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日本血吸虫极低密度脂蛋白结合蛋白重组抗原的免疫保护性研究
目的探讨日本血吸虫极低密度脂蛋白结合蛋白(SVLBP)重组抗原的免疫保护性及其作为候选疫苗的潜在价值.方法用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导克隆菌大量表达SVLBP重组抗原,以镍-次氮基三乙酸琼脂糖树脂(Ni-NTA)亲和层析法纯化制备SVLBP重组抗原;将纯化的重组抗原加福氏佐剂经皮下免疫C57BL/6小鼠,每隔2周免疫1次,在第3次免疫后10 d,经腹部皮肤攻击感染日本血吸虫尾蚴35±1条,感染后45 d剖杀,计数检获虫数和每克肝虫卵数(LEPG).小鼠在免疫前和攻击感染后分别采眶窦血,用ELISA测定特异性IgG及其亚群抗体水平.结果相对于佐剂对照组,免疫组小鼠的减虫率为33.4%,减卵率为47.6%;免疫后小鼠产生高水平的特异性IgG(＞1:6 400);抗体亚类检测结果显示,免疫组小鼠IgG2a、IgG2b、IgG1明显高于免疫前和佐剂对照组.结论日本血吸虫皮层蛋白SVLBP重组抗原能诱导小鼠产生一定的保护性免疫,是潜在的疫苗候选抗原分子.
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重组日本血吸虫极低密度脂结合蛋白的抗原性及诊断价值的研究
目的探讨重组日本血吸虫特异性极低密度脂结合蛋白(SVLBP)的抗原性及其诊断价值.方法SVLBP基因亚克隆入pQE-30表达载体,克隆菌在IPTG诱导下表达重组蛋白;非变性条件下制备克隆菌裂解液,用亲和层析法纯化重组蛋白;用Western blot鉴定其抗原性;纯化SVLBP重组蛋白免疫家兔获得抗血清;以SVLBP重组蛋白为抗原,ELISA法检测血吸虫感染者血清及健康人血清.结果克隆菌在IPTG诱导下高表达SVLBP重组蛋白;该重组蛋白诱导家兔产生单特异抗体,抗体滴度为1∶6400;SVLBP重组蛋白与血吸虫病人血清有较强的反应;以该蛋白为抗原检测36人份血吸虫感染者血清,阳性率为83.3%,50人份健康人血清,假阳性率为2%(1/50),10人份肺吸虫病人血清,1例阳性,交叉反应率为10%(1/10).结论SVLBP重组蛋白有较好的抗原性,以该重组蛋白为抗原检测日本血吸虫病患者血清中特异性抗体,敏感性和特异性均较高,具有一定的诊断价值.
