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miR-483-5p在上皮性卵巢癌中的表达及其对顺铂敏感性的影响
背景与目的：顺铂是目前临床上治疗上皮性卵巢癌的一线化疗药物之一，但许多患者对铂类药物耐药。miR-483-5p在肺癌中过表达，然而目前尚未见miR-483-5p在上皮性卵巢癌中的研究。该研究检测miR-483-5p在上皮性卵巢癌组织和上皮性卵巢癌细胞系中的表达并探讨其对上皮性卵巢癌细胞对顺铂敏感性的影响。方法：采用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction，RTFQ-PCR)检测43例上皮性卵巢癌患者的肿瘤组织、8例正常卵巢组织和5种上皮性卵巢癌细胞系中miR-483-5p的表达情况；通过慢病毒上调或敲低卵巢癌细胞miR-483-5p表达，应用CCK-8实验检测miR-483-5p对上皮性卵巢癌细胞系顺铂敏感性的影响。结果：上皮性卵巢癌组织中miR-483-5p表达明显高于正常卵巢组织(P<0.01)。此外，miR-483-5p在晚期上皮性卵巢癌组织中的表达水平显著高于早期肿瘤组织(P<0.05)。5种上皮性卵巢癌细胞系中SKOV3细胞表达miR-483-5p的量低；miR-483-5p在上皮性卵巢癌顺铂耐药A2780/CP细胞中表达量高。上调SKOV3细胞中miR-483-5p的表达能够降低上皮性卵巢癌细胞对顺铂的敏感性，并下调p21及Bcl-2的表达；下调A2780/CP细胞miR-483-5p的表达能够增加细胞对顺铂的敏感性，并上调p21及Bcl-2的表达。结论：miR-483-5p在上皮性卵巢癌组织中高表达并对顺铂耐药，可以作为临床预测上皮性卵巢癌对顺铂敏感性的生物标志物之一。
关键词： 上皮性卵巢癌 miR-483-5p 顺铂 耐药 -
miR-483-5p 通过靶基因 ERK1调控人类颗粒细胞增殖凋亡平衡
目的：证明 miR-483-5p 及其靶基因 ERK1参与调控人类颗粒细胞增殖凋亡平衡。方法①体外培养人正常颗粒细胞，调控其 miR-483-5p 超表达，聚合酶链反应（PCR）及Western blot 法检测 ERK1的 mRNA 及蛋白表达情况；将包含野生型或突变型的 ERK1 mRNA 3′UTR 的 DNA 片段克隆在荧光素酶标记的质粒，共转染 miR-483-5p mimics、control-miR mimics 和野生型、突变型重组质粒，检测其颗粒细胞相对荧光素酶活性；②将 miR-483-5p mimics 及 ERK1 siRNAs单独及共同转染颗粒细胞，MTT 法及 TUNEL 法分别检测三种情况下卵巢颗粒细胞的增殖、凋亡情况。结果① miR-483-5p 超表达后，ERK1基因及蛋白表达均下降；与 control-Wt（野生型）转染组相比，miR-483-Wt 组的荧光素酶活性显著降低；miR-483-Mut（突变型）与 control-Mut 转染组间荧光素酶活性的比较差异无统计学意义；② miR-483-5p mimics与 ERK1 siRNAs 单独及共同转染颗粒细胞，三种转染条件下颗粒细胞增殖均显著受抑制、凋亡率显著升高，且三种作用效果差异无统计学意义。结论 miR-483-5p 通过直接与靶基因 ERK1结合，参与调控人类颗粒细胞增殖凋亡平衡。
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miR-483-5p通过上调IGF2基因转录促进肝癌细胞生长、迁移与侵袭
目的:探讨miR-483-5p对人胰岛素样生长因子2(IGF2)基因P3启动子驱动的mRNA(P3 mRNA)表达的影响及其在肝细胞癌发生发展中的作用.方法:(1)采用real-time PCR检测人肝癌细胞株Huh7、Hep3B、Bel-7402、HepG2和SMMC-7721,人正常肝细胞株HL-7702,83例人肝细胞癌组织和配对的癌旁组织,22例正常肝组织中miR-483-5p和P3 mRNA的表达水平,并应用Pearson相关分析评估P3 mRNA与miR-483-5p表达水平之间的关系.