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ATPR对ECA-109、PANC-1、HeLa细胞增殖及分化的影响
背景与目的 由于全反式维甲酸(all-trans retinoic acid,ATRA)治疗急性早幼粒细胞白血病(acute promyelocytic leukemia,APL)存在一些不良反应,使得其进一步的临床应用受到了限制.目前,寻找具有更好疗效的维甲酸衍生物已成为研究热点.该研究旨在观察新型维甲酸衍生物4-氨基-2-三氟甲基苯基维甲酸酯(4-amino-2-trifluoromethyl-phenyl retinate,ATPR)对食管癌细胞株ECA-109、胰腺癌细胞株PANC-1、宫颈癌细胞株HeLa生长和分化的影响.方法 采用MTT法检测细胞的生长抑制率;流式细胞仪测定细胞周期的变化;酶联免疫吸符实验(ELISA)检测食管癌细胞分化指标鳞状上皮癌相关抗原SCC-Ag活性、胰腺癌细胞标志物CA199和宫颈癌细胞标志物CA125水平.结果 ATPR能够抑制肿瘤细胞增殖;并使G0/G1期细胞表达量增加,S期细胞表达量减少,细胞阻滞在G0/G1期;ECA-109中SCC-Ag活性下降,PANC-1中CA199和HeLa中CA125水平下降.结论 ATPR对上述3种实体瘤细胞株具有不同程度的诱导分化作用.
关键词： 4-氨基-2-三氟甲基苯基维甲酸酯 维甲酸衍生物 细胞增殖 细胞分化 -
4-氨基-2-三氟甲基苯基维甲酸酯对人乳腺癌细胞株MDA-MB-231诱导分化作用及可能的机制研究
目的：观察4-氨基-2-三氟甲基苯基维甲酸酯(4-anino-2-trifluoromethyl-phenyl retimate, ATPR)对人乳腺癌细胞株MDA-MB-231抑制增殖诱导分化作用,探讨其可能的作用机制。方法体外培养人乳腺癌细胞株 MDA-MB-231, MTT检测细胞增殖,绘制细胞生长曲线,瑞氏-吉姆萨染色观察细胞形态变化,酶联免疫法检测粘蛋白MUC-1活性,流式细胞术检测细胞周期,实时荧光定量PCR法和Western blot法检测维甲酸受体(retinoic acid receptors,RAR) RARα、RARβ、RARγ和维甲类受体( retinoid X receptors, RXR ) RXRα、RXRβ、RXRγ基因和蛋白的表达。结果 ATPR 能够抑制MDA-MB-231细胞的增殖,具有浓度-时间依赖性,染色后镜下观察 MDA-MB-231细胞生长密度降低,形态趋于正常。ELISA结果显示,ATPR作用后明显降低MDA-MB-231细胞培养上清中MUC-1的浓度；流式细胞术结果显示,MDA-MB-231细胞中G0/G1期表达量增加,S期表达量减少,细胞阻滞在G0/G1期比例增加。 q-RT-PCR和Western blot结果显示, ATPR作用后, RARγ的mRNA和蛋白表达水平降低, RXRs mRNA和蛋白水平无明显变化。结论 ATPR可以抑制人乳腺癌细胞株MDA-MB-231增殖并诱导其分化,其机制可能与RARγ的表达有关。
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新型维甲酸衍生物ATPR大鼠体内组织分布的研究
目的：建立大鼠组织中新型维甲酸衍生物4-氨基-2-三氟甲基苯基维甲酸酯（ATPR）浓度的测定方法，并研究其在大鼠体内的组织分布。方法 SD大鼠灌胃给药ATPR（20 mg·kg－1）和静脉注射给药ATPR（7 mg·kg－1）后，分别于给药后2、4、7 h和5 min、1、5 h取各脏器组织，经预处理， HPLC法测定各组织中ATPR浓度。结果大鼠灌胃ATPR后，肠组织中药物浓度高，其次在肝、脾、肺组织浓度较高，在心、肾、脂肪和脑组织中浓度较低。静注给ATPR后，肝组织中药物浓度高，其次在脾、肺组织浓度较高，在心、肾、肠、脂肪和脑组织中浓度较低。结论两种给药途径给药ATPR后，肝组织的药物浓度均较高，提示ATPR在诱导肝癌细胞分化和抗癌细胞增殖方面可能会有较好的靶向作用。
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4-氨基-2-三氟甲基苯基维甲酸酯通过PTEN/PI3K/Akt抑制YAC-1细胞增殖和诱导其分化
目的 研究新型维甲酸衍生物4-氨基-2-三氟甲基苯基维甲酸酯(4-amino-2-trifluoromethyl-phenyl retinate,ATPR) 对鼠淋巴瘤YAC-1细胞增殖和分化的作用及其可能机制.方法 不同浓度的ATPR作用鼠淋巴瘤YAC-1细胞后,MTT检测细胞生长抑制率;LDH法检测细胞毒性;瑞氏-吉姆萨染色法检测细胞形态;NBT检测细胞分化阳性率;RT-PCR和Western blot法检测维甲酸受体mRNA和蛋白表达变化;Western blot法检测PTEN/PI3K/Akt和cyclinD的蛋白表达.结果 ATPR(10-5、10-6、10-7、10-8、10-9 mol·L-1)用药后72 h明显抑制YAC-1细胞增殖,其抑制作用随浓度和时间增加而逐渐增强;随着药物浓度升高,ATPR对YAC-1细胞毒性增强; ATPR(10-5 ~10-9 mol·L-1)作用72 h后可诱导YAC-1细胞形态呈现高分化趋势,且NBT阳性率升高;ATPR(10-5 mol·L-1)体外用药72 h可诱导RARα的mRNA和蛋白表达升高,但RARβ和RARγ表达无明显变化;而且可诱导PTEN表达升高并下调p-Akt和cyclinD的蛋白表达.结论 ATPR 可明显抑制YAC-1细胞增殖并诱导其分化,其机制可能是与RARα结合后参与调节PTEN/PI3K/Akt信号通路,从而抑制cyclinD的过表达.
