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柔嫩艾美球虫重组质粒PVAX1-Mzp5-7的免疫保护性试验
目的用柔嫩艾美球虫(Eimeria tenella,E.t)子孢子表面蛋白基因构建的DNA重组质粒免疫海兰小公雏,观察其诱导鸡产生的免疫应答反应和对球虫攻击的保护作用.方法重组质粒经肌肉和鼻黏膜分别于7、14、28日龄3次接种小公雏,用间接ELISA、流式细胞仪检测免疫反应.后一次免疫后2周经口接种新鲜的E.t孢子化卵囊,确定其保护力的大小.结果构建的柔嫩艾美球虫重组质粒免疫雏鸡后能诱导有效的细胞免疫和体液免疫,表现为CD4+/CD8+T细胞比率、特异性抗体滴度明显高于对照组(P＜0.05).可对抗中等剂量球虫的攻击,试验组和对照组相比,攻虫后卵囊排出量显著减少,体重增长快,盲肠病变较小,保护率达80%以上.肌注100μg重组质粒组综合免疫保护效果好.结论构建的重组质粒对鸡柔嫩艾美球虫的攻击有较好的免疫保护作用.
关键词： pVAX1-Mzp5-7重组质粒 免疫保护性 柔嫩艾美球虫 -
不同地理株杂交培育的柔嫩艾美球虫及其免疫保护率
目的培育3个不同地理株柔嫩艾美球虫(Eimeriatenella)的杂交株,以探讨研制球虫疫苗的可能性.方法通过免疫试验,从5个不同地理株中选择3株作为杂交亲本株,对此3株分别进行两次杂交,获得的后代混合卵囊经单卵囊分离、扩增,分别提取卵囊DNA,利用随机扩增多态性DNA(RAPD)进行分析(30条引物),分离、培育出两代杂交株.再进行免疫试验,比较杂交株与亲本株的免疫保护性.结果选择了免疫原性较好、免疫保护率较高的广州株、保定株、长春株作为杂交亲本,分别进行保定株×长春株、广州株×F1株两次杂交,获得的后代卵囊,提取卵囊DNA,RAPD分析后,得到了保定株×长春株的杂交株F1(F1Z7)和广州株×F1株的杂交株F2(F2Z3).免疫试验结果,杂交株F1与F2的免疫保护率分别为80%和84%;亲本株广州株为77%,保定株为69%,长春株为63%.结论分离、培育出了F1、F2两代杂交虫株.其免疫保护率均高于各亲本株,提示杂交株获得了亲本株的部分保护性,其免疫的雏鸡对各虫株的攻击均有好的保护力.尤其是F2株,免疫保护率平均达到84%.
关键词： 柔嫩艾美球虫 杂交 随机扩增多态DNA技术 免疫保护 -
柔嫩艾美球虫杂交株F2 SO7基因重组鸡痘病毒的构建和筛选
目的 构建柔嫩艾美球虫(E.tenella)杂交株F2 SO7基因重组鸡痘病毒.方法 将柔嫩艾美球虫杂交株F2 SO7基因,插入到以胸苷激酶(TK)基因为侧翼的鸡痘病毒表达载体pUTA2中的复合启动子下游,获得重组表达质粒pUTA-SO7.用脂质体将重组表达质粒转染鸡痘病毒(FPV)感染的鸡胚成纤维细胞(CEF),培养、收获病毒后,用含40 mg/L5-溴-2-脱氧尿嘧啶(BrdU)的培养液,在TK基因阳性CEF细胞中筛选培养2代,然后用不含BrdU的培养液进行病毒噬斑纯化以筛选rFPV.结果 PCR扩增可见650 bp左右蛋白条带,间接荧光抗体试验(IFAT)可见重组病毒感染细胞表面有绿色荧光物质,蛋白质印迹分析(Western Blotting),在相对分子质量(Mr)36000处有1条特异条带,证实了重组病毒在CEF中表达了SO7基因.结论 成功筛选出表达E.tenella杂交株F2 SO7基因的重组鸡痘病毒.
