泌的活化作用具有时间依赖性。另外，我们发现牵张刺激成纤维细胞、微血管内皮细胞的条件培养基均可显著刺激心肌细胞3H-Leu掺入、c-fos蛋白及β-MHC mRNA的表达，提示牵张刺激可通过诱导心肌间质细胞内分泌活化启动心肌细胞肥大反应。血管紧张素Ⅱ、内皮素受体拮抗剂可明显抑制心肌细胞3H-Leu掺入率、c-fos蛋白及β-MHC mRNA的表达。但是，当联合应用上述两种受体拮抗剂时，3H-Leu掺入率、c-fos蛋白及β-MHC mRNA表达的抑制率可达80%以上，但并不能完全抑制，说明牵张刺激可诱导成纤维细胞和内皮细胞分泌包括血管紧张素Ⅱ和内皮素等在内的多种细胞因子、生长因子参与刺激心肌肥大反应，如成纤维细胞生长因子、转化生长因子等。因此，研究表明预防或逆转超负荷心肌肥大的佳措施可能仍然是减轻心肌组织受到的过度应力刺激。
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一氧化氮可抑制牵张刺激心肌细胞肥大反应
虽然有大量实验早已证实单纯压力超负荷即可诱导心肌肥大，但是至今尚不清楚这一力学作用的信号转导机制。有报道指出，细胞形变可直接刺激细胞内腺苷酸环化酶活性及cAMP含量升高。本室研究也提示，急性压力超负荷可诱导心肌组织cAMP含量迅速升高、cGMP含量迅速降低，说明环核苷酸系统与压力超负荷心肌肥大的信号转导机制有关。我们采用体外模拟牵张刺激模型，进一步观察了一氧化氮供体硝普钠对牵张刺激心肌细胞肥大反应的影响。 结果表明，应用本室建立的牵张刺激模型进行20%牵张刺激即可显著诱导培养心肌细胞蛋白质合成，同时，牵张刺激使心肌细胞β肌球蛋白mRNA表达也显著升高，而DNA合成未见增加。另外发现，大于3×10－4M／L的硝普钠(NO供体)即可显著抑制牵张刺激诱导的心肌细胞蛋白质合成及β－MHC mRNA表达，在不断保持硝普钠浓度的情况下，则具有持续的抑制作用。在急性压力超负荷大鼠心肌cGMP浓度有一个从正常水平到降低，再到恢复正常的过程，这一变化特点恰与cAMP的变化曲线相反。
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手肌反射及其临床意义
通过各种各样的刺激可以在手部或臂部肌肉诱发出一些反射,被称之为手肌反射.目前研究的刺激方式有:①肌肉的牵张刺激;②采用气流团对皮肤刺激;③对混合或单纯表浅神经的电刺激.手肌反射常呈现出多样反射波,这些反射活动很可能是通过不同的神经反射通路来完成,基于这些不同的反射通路,在一块肌肉上获得这些反射往往很困难或不太可能.下面将手肌反射的方法学、生理机制以及在一些神经系统疾病的临床应用作一简要介绍.
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培养心肌细胞牵张刺激装置的建立及应用
1 方法牵张刺激装置的制作如模式图1. 制作实验模型采用材料为有机玻璃板、24孔培养板、硅胶膜(厚度0.22 μm). 硅胶膜从平面圆形变为球形时,面积扩大的百分比=(S球-S园)/S园,其中S球=AD2, S园=r2,而AD2=h2+r2,其中r为孔的半径,h为膜升高的高度图2. 通过控制h的大小,可控制膜被牵拉的强度. 本实验采用使膜面积扩大20%的强度,故h=4 mm[1]. 参照Kassiri 等[2,3]方法进行心肌细胞的分离培养. 生长有贴壁心肌细胞的24孔板被固定于牵张装置,缓慢充气使硅胶膜向上凸起4 mm,分别维持持续压力12和24 h. 收集细胞培养上清液测定乳酸脱氢酶(LDH)(南京建成生物制品公司)、AngⅡ(解放军总医院科技开发中心放免研究所)的水平[4,5].