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4-氨基-2-三氟甲基苯基维甲酸酯对MCF-7细胞增殖和分化的影响及其机制研究
目的 研究4-氨基-2-三氟甲基苯基维甲酸酯(4-amino-2-trifluoromethyl-phenyl retinate,ATPR) 对人乳腺癌MCF-7细胞增殖和分化的作用及其可能机制.方法 不同浓度的ATPR作用MCF-7细胞后,绘制细胞生长曲线,分析细胞增殖情况;瑞氏-吉姆萨染色法观察细胞形态学改变;酶联免疫法(ELISA法)检测粘蛋白 (mucin 1,MUC-1) 活性;RT-PCR法检测维甲酸受体(RARα、RARβ、RARγ)、维甲酸受体诱导基因1 (RRIG1)、雌激素受体(ERα、ERβ) mRNA的表达;Western blot法检测RARα、RARβ、RARγ蛋白的表达.结果 ATPR明显抑制MCF-7细胞增殖,且随浓度和时间增加而逐渐增强;镜下观察ATPR作用72 h后MCF-7细胞形态趋向正常细胞分化;ELISA结果显示ATPR明显降低MCF-7细胞培养上清MUC-1浓度(P<0.05);ATPR作用MCF-7细胞72 h后,RARβ、RRIG1、ERβ表达增强(P<0.05),RARγ表达下调(P<0.05),RARα和ERα表达则无明显变化.结论 ATPR可明显抑制MCF-7细胞增殖并诱导其分化程度增高,其机制可能与调节维甲酸受体和雌激素受体平衡,并上调RRIG1表达有关.
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4-氨基-2-三氟甲基苯基维甲酸酯对人白血病 K562细胞的蛋白质组学研究
目的：研究新型维甲酸衍生物4-氨基-2-三氟甲基苯基维甲酸酯(4-amino-2-trifluoromethyl-phenyl retinate,ATPR)诱导人白血病 K562细胞分化作用的蛋白质组学机制。方法1×10-6 mol·L -1的 ATPR 及 ATRA 分别作用于人白血病K562细胞48 h 后,收集细胞并提取总蛋白,纯化之后使用胰蛋白酶酶解,固相萃取法脱盐,高分辨率液相色谱质谱联用仪检测肽段,使用 Proteome Discoverer 1．2软件寻找出差异表达的蛋白质,利用生物信息学 DAVID 数据库、KEGG 数据库、STRING 数据库,分析鉴定出的差异蛋白质所具有的分子功能、所参与的生物学过程等信息。结果 ATPR 组特异性的蛋白质鉴定出120个,ATRA 组特异性蛋白质有143个,两者共有蛋白422个。 DAVID 分析显示 ATPR 特异性蛋白质主要参与39个生物学过程,包括蛋白质和大分子的代谢、蛋白质转运和定位等。 KEGG 分析发现,ATPR 组特异性蛋白质主要参与新陈代谢过程、PI3K-Akt 信号通路、TGF-β信号通路等其他癌症相关信号通路。 STRING 蛋白相互作用网络分析显示 ATPR 特异性蛋白质,如 EIF3A、EIF6、RPL3、RPL8、RPL13、RPL7A、RPL21、RPS3、RPS14、NACA、BTF3、NHP2L1、PPP2CA 蛋白与其他≥10个相关蛋白存在直接相互作用关系。结论 ATPR 组特异性中心蛋白质均参与对细胞生长增殖、诱导细胞分化和凋亡等过程的调控,这些蛋白质间的相互作用网络及特异性中心蛋白质是 ATPR 诱导 K562细胞分化作用的可能机制。
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新型全反式维甲酸衍生物4-氨基-2-三氟甲基苯基维甲酸酯对肝癌细胞株HepG2增殖的影响
目的 研究4-氨基-2-三氟甲基苯基维甲酸酯(ATPR)对人肝癌细胞株HepG2增殖的影响,并初步探讨其可能的作用机制.方法 选取HepG2细胞为研究对象,全反式维甲酸(ATRA)和ATPR分别作用细胞,应用MTT比色法测定细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期分布情况,Western blot法检测HepG2细胞内周期蛋白D(cyclinD)及细胞周期蛋白依赖性激酶4(CDK4)和CDK6蛋白表达量.结果 ATPR能够显著抑制HepG2细胞的增殖,将细胞阻滞在G0/G1期,呈浓度与时间依赖性(P＜0.05),并且同浓度、同一处理时间下,ATPR的抑制率更高(P＜0.05);此外,Western blot结果显示,ATPR较ATRA更能显著下调HepG2细胞中cyclinD和CDK6蛋白表达水平(P＜0.05),而CDK4蛋白水平在各组变化均不明显.结论 同等浓度下,ATPR抑制HepG2细胞增殖的效果明显强于ATRA,其机制可能是AT-PR通过下调cyclinD和CDK6蛋白的表达水平,造成G0/G1期阻滞,终导致肝癌细胞株HepG2的增殖抑制.
