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人胎肝间充质干细胞体外分离培养和生物学鉴定
目的建立人胎儿肝脏非实质细胞间充质干细胞(nonparenchymal mesenchymal stem cells,NPMSC)的分离、培养方法,观察NPMSC形态学、细胞生物学特性及细胞表型特征,以获得大量人源性间充质干细胞(MSC).方法采用体外细胞培养技术分离培养人胎儿NPMSC,用显微摄像、MTT和图像分析研究其增殖及生长特征,用流式细胞仪和免疫组化法鉴定其表型.结果每个胎儿肝脏可获得10 000±2 000个贴壁细胞,可见5～10个高速增生的细胞集落.原代和传代培养均生长缓慢,按1:3传代,传1代需8～10 d,细胞经传代后逐渐纯化,传10代后可达109个细胞.流式细胞仪检测NPMSC不表达CD34,而表达CD166.对传代NPMSC进行人甲胎蛋白和白蛋白免疫组化分析,细胞表达微量甲胎蛋白,不表达白蛋白.结论肝非实质细胞中含有MSC,且量较大,可成为种子细胞.NPMSC在普通培养条件下不向肝细胞分化.
关键词： 肝非实质间充质干细胞 分离 培养 鉴定 -
人胎肝来源间充质干细胞的分离培养和鉴定
目的建立人胎儿肝脏非实质间充质干细胞(nonparenchymal mesenchymal stem cells, NPMSCs)的分离、培养和鉴定方法.方法采用体外细胞分离培养技术,分离培养人胎儿NPMSCs,用显微摄相、MTT和图像分析研究其增殖及生长特征,用流式细胞仪和免疫组织化学鉴定其表型.结果每个胎儿肝脏可获得(10 000±2 000)个贴壁细胞,但其中常混有5%～10%的其它肝非实质细胞,可见5～10个高速增生的细胞集落.原代和传代培养均生长缓慢,按1分3传代,传1代需8～10 d,细胞经传代后逐渐纯化,传10代后可达到109个细胞.NPMSCs不表达CD34,而表达CD166.传代NPMSCs表达微量AFP,不表达ALB.结论肝非实质细胞中含有NPMSCs,可成为种子细胞.传代培养NPMSCs在普通培养条件下不向肝细胞分化.
关键词： 肝非实质间充质干细胞 分离 培养 鉴定