(2)将IGF2基因P3 mRNA的5'端非翻译区(5'UTR)克隆入pGL3启动子载体,构建P3 mRNA 5'UTR野生型(pGL3-P3-5'UTR-WT)及P3 mRNA 5'UTR突变型(pGL3-P3-5'UTR-MUT)重组萤光素酶报告质粒,将其分别与miR-483-5p mimic、miR-483-5p inhibitor及scrambled control共转染HeLa、293T及Huh7细胞,采用双萤光素酶报告系统检测萤光素酶活性.(3)分别将miR-483-5p mimic、miR-483-5p inhibitor及scrambled control 转染Huh7及Hep3B肝癌细胞,应用real-time PCR检测这2种肝癌细胞P3 mRNA表达水平的变化.(4)应用real-time PCR检测肝癌细胞Huh7及Hep3B的细胞核和细胞质中miR-483-5p的表达水平;应用核连缀实验(nuclear run-on assay)分析miR-483-5p对P3 mRNA转录的影响;应用RNA稳定性实验分析miR-483-5p对P3 mRNA稳定性影响.(5)应用体外细胞功能实验研究miR-483-5p对Huh7肝癌细胞生长、凋亡、迁移与侵袭能力的影响.结果:(1)5种肝癌细胞株miR-483-5p及P3 mRNA表达水平均明显高于正常肝细胞株HL-7702(P<0.01),肝细胞癌组织中miR-483-5p及P3 mRNA表达水平均明显高于配对的癌旁组织及正常肝组织(P<0.01);线性相关分析显示,在5种肝癌细胞株及肝细胞癌组织中,P3 mRNA表达水平均与miR-483-5p水平呈正相关.(2)萤光素酶实验显示,miR-483-5p与P3 mRNA 5'UTR的同源位点互补结合可促进P3 mRNA的表达.(3)瞬时转染实验显示,过表达miR-483-5p呈剂量依赖性促进Hep3B和Huh7肝癌细胞P3 mRNA表达水平的增高.(4)miR-483-5p表达实验显示,成熟miR-483-5p存在于肝癌细胞Hep3B和Huh7的细胞质和细胞核中;核连缀实验显示,miR-483-5p诱导Huh7肝癌细胞核中新生P3 mRNA转录;RNA稳定性实验表明,miR-483-5p不改变Huh7肝癌细胞P3 mRNA稳定性.(5)体外细胞功能实验显示,miR-483-5p促进Huh7肝癌细胞增殖,抑制其凋亡,并增强迁移与侵袭能力.结论:miR-483-5p高表达可部分通过上调IGF2基因P3 mRNA转录促进肝癌细胞生长、迁移与侵袭,进而参与肝细胞癌发生.
关键词： 肝细胞癌 miR-483-5p 胰岛素样生长因子2 细胞生长 细胞迁移 -
在肾脏高效导入miR-483-5p的方法
目的 研究在肾脏高效导入目的基因miR-483-5p的方法 .方法肾皮质注射miR-483-5p慢病毒:取35只C57BL/6J小鼠,随机分为空白对照组、慢病毒低剂量组(每侧肾皮质注射5μL慢病毒)和慢病毒高剂量组(每侧肾皮质注射20μL慢病毒),注射后7 d和21 d处死取材;构建可诱导全身过表达miR-483-5p的转基因小鼠;利用cre-loxp系统构建肾小管特异过表达miR-483-5p的转基因小鼠.3种模型小鼠利用全自动生化分析仪检测血清中尿素氮(BUN)水平判断肾功能,组织切片HE染色观察肾脏组织结构,TUNEL法检测肾脏细胞凋亡.Real-time qPCR检测miR-483-5p在肾脏的表达.结果 3种过表达miR-483-5p小鼠肾功能均正常,肾脏组织结构无明显变化,肾脏细胞无凋亡.肾皮质注射20μL LV3-miR-483-5p后21 d表达高(1.2±0.43 vs 8.6±1.09,P<0.001).可诱导全身过表达miR-483-5p的转基因动物在肾脏表达效率较低(0.9±0.09 vs 1.7±0.19,P<0.05),Cre-loxp转基因小鼠可实现在肾脏特异性表达,且效率较高(1.6±1.13 vs 12.36±3.89,P<0.05).结论 首次构建肾小管特异过表达miR-483-5p的转基因小鼠模型,实现在肾小管特异高效表达,且不影响肾脏结构及功能,可以作为研究miR-483-5p在肾脏中的作用及其机制的良好模型;C57BL/6J小鼠每侧肾皮质注射20μL LV3-miR-483-5p后21 d过表达miR-483-5p效率较高,不影响肾功能,对肾组织无损伤,且模型构建时间较短,为miR-483-5p在肾脏中的作用及其机制研究提供良好的实验模型.
