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miR-214通过抑制TOM1表达促进肝星状细胞活化和迁移
肝星状细胞(HSCs)持续激活所致的细胞外基质过度沉积是肝纤维化发生、发展的关键环节.MicroRNAs(miRNAs)是一类重要的生物调节分子,为HSC的分化、增殖、凋亡、脂肪蓄积以及胶原生成所必须.既往对HSC miRNAs表达谱的分析显示,miR-214在HSC活化过程中表达显著增高.目的:探讨miR-214在HSC中的生物学功能及其可能机制.方法:以real time PCR检测静息和完全活化状态大鼠HSC的miR-214 mRNA表达;应用miR-214封闭慢病毒载体感染HSC以敲除miR-214表达,以Transwell细胞迁移实验、蛋白质印迹法检测感染前后HSC迁移、活化能力的变化;应用荧光质粒报告系统对TargetScan(http://www.targetscan.org/)预测的miR-214靶基因进行验证.结果:miR-214 mRNA在HSC活化过程中表达显著增高(P＜0.01).miR-214敲除组HSC Transwell小室迁移细胞数较阴性对照组显著减少(P<0.001),HSC活化标记物α-SMA、Ⅰ型胶原蛋白表达显著下调(P<0.01).预测显示TOM1为miR-214的靶基因,并得到荧光质粒报告系统证实;miR-214敲除组HSC TOM1蛋白表达显著上调(P<0.05).结论:miR-214参与促进HSC的活化和迁移,进而促进肝纤维化进程;miR-214在HSC中的生物学功能至少部分是通过抑制TOM1表达实现的.
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人类重组免疫球蛋白λ轻链022与TOM1基因在2型糖尿病胰岛素抵抗患者网膜脂肪组织的表达
目的:探讨人类重组免疫球蛋白λ轻链(HSIGVL)022和TOM1基因在2型糖尿病胰岛素抵抗(T2DM-IR)患者网膜脂肪组织表达水平并鉴定HSIGVL022蛋白表达.方法:取2型糖尿病伴胰岛素抵抗(T2DM-IR组)与非糖尿病无胰岛素抵抗者(对照组)网膜脂肪组织,用荧光定量RT-PCR技术测定HSIGVL022和TOM1 mRNA的表达量,用免疫组化方法鉴定HSIGVL022蛋白表达.结果:荧光定量RT-PCR显示HSIGVL022和TOM1 mRNA的表达量T2DM-IR组和对照组分别为(34 140±6 160)、(4 440±617)和(5 930±661)、(1 360±82)拷贝/每百万看家基因(P＜0.05);HSIGVL022较TOM1表达量高(P＜0.01),且与HOMA-IR呈直线相关(P＜0.05);免疫组化显示HSIGVL022蛋白在T2DM-IR组和对照组阳性率分别为(12.43±2.41)%、(2.31±0.48)%,强阳性率分别为(6.62±1.69)%、(2.12±0.34)%,P＜0.05.结论:HSIGVL022和TOM1在人网膜脂肪组织中均有表达,HSIGVL022表达量较高;在T2DM-IR者中均呈上调表达,HSIGVL022蛋白表达相应增高;HSIGVL022 mRNA表达量与HOMA-IR呈直线相关;这2条基因可能与T2DM-IR有关.
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p16INK4A诱导的衰老相关基因表达差异
目的检测衰老主导基因p16与衰老相关基因p21、CSIG、TOM1间的相互关系.方法正、反义p16转染人胚肺2倍体成纤维细胞(2BS)后,用RT-PCR检测p21、CSIG、TOM1的表达,用WesternBlot检测p21蛋白的表达.结果p16对p21存在转录后调控作用,正义p16转染细胞TOM1高表达,反义p16转染细胞CSIG高表达.结论衰老主导基因p16与衰老相关基因p21、CSIG、TOM1间存在相互作用,进一步说明了p16在衰老中的主导地位.
