您当前的位置：
首页 > 文献资料
所属专业：
昆虫细胞学文献资料
-
人巨细胞病毒 pp65基因重组蛋白在昆虫细胞中的表达与分析
目的为了制备人巨细胞病毒(HCMV)pp65基因疫苗,应用Bac To Bac系统对HCMV pp65基因进行表达,并对重组蛋白质的特异性及生物活性进行确定.方法通过脂质体法用HCMV pp65基因重组病毒感染Sf9昆虫细胞,并在感染的不同时期收集细胞, 用特异性的HCMV pp65 MAb对重组蛋白进行Western blot,并选择HCMV IgG阳性及阴性的孕妇血清与重组蛋白进行免疫印迹反应. 结果重组Bacmid大分子DNA直接转染昆虫细胞可得到100%的阳性重组病毒,病毒滴度为3×107pfu/ml,重组病毒组在感染后48 h开始出现一相对分子质量为65 000大小的特异带,感染后72 h量明显增加,持续至感染后96 h,在野生型AcNPV感染细胞及正常昆虫细胞的空白对照中未见该蛋白带.Western blot显示目的蛋白条带与HCMV pp65 MAb发生特异反应.6例阳性血清中有5例与重组pp65发生特异性反应,而阴性对照组未见特异性反应带.结论 HCMV pp65基因可在Sf9昆虫细胞中有效表达,且所表达的重组蛋白pp65与人体中感染的野生型HCMV pp65具有相同的抗原性.因此有望为疫苗的制备打下基础.
