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精子相关抗原6与肿瘤早期诊断的研究进展
精子相关抗原6（SPAG6）为新发现的癌睾丸抗原（cancer-testis antigens, CTA）家族的一员，是一种具有巨大肿瘤早期诊断的前景蛋白。SPAG6基因是1999年Neilson等[1]在用男性不育患者的高滴度抗精子抗体血清来筛选睾丸表达基因文库时克隆出来的。目前发现SPAG6在肿瘤组织中的特异性表达，以及其能引起特异性的体液免疫应答的特点，均符合肿瘤生物标记物的筛选标准。因此该基因可能适用于肿瘤早期诊断。本文就国内研究相对较少的SPAG6的基本特征、功能以及其与肿瘤早期诊断作一下概述。
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溶质载体家族22成员14和精子相关抗原6在特发性弱精子症患者精子中的表达
目的:探讨溶质载体家族22成员14(SLC22A14)和精子相关抗原6(SPAG6),在特发性弱精子症患者精子中的表达情况. 方法:收集精子库合格捐精者(正常对照组)和特发性弱精子症患者(弱精子症组)各50例精子样本,采用非连续密度梯度离心纯化精子,分别用RT-PCR和Western印迹检测SLC22A14、SPAG6 mRNA及蛋白的表达. 结果:RT-PCR检测结果显示,弱精子症组的SLC22A14、SPAG6 mRNA表达均显著低于正常对照组(SLC22A14:0.53±0.10 vs 0.77±0.08,t=12.834,P＜0.01;SPAG6:0.52±0.10 vs 0.77±0.06,t=13.755,P＜0.01),Western印迹检测结果显示,弱精子症组的SLC22A14和SPAG6蛋白表达量同样均显著低于正常对照组,分别为(SLC22A14:0.55±0.10 vs 0.80±0.09,t=12.884,P ＜0.01;SPAG6:0.56±0.09 vs 0.78 ±0.09,t=12.257,P ＜0.01).结论:在特发性弱精子症患者中SLC22A14和SPAG6表达降低可能是导致弱精子症的重要原因之一.
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精子相关抗原6与速激肽1相互作用关系的探讨
目的:构建速激肽1(Tac1)基因真核表达载体并探讨其与精子相关抗原6(SPAG6)之间的相互作用. 方法:提取10只昆明雄性小鼠的心、肝、脾、肺、肾、脑、肌肉、睾丸8个组织的RNA,逆转录成cDNA后,用RT-PCR法观察Tac1在各组织中的表达.构建Tac1/pGADT7、Tac1/pEGFP-N2重组质粒,将Tac1/pEGFP-N2转染至CHO和COS-1细胞,采用免疫荧光染色及Western印迹检测TAC1在细胞中的定位和蛋白表达.将Tac1/pGADT7与Spag6/pGBKT7进行酵母双杂交实验,提取酵母蛋白用Western印迹检测TAC1与SPAG6之间是否存在相互作用. 结果:Tac1主要在睾丸、脑、心脏中表达.酶切和测序鉴定表明Tac1重组质粒构建成功,酶切鉴定片段390 bp.TAC1单独转染时,定位于CHO细胞的整个胞体,与SPAG6质粒共转染后,TAC1被募集至细胞微管中表达,用Western印迹检测到相对分子质量约为40 000的融合蛋白表达.与SPAG6的酵母双杂交实验显示TACl/SPAG6在缺少3种氨基酸(Leu、Trp、His)的培养板上有菌落生成,经Western印迹证实酵母融合蛋白中含有TAC1和SPAG6. 结论:成功构建Tac1重组质粒,并利用该质粒证实了TAC1与SPAG6之间存在相互作用关系.
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Prestin 在 Spag6基因敲除小鼠外毛细胞中的表达
目的：探究 prestin 在精子相关抗原6（Spag6）基因敲除小鼠中的表达及其与 SPAG6之间的关系。方法获取小鼠耳蜗基底膜组织，进行免疫染色，采用共聚焦显微镜观察 prestin 与 SPAG6在毛细胞中的共同分布。比较野生小鼠（Spag6＋／＋）、杂合型小鼠（Spag6＋／－）和同窝基因敲除小鼠（Spag6－／－）外毛细胞 prestin 的荧光强度差异和毛细胞的形态改变，并以蛋白印记实验和实时定量聚合酶链反应检测3种基因型小鼠的 prestin 表达水平。结果SPAG6存在于野生型和杂合型成年小鼠的外毛细胞中，在表皮板处呈阳性表达，与 prestin 共同分布于外毛细胞的外侧壁处。基因敲除小鼠 prestin 的荧光强度较野生小鼠更弱，并且外毛细胞出现形态异常。蛋白印迹实验和实时定量聚合酶链反应均显示，基因敲除小鼠 prestin 表达量显著降低。结论SPAG6参与外毛细胞的构成，且影响外毛细胞 prestin 表达，提示两种蛋白之间存在相互作用。
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精子相关抗原6(SPAG6)与TCTE3蛋白间相互作用探讨
目的:探讨精子相关抗原6(sperm associated antigen 6,Spag6)和T复合体相关睾丸表达3(T-complex associated testis expressed 3,TCTE3)之间的相互作用.方法:PCR法观察Tcte3在雄性小鼠各组织中的表达;以小鼠睾丸cDNA为模板,扩增Tete3序列,构建Tcte3/pGADT7、Tcte3/pEGFPN2重组质粒;以Tcte3/pEGFPN2转染CHO细胞和COS-1细胞,免疫荧光染色及Western blot检测TCTE3在细胞中的定位和表达;以Spag6/pGBKT7和Tcte3/pGADT7进行酵母双杂交实验,提取酵母蛋白后采用Western blot检测TCTE3与SPAG6之间是否存在直接的相互作用.结果:Tcte3在睾丸、脑、肝、肾、肺、脾、肌肉中均有表达;酶切和测序鉴定证实Tete3/pGADT7和Tcte3/pEGFPN2重组质粒均构建成功;体外实验发现TCTE3主要在CHO和COS-1细胞质中表达,当与SPAG6质粒共转染后,TCTE3被募集至细胞微管中表达;酵母双杂交实验显示TCTE3/SPAG6组合后,在缺少SD/-Leu/-Trp/-His的培养板上有菌落生成,Western blot显示菌落中TCTE3、SPAG6蛋白表达显著,分子量正确.结论:精子相关抗原SPAG6与TCTE3之间存在直接的相互作用,SPAG6可募集TCTE3至细胞微管中表达.
关键词： 男性不育 精子相关抗原6 T复合体相关睾丸表达3 酵母双杂交 蛋白表达
