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原虫蛋白质类文献资料
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弓形虫GRA8基因真核表达重组质粒的构建、鉴定及测序
目的构建弓形虫RH株pcDNA3.1(+)-GRA8真核表达重组质粒,为进一步DNA免疫做准备.方法用聚合酶链反应(PCR)从弓形虫RH株的基因组DNA中扩增编码致密颗粒蛋白(GRA8)的基因片段,纯化后重组入pUC-19克隆载体,再经含IPTG,XGal氨苄培养基蓝白筛选,挑选白色克隆酶切,低溶点琼脂糖纯化,回收目的基因亚克隆入pcDNA3.1(+),经氨苄培养基过夜培养挑选6个克隆提纯酶切,PCR鉴定和测序.结果从RH株基因组DNA中扩增出特异的GRA8基因片段,克隆成功pcDNA3.1(+)-GRA8重组质粒.测序表明GRA8这部分基因与GENEBANK相应基因序列完全一致.结论本结果为研究抗弓形虫核酸疫苗打下基础.
