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肝星状细胞条件培养基对肝癌细胞PLC/PRF/5耐药性的影响及其机制
目的:探讨肝星状细胞条件培养基(hepatic stellate cell conditioned medium,HSC-CM)对人肝癌PLC/PRF/5细胞耐药性的影响及其可能的机制.方法:用无血清RPMI 1640培养肝星状细胞LX-2,使其在缺营养的环境下活化,收集其条件培养上清即为HSC-CM.PLC/PRF/5细胞在HSC-CM条件下培养24 h后,顺铂处理12 h或24 h,采用流式细胞术检测PLC/PRF/5细胞的凋亡情况,MTT法检测PLC/PRF/5细胞的增殖,real-time PCR检测PLC/PRF/5细胞上皮间质转化(epithelial mesenchymal transition,EMT)相关基因的表达水平.结果:顺铂组12和24h两个时间点PLC/PRF/5细胞的凋亡率为(22.34±1.12)％和(26.78±1.56)％；HSC-CM+顺铂组细胞的凋亡率为(17.22±1.42)％和(21.52±1.76)％,顺铂组细胞凋亡率显著高于HSC-CM+顺铂组(P＜0.05).同在这两个时间点,顺铂组和HSC-CM+顺铂组PLC/PRF/5细胞的增殖活性分别为(68.65±2.56)％和(79.47 ±1.43)％,(46.54 ±3.65)％和(62.77±2.89)％,HSC-CM+顺铂组细胞增殖活性均高于顺铂组(P＜0.05).Real-time PCR结果显示,与顺铂组相比较,HSC-CM+顺铂组PLC/PRF/5细胞中上皮标记物钙黏蛋白(E-cadherin)的表达下降(P＜0.05),而间质细胞标记物神经黏附素(N-cadherin)、波形蛋白(vimentin)以及EMT相关转录因子Snail和ZEB1的表达显著上调(P＜0.01).结论:HSC-CM可能通过诱导PLC/PRF/5细胞发生EMT,从而增强PLC/PRF/5细胞对顺铂的抵抗作用.
关键词： 肝星状细胞条件培养基 肝癌 PLC/PRF/5细胞 化疗抵抗 上皮间质转化 -
淋巴细胞-肿瘤细胞形成cell-in-cell胞内嵌合结构的特征及意义
目的:探究淋巴细胞和肿瘤细胞形成cell-in-cell胞内嵌合结构的特征及意义.方法:以人肝癌细胞株PLC/PRF/5与人外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)形成cell-in-cell胞内嵌合结构为研究模型,采用流式细胞术分析淋巴细胞钻入肿瘤细胞形成cell-in-cell胞内嵌合结构的特征.利用流式分选技术分选出小鼠脾淋巴细胞与PLC/PRF/5细胞形成的cell-in-cell胞内嵌合结构,利用平板克隆形成实验检测cell-in-cell胞内嵌合结构对PLC/PRF/5细胞生物学行为的影响.结果:4h和8h时,以CD3/CD28抗体活化的PBMC对PLC/PRF/5细胞的伸入率分别为(15.75±1.28)％、(13.49±1.23)％,明显高于未活化PBMC的伸入率[(10.56±0.57)％,(1 1.38±0.97)％；P＜0.05]；且活化的PBMC在4h时的伸入率明显高于未活化PBMC在8h时的伸入率(P＜0.05).小鼠脾淋巴细胞伸入PLC/PRF/5细胞形成cell-in-cell胞内嵌合结构后,PLC/PRF/5细胞的克降形成率明显高于未形成cell-in-cell胞内嵌合结构的PLC/PRF/5细胞[(32.25±2.32)％ vs(21.92±2.02)％,P＜0.05].结论:活化后PBMC伸入PLC/PRF/5细胞形成cell-in-cell胞内嵌合结构的比率升高、时间提前,同时形成胞内嵌合结构的肿瘤细胞在体外克隆形成能力增强.
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6MV-X射线对肝癌细胞周期进程的影响
目的 研究人肝癌细胞对6MV-X线放射敏感性与细胞周期进程间的联系.方法 用流式细胞术检测4Gy 6MV-X线照射后不同时间以及不同剂量HepG2和PLC/PRF/5两种细胞的细胞周期分布状况.结果 4Gy 6MV-X线照射后24 h,HepG2细胞凋亡率高于PLC/PRF/5细胞,分别为(7.61±0.77)％和(5.63±0.87)％(P＜0.05),且随时间和剂量增加,差异越显著;HepG2细胞受4Gy照射后12h,G0/G1比例下降,后逐渐上升,G2/M期比例增高,随后逐渐下降,0～6 Gy照射24h后,G0/G1期比例逐渐上升,G2/M期比例逐渐下降;PLC/PRF/5细胞G2/M期比例随照射后时间延长及照射剂量增加而增高,G2期阻滞更为明显.结论 HepG2细胞对放射更为敏感,0～6 Gy 6MV-X线照射可以改变HepG2与PLC/PRF/5细胞周期进程,HepG2细胞发生G1和G2期阻滞,PLC/PRF/5发生G2期阻滞.
关键词： X线 HepG2细胞 PLC/PRF/5细胞 细胞周期 肝癌
