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enoyl-酰基载体蛋白还原酶文献资料
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结核杆菌enoyl-酰基载体蛋白还原酶与烟酰胺腺嘌呤二核苷酸作用的测定
目的了解enoyl-酰基载体蛋白还原酶(inhA)与烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)的作用,建立量化两者的作用强度方法.方法对结核杆菌H37Rv的inhA进行克隆、表达并以Nit-NTASuperflow亲和柱纯化表达产物,然后将0.8 mg/ml的inhA蛋白与1 mmol/L的NADH室温作用10min后,以分光光度法在200～400nm范围连续扫描作用前后inhA蛋白,比较其吸收光谱的变化;进一步将0.35 mg/ml的inhA分别与4μmol/L、10 μmol/L、20μmol/L、50 μmol/L和100μmol/L的NADH室温作用10 min,同样检测其吸收峰的变化,通过米氏方程的推导求出inhA与NADH复合物的解离常数.结果与NADH作用后inhA吸光峰的幅度显著减小,出现了新吸光峰;经米氏方程的推导求得的解离常数为14.6×10-6mol.结论结核杆菌H37Rv inhA与NADH具很强的结合力,成功建立了检测两者结合强度的方法.
关键词： 结核病 异烟肼 enoyl-酰基载体蛋白还原酶 烟酰胺腺嘌呤二核苷酸