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Shp2表达沉默对ATPR诱导K562细胞分化作用的影响
目的 研究4-氨基-2-三氟甲基苯基维甲酸酯(AT-PR)在诱导慢性粒细胞白血病K562细胞分化过程中蛋白酪氨酸磷酸酶(Shp2)的作用.方法 ATPR作用K562细胞,CCK-8法检测细胞生长抑制率;Q-PCR和Western blot法检测Shp2表达;合成特异性荧光短链Shp2 siRNA链,抑制Shp2表达后,观察ATPR对K562细胞增殖和形态学影响.流式细胞术测定周期动力学和特异性分化指标CD235a表达,利用Western blot和Q-PCR法检测维甲酸受体RARs蛋白和mRNA的表达.结果 ATPR(10-5 mol/L)作用于K562细胞72 h时能显著地抑制增殖,且Shp2的表达明显下降.靶向沉默K562细胞中Shp2基因的佳序列为PT-PN-Homo-438,siRNA与Lipo的佳浓度比例为1∶0.05.与ATPR单独用药组比较,siRNA-Shp2+ ATPR组的K562细胞增殖活性升高,G0/G1期细胞所占比例降低,S期增多,CD235a的表达下降,形态学较空白组变化不大.Shp2转染沉默后用药组维甲酸受体RARs表达与单独用药组比较有差异.结论 Shp2沉默后,ATPR诱导K562细胞分化作用减弱,提示ATPR诱导K562细胞分化过程中,Shp2可能发挥着作用.
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4-氨基-2-三氟甲基苯基维甲酸酯的在体肠吸收研究
目的探讨新型全反式维甲酸( ATRA)衍生物4-氨基-2-三氟甲基苯基维甲酸酯( ATPR )的在体肠吸收特性。方法建立大鼠在体单向肠灌流模型并采用高效液相色谱( HPLC)法测定灌流液中的ATPR、ATRA的浓度,分别计算100、250、500、1000 mg/L ATPR在空肠及ATPR、ATRA在不同肠段的吸收速率常数( Ka )和有效渗透系数( Pef )。结果随着ATPR浓度的增加,其Ka、Pef值分别为(6.77依1.84)×10-3、(14.85依3.46)×10-3、(12.48依3.15)×10-3、(3.03依0.73)×10-3/s 和(0.61依0.17)×10-3、(1.41依0.25)×10-3、(1.23依0.30)×10-3、(0.29依0.07)×10-3 cm/s,均先增加后减小,存在高浓度饱和现象。灌流液在各肠段(十二指肠、空肠、回肠和结肠)的Ka 和Pef差异均无显著性(P>0.05),且与ATRA在4个肠段的Ka 和Pef比较差异无显著性(P>0.05)。结论 ATPR在大鼠肠道内的吸收机制可能为主动转运或易化扩散,且在全肠段内无特定吸收窗。
关键词： 4-氨基-2-三氟甲基苯基维甲酸酯 全反式维甲酸 肠吸收 高效液相色谱 -
4-氨基-2-三氟甲基苯基维甲酸酯抗肿瘤作用研究进展
基于良好的抗肿瘤增殖及诱导分化效应,维甲酸及其衍生物是近年来抗肿瘤药物开发与研究领域的重点内容之一。4-氨基-2-三氟甲基苯基维甲酸酯( ATPR)是以全反式维甲酸( ATRA)为基础设计合成的新型维甲酸衍生物,其抗肿瘤机制主要包括抑制肿瘤细胞增殖、诱导细胞周期阻滞,促进细胞分化,诱导细胞凋亡,抑制肿瘤细胞侵袭、转移,阻断肿瘤细胞信号转导通路等方面。与ATRA比较,ATPR在体内的半衰期更长,清除更慢,预示其极可能成为具有临床应用价值的抗肿瘤新药。