关键词： 慢病毒 肾组织 转基因技术 miR-483-5p -
miR-483-5p在肝细胞肝癌患者血清中的表达及临床意义
目的 检测肝细胞肝癌(简称肝癌)患者血清中miR-483-5p水平并探讨其对肝癌的诊断价值.方法 收集2010年1月至2012年1月期间兰州大学第一医院收治的112例肝癌患者术前1d及术后30d以及85例慢性乙型病毒性肝炎(简称慢性乙肝)患者和56例健康对照人群的清晨空腹血清样本.应用实时定量荧光PCR法检测血清中miR-483-5p和miR-500a水平,按常规电化学法检测血清中甲胎蛋白(AFP)水平,应用操作者工作特征(ROC)曲线分析血清中miR-483-5p、miR-500a及AFP水平用于肝癌的诊断价值.结果 肝癌患者血清中miR-483-5p和miR-500a水平均明显高于慢性乙肝患者(P＜0.000 1)和健康对照人群(P＜0.000 1),但是其在慢性乙肝患者和健康对照人群间比较差异均无统计学意义(均P＞0.05).肝癌患者术后30 d时血清中miR-483-5p水平较术前明显下降(P＜0.000 1).miR-483-5p、miR-500a、AFP及miR-483-5p与AFP联合诊断肝癌的ROC曲线下面积(AUC)分别是0.74、0.66、0.81及0.92,当miR-483-5p临界值为2.842时的诊断灵敏度与特异度分别为74％和66％,当miR-500a的临界值为1.830时的诊断灵敏度和特异度分别是74％和51％,当AFP的临界值为20 μg/L时的诊断灵敏度与特异度分别为78％和70％,当miR-483-5p与AFP联合使用的临界值为3.78时的诊断灵敏度和特异度分别为81％和83％.miR-483-5p诊断AFP阳性(AFP＞20 μg/L)和AFP阴性(0～20 μg/L)肝癌患者的AUC值分别为0.78和0.83,二者的灵敏度和特异度分别为0.76、0.68和0.79、0.72.结论 miR-483-Sp在肝癌患者的血清中呈高水平,其诊断肝癌有一定准确性,与AFP联合可以提高其诊断价值,并且其对AFP阴性肝癌患者的诊断具有重要的补充作用.
关键词： miRNA 标志物 肝细胞肝癌 miR-483-5p 甲胎蛋白 -
血清miR-193a-3p,miR-337-5p和miR-483-5p在食管鳞状细胞癌诊断和预后中的应用
目的 探讨miR-193a-3p,miR-337-5p和miR-483-5p在食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)患者血清中的表达水平,评估其临床应用价值.方法 收集2011年6月～2014年5月南京军区南京总医院及徐州市肿瘤医院住院的63例ESCC患者术前、术后血清及随访信息,同时收集63例年龄、性别相匹配的健康体检者血清作为正常对照.利用TaqMan低密度芯片方法筛选出ESCC患者中异常表达的miRNA;实时荧光定量PCR法验证芯片检测到的ESCC中明显上调的miR-193a 3p,miR-337-5p以及文献报道在口腔鳞状细胞癌(OSCC)表达上调的miR-483-5p;后评价它们的诊断和预后价值.结果 与健康对照相比,ESCC患者血清miR-193a-3p (0.459±0.339 vs 0.195±0.084),miR-337-5p (5.686±5.211 vs 2.476±0.808)和miR-483-5p(32.545±22.479 vs 19.509±10.601)的相对含量均显著升高(U值分别为591,605和1037,P值均＜0.0001),且在患者术后明显降低(P值均＜0.05);三种miRNA的ROC AUC分别为0.851,0.848和0.739,三种miRNA组合在一起的AUC为0.873,均明显大于癌胚抗原;术后高表达miR-483-5p的患者较之低表达的生存期短(P=0.022).结论 血清miR193a-3p,miR 337 5p和miR-483-5p可作为ESCC患者诊断或预后评估的潜在分子标志物.
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miR-483-5p抑制BALB/c裸鼠体内胶质瘤生长
目的 研究miR-483-5p在体内对胶质瘤生长的影响.方法 建立裸鼠皮下胶质瘤移植瘤动物模型,分为U87细胞对照组及miR-483-5p组,于接种细胞后观测瘤体变化,并于24d后称量瘤体重量.应用免疫组化方法检测增殖细胞核抗原(PCNA)的表达,观察两组移植瘤细胞增殖变化情况.结果 miR-483-5p抑制胶质瘤移植瘤生长,其生长速度及瘤体重量与对照组比较有统计学差异(P ＜0.05);miR-483-5p使移植瘤PCNA指数下降,与对照组相比较有统计学差异(P＜0.05).结论 miR-483-5p能够抑制裸鼠脑胶质瘤PCNA表达并抑制瘤体生长.
关键词： 胶质瘤 miR-483-5p PCNA
